Nome do exame: Fibrose Cística – Análise de 97 mutações (Pré-Natal), Teste de DNA
Código:
• FCP
Sinonímias:
• FC;
• Mucoviscidose;
• Doença Fibrocística do Pâncreas.
Prazo para resultado:
• 14 a 29 dias.
Coleta, processamento, estocagem e envio do material biológico:
• Material: Vilosidades Coriônicas - Através da data da última menstruação ou ecografia recente,
verificar se a gestante está na 12ª semana de gestação, período ideal para a coleta de
vilosidades coriônicas, apesar desta poder ser coletada entre a 11ª e a 13ª semana de gestação.
Coletar 25 mg de vilosidade coriônica numa seringa estéril, com meio de cultura de células (o
meio de cultura de células poderá ser fornecido pelo Genetika, mediante solicitação). Remeter o
material refrigerado, em gelo reciclável, sem que a amostra entre em contato direto com o gelo,
via SEDEX. Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE ao Genetika, devendo
chegar em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta;
• Material: Líquido Amniótico - Através da data da última menstruação ou ecografia recente,
verificar se a gestante está na 16ª semana de gestação, período ideal para a coleta do líquido
amniótico, apesar deste poder ser coletado da 15ª semana até o final da gravidez. Coletar 20 ml
de líquido amniótico - descartar o primeiro ml coletado - colocando em 2 seringas plásticas
estéreis com 10 ml cada, numerando a 1ª e a 2ª. Vedar bem a seringa com agulha descartável e
estéril. Remeter o material na própria seringa prendendo a agulha com esparadrapo, refrigerado
em gelo reciclável, sem que a amostra entre em contato direto com o gelo, via SEDEX.
Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE após a coleta, sendo ideal a chegada
no Genetika em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta;
• Material: Sangue Fetal - Através da data da última menstruação ou ecografia recente, verificar se
a gestante está entre a 18ª e a 22ª semana de gestação, período ideal para a coleta de sangue
fetal. Coletar 5 ml de sangue fetal em um tubo com EDTA. Remeter o material, em temperatura
ambiente, via SEDEX. Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE ao Genetika,
devendo chegar em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta;
• Evitar enviar amostra pré-natal na 6ª feira, preferindo sempre enviar na 2ª feira;
• Deve vir acompanhado as amostras de sangue dos pais (10 ml de sangue total em EDTA) para
controle de contaminação.
Informações necessárias para envio deste exame:
• Dados da gestante: Nome, idade, endereço, telefone, dados clínicos, idade gestacional;
• Dados do Médico: Nome, endereço e telefone;
• Termo de Consentimento informado livre e esclarecido;
• Tipo de material coletado;
• Dados específicos para este exame.
Causas de rejeição de amostras:
• Coleta, estocagem e/ou envio impróprio do material;
• Falta de documentos exigidos pelo Genetika, incluindo consentimento informado;
• Falta de dados do médico e/ou da gestante.
Metodologia:
• Extração de DNA de vilosidades trofoblásticas ou amniócitos ou linfócitos do sangue fetal,
seguida de reação em cadeia pela polimerase (PCR) + hibridização com sondas específicas para
as seguintes mutações no gene CFTR: ΔF508, ΔF311, ΔI507, A455E, A559T, C524X, D1152H,
D1270N, E60X, G178R, G330X, G480C, G542X, G551D, G85E, G91R, I148T, K710X, L206W,
M1101K, N1303K, P574H, Q1238X, Q359K/T360K, Q493X, Q552X, Q890X, R1066C, R1158X,
R1162X, R117C, R117H, R1283M, R334W, R347H, R347P, R352Q, R553X, R560T, S1196X,
S1251N, 1255X, S364P, S549I, S549N, S549R, T338I, V520F, W1089X, W1282X, Y1092X,
Y563D, 1078delT, 1161delC, 1609delCA, 1677delTA, 1717-1G>A, 1812-1G>A, 1898+1G>A,
1898+5G>T, 1949del84, 2043delG, 2143delT, 2183delAA>G, 2184delA, 2307insA, 2789+5G>A,
2869insG, 3120+1G>A, 3120G<A, 3659delC, 3662delA, 3791delC, 3821delT, 3849+10kbC>T,
3849+4A>G, 3876delA, 3905insT, 394delTT, 405+1G>A, 405+3A>C, 444delA, 574delA,
621+1G>T, 711+1G>T, 711+5G>A e 712-1G>T. (Raskin S, Phillips JA 3d, Kaplan G, et al. Cystic
fibrosis genotyping by direct PCR analysis of Guthrie blood spots. PCR Methods Appl. 2(2): 1546. 1992; Raskin S, Phillips JA 3d, Krishnamani MR, et al. DNA analysis of cystic fibrosis in Brazil
by direct PCR amplification from Guthrie cards. Am. J. Med. Genet. 1; 46(6): 665-9, 1993;
Kammesheidt A, Kharrazi M, Graham S, Young S, Pearl M, Dunlop C, Keiles S. Comprehensive
genetic analysis of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator from dried blood
specimens – implications for newborn screening. Genet. Med. Sep; 8(9): 557-62, 2006).
Estratégia da análise genética:
• PCR + hibridação com sondas específicas para 97 mutações no gene CFTR ou para uma ou
duas mutações já detectadas na família.
Valores de referência:
• Normal: sem mutação;
• Portador: com uma mutação;
• Alterado: com duas mutações.
Interpretação dos resultados:
• As 97 mutações pesquisadas correspondem a 74% das mutações encontradas em pacientes
caucasóides afetados pela Fibrose Cística e à 85% dos fibrocísticos na população brasileira.
Aproximadamente 26% de portadores não têm nenhuma destas 97 mutações. Entre os
indivíduos diagnosticados com FC, cerca de 7% não têm nenhuma destas 97 mutações, 38% têm
somente uma destas 87 mutações e 55% dos indivíduos têm duas destas 97 mutações;
• Um resultado alterado (ou positivo) indica que o feto possui duas mutações no gene para Fibrose
Cística;
• Um resultado normal (ou negativo) não exclui totalmente a possibilidade deste diagnóstico e
recomenda outras avaliações. Caso a mutação já tenha sido identificada nesta família, um
resultado normal praticamente exclui a possibilidade do feto vir a ser afetado por esta doença.
Sensibilidade/especificidade/taxa de detecção da análise:
• Este teste detecta 74% das mutações encontradas em caucasóides afetados na população
brasileira, a não ser que a mutação no gene CFTR já tenha sido detectada na família.
Indicações do exame:
• Diagnóstico pré-natal para famílias com risco elevado de terem gestações com fetos afetados
pela Fibrose Cística;
• Ultra-som fetal anormal sugestivo de FC.
Exames relacionados e oferecidos pelo Genetika:
• Fibrose Cística – Pesquisa de grandes deleções, Código FCA, Setor de Genética Molecular;
• Fibrose Cística – Análise de mutação já detectada na família, Código FCD, Setor de Genética
Molecular;
• Fibrose Cística – Análise de mutação já detectada na família (Pré-natal), Código FCM, Setor de
Genética Molecular;
• Fibrose Cística – Pesquisa da mutação ΔF508, Código FC1, Setor de Genética Molecular;
• Fibrose Cística – Pesquisa da mutação ΔF508 (Pré-natal), Código FC2, Setor de Genética
Molecular;
• Fibrose Cística – Análise da mutação ΔF508 em neonatos, FCN, Setor de Genética Molecular;
•
•
•
•
•
•
Fibrose Cística – Pesquisa de 97 mutações, Código FC7, Setor de Genética Molecular;
Fibrose Cística – Sequenciamento completo do gene CFTR, Código FCC, Setor de Genética
Molecular;
Fibrose Cística – Análise de ligação, Código A14, Setor de Genética Molecular;
Fibrose Cística – Painel para doenças freqüentes em judeus Ashkenazi, Código PA4, Setor de
Genética Molecular;
Agenesia Congênita de Vasos Deferentes – Seqüenciamento completo do gene CFTR, Código
Y01, Setor de Genética Molecular;
Teste do pezinho ampliado – Triagem neonatal, Código TPA, Setor de Genética Molecular.
Resumo da doença:
• A Fibrose Cística é a desordem autossômica recessiva severa mais comum em caucasóides,
afetando os órgãos de secreção, especialmente os pulmões e o aparelho digestivo. Na FC as
glândulas de secreção produzem muco nos pulmões que interfere na respiração e desencadeia
infecções crônicas, as quais resultam muitas vezes em irreparáveis danos ao pulmão. O muco
pode também afetar o pâncreas, causando problemas de digestão;
• A FC é o resultado de defeitos no gene regulador de condução transmembrana da fibrose cística
(CFTR). O gene CFTR está localizado no cromossomo 7 e está envolvido com a regulação de
cloro. Existem mais de 1500 mutações descritas no gene CFTR, sendo que a maioria delas é
rara. Destas, 86 mutações testadas neste exame correspondem a 74% das mutações
encontradas em caucasóides afetados pela Fibrose Cística na população brasileira;
• A incidência de FC em euro-brasileiros é de 1 em 7.576, sendo que 1 em cada 44 eurobrasileiros é portador de uma mutação. Já para afro-brasileiros, a incidência de fibrocísticos é de
1 em 14.085 e de portadores de uma mutação é de 1 a cada 60 indivíduos (Raskin S et al.
Incidence of Cystic Fibrosis in five different states of Brazil as determined by screening of ΔF508
mutation at the CFTR gene in newborns and patients. Journal of Cystic Fibrosis, 2007 – in press).
Benefícios advindos da realização do exame:
• Confirmar a hipótese diagnóstica de fetos em risco;
• Prevenção de complicações futuras;
• Melhora na capacidade de prognosticar, baseada na comparação com outros casos da doença
descritos na literatura;
• A confirmação do diagnóstico pré-natal pode alterar a conduta médica para o feto e permite
suspender condutas e terapias inadequadas e avaliar possíveis terapias específicas para esta
doença;
• Permite o aconselhamento genético adequado para futuras gestações deste casal.
Vantagens competitivas do Genetika:
• O Genetika é o primeiro laboratório brasileiro de apoio especializado em genética a obter o
Certificado de Qualidade ISO 9001/00 e possui mais de uma década de experiência na área
de genética, já tendo realizado milhares de exames laboratoriais de genética;
• Aconselhamento genético pré e pós-exame, feito por Médico especialista em Genética Clínica;
• Dedica toda a sua infra-estrutura para realizar exclusivamente exames da área de genética
médica;
• O resultado do exame é facilmente compreendido e no laudo constam a metodologia utilizada,
interpretação e conclusão. O diretor do laboratório revisa todos os resultados e assina o laudo
final. Os resultados são imediatamente transmitidos por telefone ou enviados via fax, e-mail e/ou
correio para o médico solicitante, sempre respeitando a privacidade e o sigilo das partes
envolvidas no teste;
• Possui profissionais qualificados para a realização dos exames, Biólogos e Bioquímicos com
Mestrado e Doutorado que realizam o processamento das amostras e analisam os resultados
obtidos;
• O Laboratório oferece uma tabela de exames com indicação dos testes mais adequados para
cada caso (por exemplo: uma mutação específica no gene, um painel de mutações ou o
seqüenciamento completo do gene);
•
•
As informações sobre os exames são facilmente obtidas via fax, telefone, Serviço de
Atendimento ao Cliente - SAC (ligação gratuita) ou pela internet (web site ou e-mail);
Possui laboratórios conveniados nas diversas localidades do País, que estão treinados para
realizar a coleta e envio das amostras biológicas à sede do Genetika.
Limitações do exame:
• Cerca de 26% das mutações em caucasóides brasileiros não são detectadas por este teste;
• Somente um gene implicado na doença será estudado. Mutações em outros genes não serão
detectadas. Mutações em outros códons e em partes não estruturais do gene não são
detectadas;
• O teste genético molecular de um membro da família afetado pode ser necessário para
determinar a mutação causadora da doença, presente na família;
• Todo procedimento de diagnóstico Pré-natal invasivo tem um risco à gravidez, com o risco de
necessitar de uma nova coleta de material fetal, portanto, o consentimento informado é exigido
em conjunto com o aconselhamento genético.
Especialidades médicas com interesse no exame:
• Andrologia;
• Clínica Médica;
• Gastroenterologia;
• Gastroenterologia Pediátrica;
• Neonatologia;
• Obstetrícia;
• Pediatria;
• Pneumologia;
• Pneumologia Pediátrica;
• Reprodução Humana;
• Urologia.
Referências bibliográficas preliminares:
• Raskin S, Pereira-Ferrari L, Reis FC, Abreu F, Marostica P, Rozov T, Cardieri JM, Ludwig N,
Valentin L, Rosário Filho NA, Camargo Neto E, Lewis E, Giugliani R, Diniz EMA, Culpi L, Phillipis
III JÁ, Chakraborty R. Incidence of Cysitic Fibrosis in five different states of Brazil as determined
by screening of ΔF508 mutation at the CFTR gene in newborns and patients. Journal of Cystic
Fibrosis, 2007 – in press.
• Kammesheidt A, Kharrazi M, Graham S, Young S, Pearl M, Dunlop C, Keiles S. Comprehensive
genetic analysis of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator from dried blood
specimens – implications for newborn screening. Genet. Med. Sep; 8(9): 557-62, 2006
• Slack C, Lurix K, Lewis S, Lichten L. Prenatal genetics: the evolution and future directions of
screening and diagnosis. J. Perinat. Neonatal Nurs. Jan-Mar; 20(1): 93-7, 2006.
• Ormond K. Implementing prenatal screening for cystic fibrosis in routine obstetric practice. Am. J.
Obstet. Gynecol. Mar; 194(3): 904, 2006.
• Konialis CP, Hagnefelt B, Kazamia C, Karapanou S, Pangalos C. CFTR DeltaF508 Mutation
Detection from Dried Blood Samples in the First Trimester of Pregnancy: A Possible Routine
Prenatal Screening Strategy for Cystic Fibrosis? Fetal Diagn. Ther. Sep 22; 22(1): 41-44, 2006.
• Accurso FJ, Sontag MK, Wagener JS. Complications associated with symptomatic diagnosis in
infants with cystic fibrosis. J. Pediatr. Sep; 147(3 Suppl): S37-41, 2005.
• Gonzalez-Gonzalez C, Garcia-Hoyos M, Trujillo-Tiebas MJ, Lorda-Sanchez I, de Alba MR,
Infantes F, Gallego J, Diaz-Recasens J, Ayuso C, Ramos C. Application of fetal DNA detection in
maternal plasma: a prenatal diagnosis unit experience. J. Histochem. Cytochem. Mar; 53(3): 30714, 2005.
• Musci TJ. Screening for single gene genetic disease. Gynecol Obstet Invest. 60(1): 19-26, 2005.
• Raskin S, Pereira L, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Valentim L, Phillips JA 3rd, Allito B, Heim RA,
Sugarman EA, Probst C, Faucz F, Culpi L. High allelic heterogeneity between Afro-Brazilians and
Euro-Brazilians impacts cystic fibrosis genetic testing. / Genet Test. Fall; 7(3): 213-8, 2003.
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Goloni-Bertollo EM, Rossit AR, Junior JB, Fett-Conte AC, Raskin S. CFTR molecular analysis
reveals infrequent allele frequencies in nine cystic fibrosis patients from Sao Paulo State, Brazil. /
Hum. Biol. Jun; 75 (3): 393-8, 2003.
Raskin S, Phillips JA, Kaplan G, McClure M, Vnencak-Jones C, Rozov T, Cardieri JM, Marostica
P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Pereira L, Faucz F, Gabardo J, Culpi L.
Geographic heterogeneity of 4 common worldwide cystic fibrosis non-DF508 mutations in Brazil. /
Hum Biol. Feb; 71(1): 111-21, 1999.
Marostica PJ, Raskin S, Abreu-e-Silva FA. Analysis of the delta F508 mutation in a Brazilian cystic
fibrosis population: comparison of pulmonary status of homozygotes with other patients. / Braz. J.
Med. Biol. Res. Apr; 31 (4): 529-32, 1998.
Raskin S, Phillips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Rozov T, Cardieri JM,
Marostica P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Culpi L. Cystic fibrosis in the
Brazilian population: DF508 mutation and KM-19/XV-2C haplotype distribution. / Hum Biol. Aug;
69(4): 499-508, 1997.
Raskin S, Philips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Dawson E, Rozov T,
Cardieri JM, Marostica P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Culpi L. Regional
distribution of cystic fibrosis-linked DNA haplotypes in Brazil: multicenter study. / Hum Biol. Feb;
69(1): 75-88, 1997.
Raskin S, Phillips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Rozov T, Cardieri JM,
Marostica P, Abreu F, Giugliani R, et al. DNA analysis of cystic fibrosis in Brazil by direct PCR
amplification from Guthrie cards. / Am J Med Genet. Jul 1; 46(6): 665-9, 1993.
Raskin S, Phillips JA 3rd, Vnencak-Jones C, Dawson E, Kaplan G, McClure M. Utility of internal
markers to improve the accuracy of cystic fibrosis genotype analysis. / Biotechniques. Sep; 13(3):
372-4, 1992.
Raskin S, et al. Cystic fibrosis genotyping by direct PCR analysis of guthrie blood spots. PCR
methods and application. 2(2): 154-156, 1992.
Molina Cabanero JC, Perez Jurado LA, Raskin S, Vicario JL, Balas Perez A, Garcia Novo MD.
Simple method for cystic fibrosis carrier screening. / Lancet. Oct 17; 340 (8825): 983-4, 1992.