Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
Perfil metabólico do fungo endofítico Phomopsis cassiae em função
do tempo de cultivo.
Henrique Celso Trevisan*1 (PQ), Ângela Regina Araujo1 (PQ), Ângela Pinheiro Martins1 (IC), Lisinéia
Zanardi1 (ME), Vanderlan da Silva Bolzani1(PQ), Geraldo Humberto Silva (PQ) 1
1
UNESP, Instituto de Química, Rua Francisco Degni, s/n, Araraquara, SP, Brasil, 14800-900, e-mail:
[email protected]
Palavras Chave: fungos endofíticos, Phomopsis cassiae, metabólitos
Resultados e Discussão
A metodologia consistiu em acompanhar a fermentação em EM com agitação e temperatura controlada,
ao longo de 73 dias, preparando 2 extratos por semana, em acetato de etila. Os extratos foram analisados
quanto ao perfil cromatográfico por CLAE. Inicialmente atribuiu-se uma identificação numérica aos picos,
acompanhando-se a evolução com o tempo, com
base no tempo de retenção.
Os extratos foram preparados e analisados em duplicata, exibindo similaridade qualitativa com relação
aos picos, mas variações na amplitude e área, indicando variação na proporção entre os metabólitos
(Figura 1).
Utilizando como padrão metabólitos isolados em
uma fermentação em maior escala, por período de 28
29a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
35.363
9
mAU
Amostra 14A 275 nm
4
30.373
800
700
600
12
42.677
13
40.733
11
38.973
10
36.368
100
7
6
32.757
200
3
31.408
2
26.923
27.533
300
28.749
1
400
33.645
8
500
0
20
30
4
40
30.347
10
Amostra 14B 275 nm
8
33.629
9
6 7
3
32.760
100
31.475
2
26.888
27.507
1
200
28.389
300
10
11
13
42.667
400
38.733
35.349
500
36.173
mAU
0
10
20
30
40
Figura 1. Cromatogramas de um extrato em duplicata, mostrando atribuição numérica aos picos.
CH 3
Fr_09_08
0,30
A
B
média
HO
Pico 10
A
B
média
Fr_09_08
0,5
Pico 10
0,4
0,25
0,20
O
H3 C
massa calculada (mg)
H3 C
-1
Fungos endofíticos são microrganismos que vivem
sistematicamente no interior das plantas, possuindo
a capacidade de seqüestrar metabólitos que atuam
como defesa química, ou produzi-los como resposta
à pressão exercida por predadores e/ou patógenos.
Diante do grande potencial de produção de metabólitos secundários que estes possuem, ainda muito
pouco explorado quando comparado com espécies
vegetais, é de interesse o estudo químico destes
fungos. Em um trabalho preliminar envolvendo o estudo químico e biológico realizado com Phomopsis
cassiae, cultivado em caldo de batata e dextrose
(PDB) e extrato de malte (EM), foram isoladas várias
substâncias com atividade anticancerígena e antifúngica em potencial, evidenciando este fungo como um
produtor de substâncias bioativas.
É conhecido que a produção metabólica por microrganismos (fungos, bactérias, etc.) é dependente das
condições de cultivo (pH, temperatura, composição
do meio e tempo). Até o presente, baseando-se em
indicações da literatura, têm-se em geral adotado um
tempo de cultivo de 28 dias, sem analisar a produção
dos metabólitos ao longo da fermentação. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi um estudo da variação da produção metabólica de P. cassiae, objetivando estabelecer o tempo ótimo para a produção de
cada metabólitos desejado.
dias, identificou-se 7 deles nos extratos, cada um
associado ao pico correspondente. Os perfis de produção em função do tempo foram então expressos
em termos de concentração ou de produção total
(Figura 2).
concentração (mg mL )
Introdução
CH 3
0,15
0,10
0,3
0,2
0,1
0,05
0,0
0
0,00
0
10
20
30
40
50
60
70
10
20
80
30
40
50
60
70
80
tempo de incubação (dias)
tempo de incubação (dias)
Figura 2. Produção do metabólito associado ao pico 10 do cromatograma, como exemplo de um dos
sete avaliados.
Conclusões
CLAE foi uma técnica adequada para acompanhamento da produção de metabólitos. Com a metodologia usada pôde-se estabelecer o tempo ótimo e a
produção para cada metabólito (65 dias e
0,35mg/50mL de meio para o pico 10, como exemplo
(Figura 2)). No caso de metabólitos não isolados ou
identificados, o perfil de produção baseado no cromatograma pode auxiliar na escolha do tempo de fermentação mais adequado para sua produção, inclusive daqueles que foram gerados e depois desapareceram ao longo da fermentação.
Agradecimentos
Sociedade Brasileira de Química ( SBQ)
À FAPESP, pelo suporte financeiro.
25 a Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química - SBQ
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