Workshop sobre Fitoterápicos
CONTROLE DE QUALIDADE
Evelin E. Balbino
COFID/GTFAR/GGMED/ANVISA
Brasília, 31 de maio de 2010
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Análise Fiscal
Inspeção
Metodologia
Analítica
Lotes
Piloto
Lotes
Matéria-prima
Lotes
Industriais
Auditorias de registro
Testes
Estabilidade
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de qualidade
Objetivos:
identificação da planta ou seu derivado, através da
detecção de componentes característicos;
quantificação de um marcador ou atividade biológica;
detecção e quantificação de alguma substância tóxica ou
alguns contaminantes, como por exemplo os metais pesados e
contaminantes microbiológicos.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de qualidade
Qualidade do medicamento está diretamente relacionada à
qualidade dos insumos farmacêuticos empregados em sua
produção;
Medicamento de qualidade, deve fornecer a dose segura e
eficaz do fármaco.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Farmacopéia Brasileira
Código Oficial Farmacêutico do país;
Requisitos mínimos de qualidade para fármacos, insumos, drogas
vegetais, medicamentos e produtos para a saúde;
Parâmetros para controle de qualidade das plantas medicinais e/ou seus
derivados;
Uso obrigatório para os que fabricam, manipulam, fracionam e
controlam produtos farmacêuticos;
Parâmetro para as ações da vigilância sanitária, como: registro, inspeção
e análise fiscal.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Portaria nº 782/08
Competência da ANVISA promover o desenvolvimento, a revisão e a
atualização da FB e seus produtos.
• Atualizar métodos e verificar a sua reprodutibilidade;
• Harmonizar os trabalhos da FB com as principais Farmacopéias
internacionais;
• Publicar o Código Farmacêutico Oficial atualizado em um compêndio
único.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
ampliação do números de métodos específicos, precisos,
exatos e robustos;
monografias revisadas e atualizadas;
menor investimento em pesquisa, desenvolvimento e
validação de novos métodos de controle de qualidade;
agilidade na análise dos processos de registro e resultados
apresentados durante as inspeções.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de qualidade
RDC 14/10 – registro de medicamentos fitoterápicos
• emprego exclusivo de matérias-primas ativas vegetais;
• drogas vegetais e seus derivados;
• formas farmacêuticas;
• análise qualitativa e quantitativa.
RDC 10/10 – notificação de drogas vegetais
• droga vegetal para decocção, infusão ou maceração;
• sachê ou caixa;
• análise qualitativa – validade 1 ano;
• análise qualitativa e quantitativa – validade superior a 1 ano.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Relatório Técnico
RDC 14/10
Salix alba
nomenclatura botânica completa;
parte da planta;
layout de bula, rótulo e embalagem;
local de fabricação;
dados de produção;
controle de qualidade;
segurança e eficácia.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Relatório de Controle de
Qualidade
Zingiber officinale
RDC 14/10
Informações gerais
Droga vegetal
Derivado vegetal
Produto acabado
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Informações Gerais
Cynara scolymus
I - controle da Encefalopatia Espongiforme Transmissível (EET);
II - estudo de estabilidade acelerada de três lotes-piloto e estudos de longa duração em
andamento, ou estudo de estabilidade de longa duração concluído;
III - referências farmacopeicas consultadas e reconhecidas pela ANVISA.
RDC 37/09 - na ausência de monografia oficial inscrita na Farmacopéia Brasileira,
poderá ser adotada monografia oficial, última edição, de um dos seguintes compêndios
internacionais: Farmacopéia Alemã, Americana, Argentina, Britânica, Européia,
Francesa, Internacional (OMS), Japonesa, Mexicana e Portuguesa.
- descrição detalhada das metodologias utilizadas, com métodos analíticos validados,
indicando a fonte de desenvolvimento.
RE 899/03 - "Guia de validação de métodos analíticos e bioanalíticos"
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Droga Vegetal
I - testes de autenticidade, caracterização organoléptica,
identificação macroscópica e microscópica;
II - descrição da droga vegetal;
Farmacopéias reconhecidas pela ANVISA
Ausência publicação técnico-científica indexada
laudo de identificação emitido por profissional habilitado
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Baccharis trimera
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Baccharis trimera
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Droga Vegetal
Pimpinella anisum
Stryphnodendron adstringens
III - testes de pureza e integridade;
Cinzas totais: quantidade de cinza fisiológica e a não fisiológica;
Cinzas insolúveis em ácido clorídrico: teor de sílica e componentes silicosos
da droga. Teor acima do preconizado indica procedimentos de coleta
inadequados;
Umidade e/ou perda por dessecação: água estimula crescimento
microbiano, de fungos e insetos, reações de hidrólise e ação de enzimas, com
deterioração de constituintes da droga. Em geral, de 8 a 14%;
Matérias estranhas: outras partes da planta, elementos estranhos e
impurezas de natureza mineral;
Contaminantes microbiológicos;
Pesquisa de metais pesados.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Peumus boldus
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Microbiológico
Contaminação microbiana de um produto não estéril
(especialidade e matéria-prima farmacêutica) pode conduzir
não somente à sua deterioração, com as mudanças físicas e
químicas associadas, mas também ao risco de infecção para o
usuário.
Produtos farmacêuticos orais e tópicos não estéreis
(comprimidos, suspensões, cremes, etc.) devem realizar
controles de contaminação microbiológica.
[email protected]
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Microbiológico
NOVO
CP 25/10: Adequação dos métodos farmacopeicos
eliminação de atividade antimicrobiana das amostras;
necessidade de métodos alternativos, como neutralização, diluição
filtração;
ou
eficácia e ausência de toxicidade do agente inativante e/ou substâncias
tensoativas utilizadas na preparação das amostras;
capacidade nutritiva dos meios de cultura;
microrganismos para o teste de recuperação microbiana;
controle negativo – esterilidade dos meios de cultura.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Droga Vegetal
IV - método de estabilização, secagem e conservação utilizados;
V - método para eliminação de contaminantes e a pesquisa de eventuais
alterações;
VI - avaliação da ausência de aflatoxinas;
VII - local de coleta;
VIII - perfil cromatográfico ou prospecção fitoquímica;
IX - análise quantitativa do(s) marcador(es) ou controle biológico.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Análise qualitativa
Matricaria recutita
Top of the plate
Guaiazuleno: vermelho
Bornyl-acetate:
marrom amarelado
Borneol: marromamarelado
Reference solution
Farm. Eur.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
Terpenos: zonas vermelhas
Zona marrom
Zonas vermelho-violetas:
uma das quais bisabolol
Matricina: azul
Test solution
USP
www.anvisa.gov.br
Análise quantitativa
Matricaria recutita
USP – inflorescências secas. Contém no mínimo 0,4 % de óleo
essencial azul e no mínimo 0,3% de apigenina-7-glicosídeo e
0,15% de derivados do bisabolano, calculado como levomenol.
Farm. Eur. – capítulos florais secos. Contém no mínimo 0,4 % de
óleo essencial azul e no mínimo 0,25% de apigenina-7-glicosídeo.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Análise qualitativa
Heterotheca inuloides
Top of the plate
Ácido cafeico: azul
Manchas marromamareladas e verdeamarelada
Calendula officinalis
Ácido clorogênico:
fluorescente
Mancha fluorescente
Rutina: amarelo alaranjado
Arnica montana
Mancha azul
Reference solution
Não apresentar
manchas amarela
Arnica montana
Farm. Eur.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Análise quantitativa
Arnica montana
Farm. Eur. – capítulos florais secos, contendo no mínimo 0,4% de
sesquiterpenos lactônicos totais expressos em tiglato de
helenalina.
F.B. CP 38/2009 – capítulos florais secos, contendo no mínimo
0,4% de sesquiterpenos lactônicos totais expressos em tiglato de
helenalina.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Análise quantitativa
Valeriana officinalis
USP – partes subterrânes, incluindo rizoma, raíz e estolões. A
droga vegetal (seca) contém no mínimo 0,5 % de óleo essencial
e no mínimo 0,05% de ácido valerênico.
Farm. Eur. - partes subterrânes inteiras ou fragmentadas,
incluindo rizoma, raíz e estolões. A contém no mínimo 0,5 % de
óleo essencial na droga vegetal inteira (seca), no mínimo 0,3%
de óleo essencial na droga vegetal fragmentada (seca) e no
mínimo 0,17% de ácidos sesquiterpênicos expressos como ácido
valerênico (ácido valerênico + ácido acetoxivalerênico).
F.B. CP 24/2010 - semelhante à Farm. Eur.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Droga Vegetal
Valeriana officinalis
USP – partes subterrâneas, incluindo rizoma, raíz e estolões. A droga vegetal
(seca) contém no mínimo 0,5 % de óleo essencial. A quantificação deve ser
realizada com material recentemente e grosseiramente triturado.
Farm. Eur. - partes subterrânes inteiras ou fragmentadas, incluindo rizoma,
raíz e estolões. A droga vegetal inteira (seca) contém no mínimo 0,5 % de
óleo essencial. A droga vegetal fragmentada (seca) contém no mínimo
0,3% de óleo essencial.
Armazenagem da droga vegetal?
Inteira ou fragmentada?
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Baccharis trimera
Especificação
Referência
Resultados Lote 001
Caracteres organolépticos
Sabor amargo
F. B.
De acordo
Microscópico
farmacopeica
F. B.
De acordo
Macroscópico
farmacopeica
F. B.
De acordo
Cinzas totais
≤ 8%
F. B.
7,6%
Umidade
≤ 10%
F. B.
9,5%
Matérias estranhas
≤ 2%
F. B.
1,0%
Identificação
Mancha laranja e mancha
verde acima
F. B.
De acordo
Doseamento
≥ 1,4 ác. cafeicos totais
1,8-2,2% ác. cafeico
≤ 0,002%
F. B.
Esp. interna
F. B.
1,9%
Microbiológico
≤ 104 bactérias totais, ≤ 102
Enterobactérias e ≤ 102 fungos
Farm.
Internacional
≤102 Enterobactérias,
Bactérias e ≤10 fungos
Patógenos
Ausentes: Salmonella ssp, E.
Farm.
Internacional
Ausente
Metais pesados
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
coli, S. aureus.
≤ 0,002%
www.anvisa.gov.br
Derivado vegetal
I - solventes, excipientes e/ou veículos utilizados;
uso tradicional
literatura
estudo clínico
II - relação droga vegetal:derivado vegetal;
uso tradicional ou estudos clínicos - droga
vegetal
farmacopéias ou publicações técnico-científicas
- teor mínimo de marcador
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Derivado vegetal
III - testes de pureza e integridade;
contaminantes microbiológicos
monografia estipula limites;
Farm. Internacional: fungos totais - 10² UFC /g ou ml, bactérias totais
- 10³ UFC /g ou ml;
F. B. – ausência de microorganismos patógenos: Pseudomonas
aeruginosas, Staphylococcus aureus, Salmonella sp. e Escherichia coli.
metais pesados
F. B. - limite máximo de metais pesados 0,002%.
resíduos de solventes
exceto água e etanol.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Derivado vegetal
IV - método de eliminação de contaminantes e pesquisa de alterações;
V - caracterização físico-química do derivado vegetal;
extratos líquidos
caracterização organoléptica, resíduo seco, pH, teor alcoólico,
densidade.
extratos secos
umidade/perda por dessecação, solubilidade e densidade aparente.
óleos essenciais
densidade, índice de refração, rotação óptica.
óleos fixos
índice de acidez, de éster, de iodo.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Derivado vegetal
VI - avaliação da ausência de aflatoxinas;
VII - perfil cromatográfico ou prospecção fitoquímica;
VIII - análise quantitativa do(s) marcador(es) ou controle biológico.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Derivado vegetal: aquisição
derivado vegetal
Laudo de análise do fornecedor
I - nomenclatura botânica completa;
II - parte da planta utilizada;
III - solventes, excipientes e/ou veículos utilizados na extração do derivado;
IV - relação aproximada droga vegetal:derivado vegetal;
V - descrição do método para eliminação de contaminantes, quando
utilizado, e a pesquisa de eventuais alterações.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Produto acabado
I - perfil cromatográfico ou prospecção fitoquímica;
II - análise quantitativa do(s) marcador(es) específico(s) de cada
espécie ou controle biológico;
III - resultados dos testes realizados no controle da qualidade de
um lote do medicamento;
IV - especificações do material de embalagem primária;
V - controle dos excipientes.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Produto acabado
§ 1º Para associações de espécies vegetais em que a determinação quantitativa
de um marcador por espécie não é possível, poderá(ão) ser apresentado(s) o(s)
perfil(is) cromatográfico(s), que contemple(m) a presença de ao menos um
marcador específico para cada espécie na associação, complementado pela
determinação quantitativa do maior número possível de marcadores específicos
para cada espécie.
§ 2º A impossibilidade técnica de determinação quantitativa de um marcador para
cada espécie da associação deve ser devidamente justificada.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cromatografia de Camada Delgada
(CCD)
foto colorida de CCD – droga vegetal, derivado e produto acabado;
nº do lote das amostras e substância química de referência (SQR);
corrida paralela da solução teste e SQR especificadas na método;
utilizar todas SQR recomendadas pela monografia farmacopeica;
marcar linha inicial e final da corrida;
manchas bem definidas;
manchas de cor e posição semelhante à descrição na monografia.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cromatografia de Camada Delgada
•
Ácido
cafeico
Luteolinaglicosídeo
Ácido
clorogênico
Quercetina
Rutina
Cinarina
1-Padrão ácido cafeico
2-Padrão ácido clorogênico
3-Padrão cinarina
4-Extrato seco alcachofra Lote 3542
5- Padrão de rutina
6-Padrão de luteolina-glicosídeo
7-Comprimido Alcachofra Lote 0106
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
1
2
3
4
5
6
7
www.anvisa.gov.br
Validação de métodos analíticos
RDC 17/10 - Ato documentado que atesta que qualquer
procedimento, processo, equipamento, material, operação ou sistema
realmente conduza aos resultados esperados.
RE 899/03 - Demonstração da adequabilidade do método para a
determinação qualitativa e/ou quantitativa de fármacos e outras
substâncias em produtos farmacêuticos:
Especificidade
Linearidade
Intervalo
Precisão
Exatidão
Robustez
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Especificidade
RE 899/03 - Capacidade do método medir exatamente um composto em
presença de outros componentes como impurezas, produtos de degradação e
componentes da matriz.
matriz complexa do derivado vegetal – outros componentes ativos ou inativos
podem estar presentes;
excipiente;
produtos de degradação – condições de estresse (luz, calor, umidade, hidrólise
ácida/básica, oxidação...);
impurezas.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Espectrofotometria
Calendula officinalis
comparar a absorbância das soluções branco, placebo, padrão de referência
e amostra 100%;
solução de excipientes - evidenciar ausência ou absorvância reduzida no
comprimento de onda do método;
especificar a concentração de toda as soluções;
varreduras espectrais da solução teste e do padrão de referência devem ter
máximos de absorção similares;
detecção de um conjunto de componenntes que absorvem no comprimento
de onda em que o extrato apresenta o máximo de absorção.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Espectrofotometria
Padrão de
referência
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm
varreduras espectrais do
placebo e da amostra –
placebo: absorbância
mínima no comprimento
de onda do método.
Amostra a
100%
varreduras espectrais da
amostra e da SQR devem
ter máximos de absorção
similares – comprimento de
onda ideal do método.
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm
Placebo
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
Amostra a 100%
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm
www.anvisa.gov.br
Espectrofotometria
•
valiosa para identificação de grupos funcionais;
moléculas com ligações simples e duplas alternadamente (ligações conjugadas) absorção em comprimentos de ondas maiores;
quanto mais extenso for o sistema conjugado, mais longos serão os comprimentos de
onda absorvidos, podendo chegar à região do visível:
ultravioleta - faixa de 200 a 400 nm
visível - faixa de 400 a 800 nm
a posições dos máximos também são afetadas pelo solvente e por detalhes
estruturais da molécula contendo os cromóforos.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Espectros ultravioleta
•
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Espectrofotometria
Calendula officinalis
Espectros de absorção no ultravioleta como auxiliar na identificação;
Análise da absorvância para determinar a espécie química presente na amostra;
Detectar contaminações ou processos de degradação de matérias-primas pela
comparação dos espectros de absorção da amostra e do padrão da mesma;
Deve ser especificada a extensão da varredura, solvente, concentração da solução e
espessura da cubeta. Farm Bras 4ª ed
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Cataranthus roseus
mesmo tempo de retenção do marcador e do padrão de referência indicativo da identidade;
placebo não deve apresentar nenhum pico com o mesmo tempo de
retenção do marcador;
parâmetros cromatográficos: resolução, fator de retenção, fator de
separação e fator de cauda;
garantir a pureza dos picos cromatográficos;
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência
Phillantus niruri
garantir a pureza dos picos cromatográficos;
o espectro de absorção do marcador deve ser igual ao da substância
química de referência;
pureza dos picos - espectros em pontos diferentes de cada pico;
soluções contendo a substância a ser identificada, do padrão de
referência e de mistura dos dois em partes iguais, são
cromatografados nas mesmas condições, sucessivamente. A mistura
deve apresentar apenas um pico (no tempo de retenção de
interesse);
a relação entre os tempos de retenção da substância em exame, do
padrão e da mistura, e o tempo de retenção de um padrão interno
pode ser usado como um parâmetro de identificação;
coincidência de parâmetros de identidade sob 3 a 6 diferentes
conjuntos de condições cromatograáficas (fluxo da fase móvel,
composição da fase móvel, comprimento de onda, etc.);
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de qualidade
Perfil cromatográfico
a 280 nm
Cromatograma HPLC com detector de arranjo de fotodiodos
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
25,8
Detector de arranjo
de diodo: espectro
de absorção
Substância química de
referência
Concentração conhecida
Área do pico
correspondente
25,8
Amostra do
medicamento
Diluição conhecida –
concentração
semelhante SQR
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
Área do pico
correspondente
www.anvisa.gov.br
Perfis cromatográficos de
uma mesma amostra em
comprimentos de onda
diferentes
MTF – metoxiflavona
Padrão interno
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Comparação das
características espectrais
dos marcadores na solução
teste ( ) e SQR
correspondentes ( )
- Sobreposição dos
espectros de absorção.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
(
(
(
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
) Solução teste
) Mistura SQR
) Solução teste + SQR
www.anvisa.gov.br
10
20
10
30
20
40
30
50
40
50
Flavonóide x
min
200
200
225
250
275
300
325
350
375
nm
7,8
8
8,2
8,4 min
(88 of 88 spectra are within the threshold limit.)
993,110
5
(Selection automatic, 5)
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cromatografia a Gás
Symphytum officinale
o tempo de retenção indica fortemente a identidade, mas não
constitui identificação definitiva;
índice de Kovats ou índice de retenção – alcanos não ramificados
como padrões de referenciamento;
relação entre os tempos de retenção da substância em exame, do
padrão e da mistura, e o tempo de retenção de um padrão interno
pode ser usado como um parâmetro de identificação;
coincidência de parâmetros de identidade sob 3 a 6 diferentes
conjuntos de condições cromatográficas (temperatura, cargas de
coluna, adsorventes, eluentes, solventes de desenvolvimento,
derivados químicos vários, etc.);
placebo não deve apresentar nenhum pico com o mesmo tempo de
retenção do marcador.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Linearidade
As respostas analíticas são diretamente proporcionais às concentrações
das substâncias em estudo.
padrão de referência;
cinco concentrações diferentes;
intervalo de 80 a 120% da concentração teórica do teste;
equação da reta e tratamento estatístico dos resultados;
Coeficiente de correlação (r) ≥ 0,98.
Espectrofotômetro: leitura da absorbância X quantidade analito
Cromatografia líquida: área do pico X quantidade analito
Cromatografia gasosa: área ou altura do pico X quantidade analito
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Precisão
Avaliação da proximidade dos resultados obtidos em uma série de
medidas de uma amostragem múltipla de uma mesma amostra.
Amostra do produto acabado – etapas de extração e
interferência dos excipientes;
Repetibilidade: grau de concordância entre resultados de análise
individuais quando o procedimento é aplicado repetidamente a
múltiplas análises de amostra, em idênticas condições de teste.
Precisão intermediária: expressa a variação dentro de um
laboratório, como, dias diferentes, analistas diferentes e/ou
equipamentos diferentes, sobre amostras do medicamento;
Reprodutibilidade: comparação interlaboratorial.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Recuperação
A recuperação é um parâmetro de validação importante em
termos da sua repetibilidade e precisão intermediária, uma vez
que uma recuperação variável leva necessariamente a
imprecisão na análise. O mais importante é a precisão e a
exatidão da recuperação;
O nível de recuperação deve ser suficiente para não impactar
negativamente no limite de detecção e quantificação do analito;
No caso de recuperação baixa do analito, também pode-se
utilizar padrão interno.
Amostras e padrões devem ser
submetidos ao mesmo tratamento. Perde-se o analito na mesma
proporção que o padrão interno nas etapas de preparação por
compensação
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Exatidão
É a concordância dos valores experimentais com os verdadeiros.
Não existe placebo do medicamento fitoterápico – não existe
extrato sem marcador (placebo);
Adicionar quantidades conhecidas de padrão de referência, de
pureza definida, a uma solução do produto acabado;
Preparar uma solução do produto final a 50% e adicionar
quantidades adequadas de padrão de referência para obter as
concentrações teóricas de 80%, 100% e 120%;
Resultados dentro da faixa de linearidade;
Reta paralela à curva de linearidade realizada com padrão de
referência.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Exatidão
Senna alexandrina
Espectrofotometria – método F.B. (CP 24)
leitura 515 nm;
absorvância específica senosídeo B = 240;
teor de derivados hidroxiantracênicos calculados como senosídeo B;
utilizar metanol como solução branco.
Preparar uma solução do produto final a 50% e adicionar
quantidades adequadas de senosídeo B (padrão de referência) para
obter as concentrações teóricas de 80%, 100% e 120%;
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Robustez
Capacidade de um método não ser afetado por uma pequena e
deliberada modificação em seus parâmetros
marca de solvente;
temperatura;
variação do pH;
variação na composição da fase móvel;
fluxo da fase móvel;
diferentes lotes de fabricantes de coluna.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Adequabilidade de uso
•
•
F.B. 3ª edição
•
Teste geral do funcionamento do sistema analítico:
circuitos eletrônicos, equipamento, materiais, amostras e
operações analíticas;
Verificação da efetividade do sistema final de operações
– teste de adequabilidade antes do uso;
Dados confrontados com dados especificados na
monografia (ou validação da metodologia), como: precisão
interna, tempo de retenção, curva de calibração, resolução
e recuperação.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Adequabilidade de uso
•
•
•
USP
Para usar metodologia analítica farmacopeica é necessário
verificar sua adequação nas condições rotineiras de uso.
INMETRO
O laboratório deve confirmar que tem competência para
aplicar o método de modo apropriado e que atinge o
pretendido e que opera bem sob as condições normais de
uso.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Adequabilidade de uso
Padrão externo
Precisão e exatidão dependem da reprodutibilidade da injeção
da amostra;
Curva de calibração.
Adição de padrão interno
Relação entre a área do pico do componente em exame e o
padrão interno é comparada de um cromatograma para outro.
Absorvância no mesmo comprimento de onda do marcador,
tempo de retenção exclusivo;
Controla todas as etapas de extração;
Controla pequenas variações nos parâmetros da coluna e do
detector.
F.B. 3ª edição
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Metodologia: 1 g de droga ou extrato
Olhar o formulário de petição (FP):
Ex
1 cápsula, contém 100 mg de extrato seco de castanha da índia a 5% de escina.
100 mg de extrato
_________________
5 mg de escina
1000 mg
_________________
50 mg de escina
A massa (m) na fórmula será 50 mg
Precisão: relata o peso real da amostra pesada.
Ex 1007 mg
100 mg de extrato
1007 mg
_________________
_________________
5 mg de escina
x
x = 50,35 mg
X = valor esperado
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
1 g de droga pulverizada em 100 mL
Evaporar 30 mL
Dissolver o resíduo em 50 mL de ácido acético glacial(completar o volume)
Transferir 2 mL e adicionar 4 mL de cloreto férrico (volume final 6 mL)
Fator de diluição (FD) = m x 30 x 2 = m
100 50 6
500
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
De acordo com a metodologia o fator de diluição é igual a 500 e a absorção específica da
escina A(1%,1cm) é de 60, então para uma solução de 1%, ou seja, 1 g/100 mL, deve apresentar
leitura de absorbância de 60 em uma cubeta de 1 cm de comprimento.
C Ax A P = C P x A A
Onde
C A = Concentração da amostra (%)
A P = Absorbância do padrão
C P = Concentração do padrão escina (%)
A A = Absorbância da amostra
Levando em consideração o fator de diluição FD =
m
500
C A x FD x 60 = 1 x A A
C A x _m_ x 60 = 1 x A A
500
C A = A A _ x 500
60 x m
C A = 8,333 x A A
m
C A (%) = 8,333 x A A
m
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Tintura farmacopeica:
1 g de droga vegetal em 10 mL de tintura
Ex. FP 1 mL DE TINTURA 0,05% de senosídeos, em 10 mL de solução oral
0,05 g de senosídeos em 100 mL de tintura
Equivale a
50 mg ___________________ 100 mL
X
____________________ 1 mL
X = 0,5 mg/mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Cola nítida
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Padrões de referência
Digitalis purpurea
RE 899/03 - utilizar substâncias de referência oficializadas pela Farmacopéia
Brasileira ou, na ausência destas, por outros códigos autorizados pela legislação
vigente. No caso da inexistência dessas substâncias, será admitido o uso de padrões
de trabalho, desde que a identidade e o teor sejam devidamente comprovados.
Padrões de referência devem ser acompanhados de laudo de análise, incluindo
resultados da análise química, físico-química e espectroscópica.
Pode-se qualificar um extrato através de substâncias química de referência e perfil
cromatográfico, e usar esse extrato qualificado como padrão de trabalho.
Apresentar os dados da qualificação, nº de lote da SQR e do extrato qualificado,
assim como seu prazo de validade.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
25,8
Qualificação de padrão de
trabalho – em relação à
SQR de teor e identidade
conhecidos
Substância química de
referência
Concentração conhecida
Área do pico
correspondente
25,8
Amostra do
medicamento
Diluição conhecida –
concentração
semelhante SQR
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
Área do pico
correspondente
www.anvisa.gov.br
Unidades de medida
µg%
mL
g
2,5 MG/ML XPE
Densidade do xarope: 1,27
Densidade da tintura: 0,97
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Formulário de petição
Campo 16
Componentes da
Fórmula
Campo 18
Tipo
Campo 19
Campo 20
Concentração
Demonstração
Quant./Volume da Fórmula
Tintura de Aloe ferox 99.999-9
Mill (75,2 µg de
aloína/mL de extrato)
05
0,133 mL
1 mL
Água
16
1 mL QSP
1 mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
Campo 17
Código
DCB
00445
www.anvisa.gov.br
Formulário de petição
Campo 16: Preencher corretamente, considerando que deve constar o
teor de marcador para cada derivado de droga vegetal.
Exempo: Tintura de Aloe ferox Mill
(75,2 µg de aloína/mL de extrato)
Bula – RDC 47/09
Composição-para o(s) princípio(s) ativo(s), descrever a composição
qualitativa e quantitativa.
Exempo: Tintura de Aloe ferox Mill. .......0,133 mL
(10 µg de aloína/mL do produto)
Veículo Q.S.P. ………………...1,0 mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de Qualidade
Análise quantitativa do(s) marcador(es) ou controle biológico, conforme Art. 11,
inciso VIII, da RDC 14/10.
Modo de preparo das amostras: transferir 0,2 g do extrato mole para balão
volumétrico de 25 mL.
Concentração da solução?
Densidade?
Formulário de petição:
Tintura de Aloe ferox Mill (75,2 µg de aloína/mL de extrato) ..... 0,133 mL ....... 1 mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de Qualidade
O laudo de análise deve incluir a caracterização físico-química do derivado vegetal
incluindo a caracterização organoléptica, resíduo seco, pH, teor alcoólico e
densidade (para extratos líquidos), conforme Art.11, inciso V, alínea a, da RDC
14/10.
A densidade auxilia na caracterização de um derivado. A densidade é expressa em
gramas por centímetro cúbico (g/cm3).
Densidade = massa
volume
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Estudo de Estabilidade X
Formulário de Petição
Matéria prima
Extrato
mole 3:1
Aloe
Quantidade
4,45 mg
Matéria Quantidade
prima
Tintura de 0,133 mL
Aloe ferox
(75,2 µg de
aloína/mL)
Água
QSP 1 mL
Água
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
QSP 1 mL
www.anvisa.gov.br
Controle de Qualidade
Densidade = massa
volume
Densidade = 0,00445 g
0,133 mL
Densidade = 0,033 g/mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Controle de Qualidade
Modo de preparo das amostras: transferir 0,2 g do extrato mole para balão
volumétrico de 25 mL. Após filtração, 0,4 mL são transferidos para vial,
juntamente com 0,8 mL de metanol.
Matéria-prima
Quantidade
Extrato mole
3:1 Aloe
4,45 mg
Água
QSP 1 mL
Bula: Tintura de Aloe ferox .......0,133 mL
(10 µg de aloína/mL do produto)
Veículo Q.S.P. …………1,0 mL
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
4,45 mg extrato ............ 10 µg aloína
200 mg .........................
X
x = 449,4 µg
449,4 µg ………………25 mL
x
…………….. 0,4 mL
x = 7,19 µg
7,19 µg ………………1,2 mL
x
…………….. 1,0 mL
x = 6 µg/mL
www.anvisa.gov.br
Controle de Qualidade
RE 899/03 - Para a validação da metodologia analítica quantitativa,
recomenda-se a determinação da linearidade pela análise de, no mínimo, 5
concentrações diferentes do padrão de referência, no intervalo de 80-120% da
concentração teórica do teste.
Concentrações de aloína para a curva de calibração: amostra a 100% é de 6
µg/mL
Recomendado: 4,8 µg/mL, 5,4 µg/mL, 6,0 µg/mL, 6,6 µg/mL e 7,2 µg/mL.
Apresentado no prodesso: 384 µg/mL, 192 µg/mL, 96 µg/mL, 24 µg/mL e 12
µg/mL.
Exigência - adequar as concentrações da curva de linearidade: a RE 899/03.
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Resultados
Identificação das amostras;
Data;
Carimbo e assinatura do responsável.
Ginkgo biloba
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br
Obrigada pela
atenção!!!
medicamento.fitoterá[email protected]
COFID- Coordenação de Fitoterápicos, Dinamizados e Notificados
GTFAR- Gerência de Tecnologia Farmacêutica
GGMED-Gerência Geral de Medicamentos
SIA, Trecho 5, Área Especial 57, Brasília - DF CEP: 71.205-050
(61) 3462 5526
Ginkgo biloba
Agência Nacional
de Vigilância Sanitária
www.anvisa.gov.br