Histotécnica - fases
1. Coleta ou Colheita do material
2. Fixação
3. Clivagem
4. Desidratação
5. Diafanização
6. Impregnação
7. Inclusão
8. Microtomia
9. Coloração de rotina
10. Montagem
4) Desidratação (6h)
Remoção da água do tecido por
substâncias miscíveis com a água
5) Diafanização (3h)
Remoção do álcool por substâncias
miscíveis com o álcool e com a
parafina
(clarificação)
6) Impregnação pela parafina (2h) - 56 a 58o C
4. Desidratação
- Cuidados nesta fase:
- Desidratação gradual em Álcool etílico... evitar
artefatos
- Substituição periódica do álcool
- Tempo de permanência do álcool
- Obs. Nesta fase ocorre retração tecidual
Erros nesta fase ?
5. Diafanização
- Cuidados nesta fase:
- - Substituição periódica do Xilol (xileno)
- Tempo de permanência no Xilol
- Obs. Nesta fase os fragmentos ficam translúcidos
(diáfanos)
Erros nesta fase ?
6. Impregnação pela parafina
- Cuidados nesta fase:
- Substituição periódica da Parafina
- Tempo de permanência na Parafina
- Temperatura adequada
Erros nesta fase ?
7) Inclusão em parafina
Parafina fundida .... 56o C .... solidificar à temperatura ambiente
- molde apropriado
- altura = 1,5 cm
7. Inclusão em parafina
- Cuidados nesta fase ?
- Obedecer critérios de consistência e tamanho dos
fragmentos, de acordo com a lamínula
- Erros nesta fase ?
Histotécnica - fases
1. Coleta ou Colheita do material
2. Fixação
3. Clivagem
4. Desidratação
5. Diafanização
6. Impregnação
7. Inclusão
8. Microtomia
9. Coloração de rotina
10. Montagem
Microtomia
50oC
Cortes 5µm
Estufa
40 min.
Criostato
criomicrotomia (-30oC)
“pescar “ o
corte com
lâmina de vidro
8. Microtomia
- Cuidados nesta fase ?
- Navalha afiada
- Espessura dos cortes
- Técnico com experiência
- Temperatura do banho-maria
- Temperatura da estufa
- Erros nesta fase ?
9) Coloração de rotina: H. E.
- corantes:
Hematoxilina e Eosina
- Hematoxilina ..... corante básico ..... cora estruturas
(natural / vegetal)
ácidas
Por ex. núcleo
- Eosina
..... corante ácido ..... cora estruturas
(artificial)
básicas
Por ex. citoplasma
9. Coloração de rotina
- Cuidados nesta fase ?
- Preparo adequado dos corantes
- Respeitar os tempos de cada sub-fase da coloração
- Substituição periódica das substâncias utilizadas
- Erros nesta fase ?
10. Montagem
- Cuidados nesta fase ?
- Cobrir adequadamente os cortes histológicos com as
lamínulas
- Utilizar o Bálsamo na diluição correta – evitar bolhas
- Erros nesta fase ?
10. Montagem
- Cuidados nesta fase ?
- Cobrir adequadamente os cortes histológicos com as
lamínulas
- Utilizar o Bálsamo na diluição correta – evitar bolhas
- Erros nesta fase ?