AVALIAÇÃO DIAGNÓSTICA DA SÍNDROME DO X FRÁGIL EM PCR CGG-ESPECÍFICO UTILIZANDO DNA
OBTIDO DE PAPEL FILTRO (FTA) E CÉLULAS DA MUCOSA ORAL
Autores
1
1
2
Roberta Dutra , Marcelo Dorneles , Rui Pilotto , Alexandre Dias
3,4
3
, Leslie Kulikowski , Airton Yamada
1
1
Instituição Labac - Setor de Genética e Genômica do Laboratório Labac (Alameda Augusto Stellfeld, 1727 - Curitiba
2
- PR), UFPR - Serviço de Aconselhamento Genético do Hospital de Clínicas (Rua General Carneiro, 181
3
- Curitiba - PR), HC-FMUSP - Laboratório de Citogenômica do LIM 03 (Av Dr. Eneas de Carvalho Aguiar,
4
255, 2º andar, bloco 12 - São Paulo - SP ), OMIKA - Consultoria em Genética LTDA (Rua Jandiatuba,
143, sala 505 - São Paulo - SP)
Resumo
OBJETIVOS
A Síndrome do X-frágil (SXF) é uma das principais causas de deficiência intelectual herdada e ocorre devido a uma
expansão de trinucleotídeos CGG (>200 repetições) na região 5’ não traduzida do gene FMR1 localizado em Xq27.3.
Embora a técnica de Southern blot seja o teste amplamente utilizado para o diagnóstico molecular da SXF, este
método é trabalhoso, demorado e necessita de grandes quantidades de DNA genômico. A partir disso, nosso objetivo
foi padronizar a técnica de PCR (CGG específico) para o diagnóstico molecular da SXF com o kit específico
(Amplidex™ FMR1 PCR – Asuragen) em amostras de DNA obtidas de papel filtro e células da mucosa oral.
MÉTODOS
Foram analisados neste estudo cinco pacientes e para obtenção do DNA genômico foram utilizados três diferentes
métodos de coleta: (1) sangue periférico coletado por sistema vacuotainer (com anticoagulante EDTA), (2) células da
mucosa oral coletadas por método específico (DNA•SAL™ Oasis Diagnostics®) e (3) sangue coletado em cartões de
papel filtro FTA (Whatmann). Para cada amostra, foi realizada a técnica de PCR (CGG específico) utilizando o kit
Amplidex™ FMR1 PCR - Asuragen, seguida de eletroforese capilar. A análise da separação dos fragmentos e a
conversão dos picos em número de repetições CGG foram realizados utilizando o software GeneMarker V2.6.2
RESULTADOS
Dos cinco pacientes analisados, um apresentou resultado positivo para a SXF sendo possível identificar uma
expansão de mais de 200 repetições CGG em todas as amostras independente do método de coleta (sangue
periférico, papel filtro e células da mucosa oral). Outra do sexo feminino foi identificada com a pré-mutação utilizando
apenas a técnica de PCR em todas as amostras. Três pacientes apresentaram resultado negativo para a Síndrome
do X Frágil em todos métodos.
CONCLUSÃO
Os resultados obtidos foram concordantes para todos os pacientes mostrando a capacidade diagnóstica da reação
de PCR CGG específico utilizando o kit Amplidex™ FMR1 PCR independente do tipo de coleta utilizado. Utilizando o
método de PCR – CGG específico, foi possível fazer o diagnóstico molecular da SFX de forma rápida (menos de 24
horas), com ótimo custo-benefício e eficiência na detecção das repetições CGG, tanto em homens quanto em
mulheres com pré-mutação. Além disso, o mesmo kit possibilita a identificação dos alelos com repetições
consideradas intermediárias (45 a 55 repetições), a identificação de interrupções AGG e mosaicos baixos (>10%).
Assim, essas novas metodologias, aliada à facilidade de coleta do material biológico com papel filtro, permitirá
ampliar o diagnóstico molecular da síndrome de X-Frágil.
Palavras-chaves: Diagnóstico molecular, Papel filtro , PCR CGG específico, Síndrome do X frágil
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