AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DA DAP-1
E RELAÇÃO COM A AGRESSIVIDADE
TUMORAL EM PACIENTES COM
CARCINOMA EPIDERMÓIDE DE BOCA E
OROFARINGE
Aluno: Audrei Estivan Martins
Orientador: Profa. Dra. Adriana Madeira Alvares da Silva
Co-orientador: Profa. Ms. Ana Maria da Cunha Mercante
2009
INTRODUÇÃO
CARCINOMA EPIDERMÓIDE DE BOCA E OROFARINGE
•
Representa 90% dos tumores das vias aerodigestivas superioreS
•
Forte relação com o etilismo e tabagismo.
•
Relação com o vírus HPV.
INTRODUÇÃO

O gene DAP1 - 5p15.2 - 85388pb

É uma proteína citoplasmática

O gene é expresso em uma proteína básica,
rica em prolina com 15 kDa

Atua como mediador positivo da morte
celular programada induzida por interferongama.
INTRODUÇÃO

Strumpf e Kimchi (1998) relataram que a
proteína DAP1 isoladamente não promovia a
apoptose, mas que participava da via de
sinalização por ser ativada pelas proteinas
da via de sinalização à apoptose ( TNF-alfa,
TNF-R, FASL, IFN-alfa), e que a expressão
da proteína DAP1 resultava no maior
potencial de morte pela interferon-gama
(IFN-gama) e
INTRODUÇÃO
Nakatsuka e colaboradores em 2002, relataram que
a hipermetilação da região promotora do gene estava
associada ao desenvolvimento de neoplasias cabeça
e pescoço, e que este fato resultava na resistência
das células tumorais à apoptose. (LEVY-STRUMPF e
KIMCHI, 1998)

OBJETIVOS




Avaliar a expressão dos genes DAP-1 através da
técnica de imuno-histoquímica em carcinoma
epidermóide de boca e orofaringe e margens
tumorais.
Relacionar a expressão dos genes DAP-1 com a
agressividade tumoral medida pelo pTNM e fatores
histológicos e a sobrevida dos pacientes.
Verificar a localização da proteína por imunohistoquímica.
Padronizar as técnicas de imuno-histoquímica e
histologia utilizadas neste trabalho.
LOCAL DE ESTUDO E
PACIENTES
•
O trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Biologia Molecular
em parceria com o Serviço de Patologia do Hospital Heliópolis.
•
Foram estudados 85 pacientes com carcinoma epidermóide de
boca e orofaringe, sem tratamento prévio, tratados no Serviço de
Cirurgia de Cabeça e Pescoço do Hospital Heliópolis.
MATERIAIS E MÉTODOS
HISTOLOGIA
•
Pelo método de coloração de hematoxilina-eosina (HE) as lâminas
foram analisadas, avaliando suas características histológicas como:
•
Grau de diferenciação
•
Desmoplasia
•
Intensidade de inflamação
•
Invasão vascular linfática
•
Invasão vascular sanguínea
•
Invasão perineural
•
Necrose
MATERIAIS E MÉTODOS
IMUNOHISTOQUÍMICA
•
Pelo método de imunohistoquímica os materiais foram avaliadas
segundo a intensidade da marcação, classificadas segundo:
•
Intensidade de marcação.
•
Frequência de células tumorais.
•
A lâmina com os materiais dos pacientes foi confeccionada pela
técnica de tissue microarray
RESULTADOS
Os resultados mostraram que de 85 casos analisados 62 (72,9%) apresentaram
marcação positiva, com 30 fortes positivos e 32 fracos positivos e 23 (27,1%)
tiveram marcação negativa.
A análise da expressão do DAP1 nas 48 margens analisadas mostrou que 6 não
possuíam representação do epitélio, 32 (66%) apresentaram marcação negativa
e 10 (20,6%) (7 marcação forte e 3 positivo fraco), mostrando haver diferença de
expressão entre tumor e margem tumoral com maior expressão da proteína no
tumor (p=0,000).
Houve relação estatística entre a presença ou ausência da marcação
citoplasmática nos tumores e a variável histopatológica necrose (p= 0,003). Não
houve relação entre a expressão da proteína e a sobrevida dos pacientes no
seguimento de 48 meses.
RESULTADOS
Expressão DAP1
Características clínicopatológicas
Negativo
Positivo
n
%
n
%
1
2
52,2
25
40,3
p value
Grau de diferenciação
Bem diferenciado
0,065
Moderadamente
6
26,1
33
53,2
Pouco diferenciado
Não avaliável
4
1
17,4
4,3
4
0
6,5
0,0
23
100
62
Total
100
RESULTADOS
Expressão DAP1
Características clínicopatológicas
Negativo
Positivo
n
%
n
%
Ausente
8
34,8
6
9,7
Presente
Não avaliável
1
4
1
60,9
4,3
56
0
90,3
0,0
p value
Necrose
Total
23
100
62
100
0,003
CONSIDERAÇÕES FINAIS
• A carência de literatura a respeito da função da
proteína nas diversas vias de sinalização dificulta a
discussão.
• Os resultados mostram que essa proteína pode estar
associada aos mecanismos de tumorigênese, já que
está expressa mais intensamente no tumor que na
margem.
• Os dados sugerem também que a DAP1 possa atuar
como fator de pior prognostico tumoral, já que está
associada à presença de necrose, porém esses dados
necessitariam de análise em maior amostragem para a
confirmação dos dados obtidos.