Uso do Bacillus subtillis como probióticos, para
controle de Vibrios em cultivos de camarões.
Engenharia Química.
DILE P. STREMEL(1) JOSELAINE C. DE JESUS(2), PAULO JOSÉ PADILHA(3), JULIANA DE MEDEIROS(3)
(1) Professor Orientador (2) Bolsista do programa PIBIC/CNPq (3) Colaboradores EPAGRI/CETUBA
do Sul de Santa Catarina (UNISUL) – Unidade Acadêmica de Ciências Tecnológicas(UNITEC)
Grupo de Pesquisa em Engenharia de Processos(ENGEPRO)
Telefone : 55-48-3621- 3191 e-mail: [email protected] Tubarão S.C – Brasil
1,2Universidade
3CETUBA/EPAGRI
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Introdução
A ocorrência de vibrios é algo que vem preocupando os produtores e profissionais do segmento,
Resultados
espécies de Vibrio. Observou-se crescimento
Método Disco-Difusão
das três espécies de Vibrio, portando não
pois, para o controle deles vêm-se utilizando antibióticos que são adicionados à água. Embora
esse tratamento tenha uma resposta mais rápida às doenças bacterianas, pode produzir um
efeito contrário, pois, com o uso de antibióticos em alimentos de origem animal, a resistência da
Após 24 horas verificou-se um halo de
houve inibição pelo extrato dos bacilos.
crescimento ao redor do disco.
bactéria patogênica associada ao animal é aumentada e pode ser transmitida aos humanos.
Método da Difusão em Orifícios (well
Mac MILLAN (apud TORO, 2005) Em 1960, Richard Parker usou pela primeira vez o termo
difusion assay)
“probiótico”, que significa “a favor da vida”. A partir daí, enfatizaram-se os estudos sobre a
população de microrganismos não patogênicos presente no trato digestório, tanto dos animais
Figura 01 – Halo de crescimento.
domésticos como dos seres humanos. Jin et al. (apud FURLAN et al., 2004) O uso de bactérias
benéficas (probióticas) para inibir patógenos através de processos naturais, é um meio mais
seguro e efetivo do que o uso de antibióticos para promover a saúde animal.
Objetivo
Após 24 horas de incubação constatouse a não ocorrência de halo de inibição.
Foi feita uma lâmina com a colônia ao redor
do disco de ágar e feita à coloração de Gram e
constatou-se a presença de bactérias Gram
positivas e negativas Figura 02.
O objetivo foi desenvolver um complemento nutricional a base de microrganismos, bacillus
V. fluvialis
V. parahaemoelyticus
subtilis com características probióticas que permitam o fortalecimento do sistema imune e o
controle de doenças comuns em cultivos de camarões, ocasionadas por microrganismos
patogênicos.
Figura 02 – Microscopia de varredura, lente
V.vulnificus
de aumento 1600 vezes.
Figura 03 – Placas teste difusão em orifícios.
(A) Tratamento com Bacillus subtillis
ATCC9372, (B) Tratamento Bacillus subtillis
PR29.
Metodologia
Método Difusão em Ágar
Método da Difusão em Orifícios (well difusion assay).
Os testes foram realizados em duplicata e com
Os vibrios foram pré incubados a 28 °C por 2 dias e 5μl dessa cultura e espalhados sobre as
testemunha, em dois tipos de ágar e com três
placas de ágar. A cultura dos Bacillus pré incubada por 3 dias foi centrifugada e o líquido
Conclusões
sobrenadante filtrado através um filtro menbrana de 0,22μm, para obter extrato livre de células.
Um volume de 100 μl de extrato de Bacillus livre de células foi introduzida em poços em meio de
ágar e incubado pelo o período de 24-48 h em 28°C. A atividade será definida quando o
 Com os testes realizados não foi possível comprovar o antagonismo dos Bacillus subtillis
diâmetro a zona inibitória avançar em torno do poço. LEWUS e MONTVILLE (1991) Apud MAZO
PR29 e ATCC 9372 e de seus metabólitos sobre os isolados V. parahaemolyticus, V. fluvialis e V.
(2002).
vulnificus.
 Porém, no teste disco-difusão, percebeu-se o crescimento dos dois microorganismos,
Método da Disco-Difusão.
portanto não refutando a hipótese de usar Bacillus subtillis PR29 e ATCC 9372 como probióticos
no cultivos de camarões.
Inoculou-se uma alçada da colônia do vibrio em caldo peptona e incubou-se á 35°C por 24
horas. Semeou-se 0,1 ml da cultura de vibrio em placa de ágar Mueller Hinton e espalhou-se
Bibliografia
uniformemente com alça de Drigalski, posteriormente transferiu-se discos de ágar contendo a
cultura de Bacillus subtilis para a placa de ágar Mueller Hinton já semeada com vibrio. Após 24
horas verificou-se o halo de inibição, TAGG e Mc GIVEN (1971) apud TORO (2005).
Método de Difusão em Ágar
Para testar a produção e de metabólitos produzidos por isolados de Bacillus spp., colônias da
bactéria foram transferidas para Erlenmeyers de 250 ml, contendo 100 ml de caldo BHI. Após a
incubação, o caldo foi centrifugado e o líquido sobrenadante filtrado através um filtro menbrana
de 0,22μm, para se obter extrato livre de células. Em placas de petri com capacidade de 20 mL,
foram colocadas 3 mL dos extrato e 17 mL de ágar Mueller Hinton e após a solidificação do meio
FURLAN, R.L., MACARI, M., LUQUETTI, B.C. Como avaliar os efeitos do uso de
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TORO, C. R.; Uso de bactérias probióticas na alimentação de camarões Litopenaeus
vannamei como inibidoas de microorganismos patogênicos e estimulantes do sistema
imune. 2005.
foi semedado a cultura de vibrios e acompanhou-se o crescimento comparando com uma placa
testemunha. ROGERO et al(2003).
Agradecimentos: Aos Programa UNISUL/PIBIC/CNPq pela concessão da Bolsa de Iniciação
Científica e á Epagri (CETUBA) pelo apoio à Pesquisa.