INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-254420.02
Rev.: Junho de 2003
BD Rice Extract Agar
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O meio BD Rice Extract Agar é usado para diferenciar a Candida albicans de outras espécies
de Candida, baseado na formação de clamidósporos.
PRINCÍPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO
Método microbiológico.
O Rice Extract Agar (Agar de Extracto de Arroz) foi descrito pela primeira vez por Taschdjian.1
Os clamidósporos foram observados de forma consistente e abundante neste meio,
17 a 24 h após a inoculação com Candida albicans. Em estudos posteriores, demonstrou-se
que a adição do polisorbato 80 ao Agar de Extracto de Arroz aumentava a formação de
clamidósporos por C. albicans.2,3 Taubert and Smith recomendavam a utilização de Agar de
Extracto de Arroz no diagnóstico da candidíase vulvovaginal.4
O meio suplementado com polisorbato 80 é a fórmula do BD Rice Extract Agar. Sendo um
meio para diferenciação, não deve ser usado para o isolamento das várias espécies de
Candida, directamente em amostras clínicas, mas deve ser usado apenas com culturas puras.
Após a inoculação, foi aplicada uma cobertura de vidro ao agar, cobrindo a maior parte do
inóculo.
No meio BD Rice Extract Agar, o extracto de arroz constitui a única fonte de nutrientes. Esta
carência de nutrientes juntamente com condições de cultura deficientes em oxigénio (cobertura
do inóculo com lamelas de cobertura) cria um ambiente deficiente que induz a formação de
formas morfológicas específicas (clamidósporos e pseudomicélios, em particular). A adição de
polisorbato 80 estimula ainda mais a formação de clamidósporos, devido ao seu conteúdo em
ácido oleico.
REAGENTES
BD Rice Extract Agar
Fórmula* por Litro de Água Purificada
Arroz branco, Extracto de (sólidos) 5,0 g
Polisorbato 80
10,0 mL
Agar
20,0 g
pH 6,6 ± 0,2
*Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho.
PRECAUÇÕES
. Apenas para uso profissional.
Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração,
secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.
Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os
procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de
eliminação do produto usado.
ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8ºC, dentro do
invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubação recomendado.
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As placas são fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas
placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em
local limpo a uma temperatura entre 2 e 8ºC.
CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR
Inocular as placas contendo as estirpes mencionadas na Tabela abaixo, fazendo incisões na
superfície do agar com uma agulha ou fio de inoculação. Cobrir a área inoculada com lamelas
de cobertura estéreis. Incubar a uma temperatura entre 23 e 28ºC ou à temperatura ambiente
durante 18 a 48 h. Observar ao microscópio o aparecimento de clamidósporos, usando uma
ampliação de 100x e focando a linha de inoculação.
Estirpes
BD Rice Extract Agar
Candida albicans ATCC 10231 Crescimento com clamidósporos
Candida krusei ATCC 34135
Crescimento sem clamidósporos
Não inoculadas
Aguadas, tonalidade cinzenta a âmbar muito claro, opaca
PROCEDIMENTO
Material fornecido
BD Rice Extract Agar (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlados.
Material não fornecido
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário.
Tipos de amostra
O BD Rice Extract Agar é um meio para diferenciação e não deve ser utilizado para o
isolamento de espécies de Candida directamente em amostras clínicas (ver também
CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO).
Procedimento do teste
Escolher uma colónia isolada da placa de isolamento que contenha colónias de leveduras, por
exemplo, do BD Sabouraud Glucose Agar ou de qualquer outro meio de isolamento para
fungos; em seguida, semear no BD Rice Extract Agar, fazendo incisões na superfície da agar
com uma ansa de inoculação ou um arame. Em seguida, cobrir a área inoculada com lamelas
de cobertura estéreis. Incubar a uma temperatura entre 23 e 28ºC ou à temperatura ambiente
durante 18 a 48 h.
Resultados
Ao fim de 18 a 48 h de incubação, observar ao microscópio o aparecimento de clamidósporos,
usando uma ampliação de 100x e focando a linha de inoculação. Muitas das estirpes da C.
albicans incluindo a C. Stellatoidea terão formado clamidósporos típicos. Consultar a bibliografia
para avaliação do teste.4-7
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
O meio BD Rice Extract Agar é usado na detecção de clamidósporos para a diferenciação da
Candida albicans e da “Candida stellatoidea de outras espécies de leveduras.6
O meio não pode ser usado para o isolamento das várias espécies de Candida ou de outros
fungos, directamente em amostras clínicas.
O polisorbato 80 aumenta a produção de clamidósporos de Candida albicans e Candida
stellatoidea, no entanto, também aumenta a formação de clamidósporos em outras espécies de
Candida.
A Candida dubliniensis também apresenta resultados positivos no teste do tubo germinativo e
produz clamidósporos.8 As outras leveduras, para além da espécie Candida, poderão produzir
um pseudomicélio. Recomenda-se a utilização de identificação bioquímica para todas as
estirpes que não produzam tubos germinativos ou para as estirpes que não produzam tubos
germinativos nem pseudomicélios, ou no caso de resultados ambíguos.
Deste modo, e uma vez que os critérios morfológicos não são suficientes para a identificação
desta e de outras espécies, deverão ser realizados mais testes para uma identificação
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completa.8 O BD CHROMagar Candida é recomendado, quer para o isolamento selectivo dos
fungos, quer para a identificação da Candida comum.
Devem evitar-se temperaturas de incubação elevadas, dado que os clamidósporos não se
formam a 37ºC.
O BD Rice Extract Agar é um meio mínimo. Por este motivo, o crescimento neste meio é
bastante fraco, quando comparado com os meios utilizados no isolamento de fungos.
BIBLIOGRAFIA
1. Taschdjian, C. L. 1953. A simple prepared identification medium for Candida albicans.
Mycologia 45:474.
2. Taschdjian, C. L. 1957. Routine identification of Candida albicans: Current methods and a
new medium. Mycologia 49:332.
3. Kelly, J. P., and F. Funigiello. 1959. Candida albicans: A study of media designed to promote
chlamydospore production. J. Lab. Clin. Med. 53:807-809.
4. Taubert, H. D., and A. G. Smith. 1960. The clinical use of Taschdjian’s medium in the
diagnosis of vulvovaginal candidiasis. J. Lab. Clin. Med. 55:820- 828.
5. Cooper, and Silva-Hutner. 1985. In Lennette, Balows, Hausler, and Shadomy (ed.), Manual
of clinical microbiology, 4th ed. ASM, Washington, D.C.
6. MacFaddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical
bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, MD.
7. Larone, D.H. 1995: Medically important fungi. A guide to Identification, 3rd edition. American
Society for Microbiology, Washington D.C.
8. Hazen, K.C., and S.A. Howell. 2003. Candida, Cryptococcus, and other yeasts of medical
importance. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington,
D.C.
EMBALAGEM/APRESENTAÇÃO
BD Rice Extract Agar
No. de cat. 254420
Meios em placas prontos a usar, 20 placas
INFORMAÇÕES ADICIONAIS
Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
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 2003 Becton, Dickinson and Company
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