Construção de Biblioteca
Gênica
1-Vetor de Clonagem Plasmidial
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
3-Biblioteca de cDNA
4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Edmar Vaz de Andrade
1-Vetor de Clonagem Plasmidial
Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem
5 – 10 kb
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Ciclo Lítico de um Bacteriófago
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Formação de placas
de lise em cultura
de bactérias
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Genoma do bacteriófago λ
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
DNA de
preenchimento
1 – Remoção de genes
não essenciais
2 – Inserção de sítios de
restrição específicos
3 – Introdução de um
DNA de preenchimento
4 – Substituição do DNA
de preenchimento por um
gene de interesse
(fragmentos: 10 - 25 kb)
3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA
3-Biblioteca de cDNA
Adição de uma extremidade em Gn
Hibridização com iniciador Cn
3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA fita dupla e Metilação
3-Biblioteca de cDNA
Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição
3-Biblioteca de cDNA
Digestão com Enzima de Restrição
3-Biblioteca de cDNA
Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ
3-Biblioteca de cDNA
Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante
4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Genes par derivado do plasmído F.
Facilita a distribuição do plasmídio
para células filhas
Construção de bibliotecas
genômicas com insertos de até
300.000 pb
Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem
modificações, das seguintes referências:
1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e
Molecular”,
5ª
edição.
Artmed
Editora
SA.
Porto
Alegre-Brasil.
(www.whfreeman.com/lodish)
2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of
Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.