Isolamento e caracterização de células
mononucleares de medula óssea de cães.
Fernanda de Lima Brandão
Iniciação Científica (Voluntária) 2013
Orientador: Rosangela Locatelli Dittrich; Co-orientador: Harald Fernando Vicente
de Brito; Colaborador: Tobias Fernandes Filho.
Introdução/Objetivos: A terapia com células-tronco
está consolidada como uma opção de tratamento,
sendo geralmente utilizadas células mesenquimais
de tecido adiposo. A terapia com células mononucleares de medula óssea é uma alternativa ao
cultivo de células mesenquimais. O objetivo deste
trabalho foi comparar o efeito do anticoagulante no
rendimento de células-tronco e caracterizar
fenotipicamente por citometria de fluxo as células
isoladas da medula óssea de cães.
Resultados/Discussão: O rendimento para as amostras
coletadas com heparina foi de 3,64x104 (±3,17), e para as
amostras coletadas com CPDA-1 foi de 3,02x104 (±2,32). Na
citometria de fluxo, o rendimento das células com heparina e
CPDA-1 foram semelhante s, tanto nas células marcadas
apenas com CD4, como nas células marcadas apenas com
CD9. Nas amostras duplo marcadas o rendimento foi diferente,
sendo 5,012% (±0,728%) para CPDA-1 e 2,228% (±0,699%)
para heparina. A molécula de CD44 é relacionada como
marcadora característica de células mesenquimais derivadas da
medula óssea. CD9 regula a ativação e agregação de células.
A dupla marcação é reportada para
Método: Foram coletados 8 mL de medula óssea em caracterização fenotípica de
2 mL de CPDA-1 e outros 8 mL em 1 mL de heparina células-tronco mesenquimais
e 1 mL de PBS. As amostras foram diluídas em
em cães e em outras espécies,
DMEM (1:1) e divididas em doze tubos com
sendo que a caracterização
Histopaque 1119 e 1077 e isoladas em gradiente
fenotípica é consistente mesmo em
ficoll. As amostras foram marcadas com e incubadas condições diferentes de isolamento
com anticorpo CD44 e CD9 e ressuspendidas em
e cultivo.
400L de PBS para análise em citometria de fluxo.
Referências: Jones E.A., Kinsey S.E., English A.,
Jones R.A.,Straszynski L., Meredith D.M., Markham
A.F., JackA., Emery P., McGonagle D. (2002). Gimble
J.M., Katz A.J., Bunnell B.A. (2007) Adipose-Derived
Stem Cells for RegenerativeMedicine.
Conclusões: Os resultados do presente trabalho indicam
possibilidades promissoras na utilização de células
mononucleares em substituição ao cultivo de células
mesenquimais para terapia celular, podendo ser utilizado
CPDA-1 ou heparina para coleta da medula óssea.