Disciplina: Preparação Citológica e Análise Citogenética
Docente: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira
Discente: Julia Musolino Montineri
Introdução
Talassemias
• Alterações genéticas monogênicas mais comuns no mundo.
• Alteração na síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da
hemoglobina (Hb)
• Desequilíbrio entre essas subunidades
• Dificulta o processo de eritropoese
Introdução
Talassemia alfa
• 10% da população do sudoeste do estado de São Paulo
• 20% em outras regiões
• Diferenças composição étnica  grande miscigenação ocorrida ao
longo da história
Introdução
Alfa Talassemia
• Resultante de mutações nos genes alfa
• Braço curto do cromossomo 16 na região 16p.13.3
• 4 genes α (αα/αα)
• α1 e α2 iguais divergem apenas 17%
• α2 expressa de duas a três vezes mais que α1
> Consequência no quadro clínico
• Síntese deficiente de cadeias globínicas alfa
• Modifica a composição da molécula de hemoglobina
Introdução
Altera a fisiologia e morfologia do eritrócito
Excesso de cadeias despareadas pode se
ligar para formar tetrâmeros de caráter
instável
• Hb H (adulto)
• Hb Bart's (fetal)
Introdução
Hb H
• 10x mais afinidade com oxigênio que a Hb A
• Prejudicam a interação heme-heme
• Liberam quantidades insuficientes de oxigênio para os tecidos
• Alterações fisiológicas e morfológicas dos eritrócitos
• Microcitose e hipocromia em diferentes graus
Quando oxidada  precipitados intra-eritrocitários  quando presentes no
eritroblastos  destruição intramedular dos precursores eritróides 
eritropoese ineficiente.
Acumula na membrana eritrocitária  diminui vida útil da célula
Introdução
Sintomas
• Apresentam anemia com graus variáveis
• Hipocromia
• Microcitose
• Poiquilocitose
• Diminuição da fragilidade osmótica
• Presença de Hb H em eletroforese
• Corpos de inclusão com coloração vital (azul cresil brilhante)
O objetivo
• Avaliar o perfil hematológico, por meio dos valores de hemograma
(RBC, HGB, HCT, VCM, HCM e CHCM) de indivíduos identificados
como portadores de talassemia alfa por métodos de rotina
diagnóstica, das regiões Sudeste e Nordeste do Brasil.
Material e Métodos
Casuística
• 1.010 amostras de sangue periférico
• Idades variando de 1 a 90 anos
• Sem distinção de sexo
• Sem distinção de etnia
• Região Sudeste e Nordeste do Brasil
Material e métodos
Métodos
• Análise dos índices eritrocitários
• Resistência globular osmótica em solução de cloreto de sódio a 0,36%
• Análise da morfologia eritrocitária
• Eletroforese em acetato de celulose em pH alcalino
• Eletroforese em acetato de celulose em pH neutro
• Pesquisa de corpos de inclusão de Hb H com coloração de azul cresil
brilhante
• Contagem de reticulócitos
• Dosagem de Hb A2 por HPLC
Material e métodos
PESQUISA DE CORPÚSCULOS DE HEINZ E AGREGADOS DE
HEMOGLOBINA H
Princípio:
Os corpúsculos de inclusão de hemoglobina H são formados por cadeias
beta oriundas da desnaturação do tetrâmero. Após coloração esses
corpúsculos apresentam-se dispostos homogeneamente no interior dos
eritrócitos como pequenos pontos azulados.
Reagentes:
Solução salina:
• Cloreto de sódio 0,9 g
• Água destilada q.s.p. 100 mL
Solução de Azul Cresil Brilhante:
Azul Cresil brilhante 1,0 g
• Solução salina 100 mL
• Solução citrato 25 mL
Solução citrato:
Corpos de
Hb Hg
• Citrato de sódio 2,2
• Água destilada q.s.p. 100 mL
Material e métodos
Procedimento:
- Colocar 50 ml de sangue total em tubo de ensaio pequeno e adicionar 50
ml de solução de azul Cresil brilhante. Agitar o tubo suavemente.
- Incubar o material a 37ºC por 30 e 60 minutos
- Fazer esfregaços finos e examinar ao microscópio em objetiva de imersão.
Interpretação:
A presença de Hb H nos eritrócitos aparece como fina granulação distribuída
homogeneamente, caracterizando um portador de alfa talassemia.
Resultados e discussão
• 82,28% provenientes da região Sudeste
• 71,60% do sexo feminino
• Todos possíveis portadores de talassemia alfa
RBC  contagem de glóbulos vermelhos
HGB  dosagem de hemoglobina
HCT  o hematócrito
VCM  volume corpuscular médio
HCM  hemoglobina corpuscular média
CHCM  concentração de hemoglobina
corpuscular média
Material e métodos
Valores de Referência:
• RBC (103/mm3) 5,4 a 8,0
• HGB (g/dl)  14 ± 2 g/dl
• HCT (%)  47 ± 5%
• VCM (μ3)  87 ± 53
• HCM (pg)  29 ± 2 pg
• CHCM (%)  34 ± 2%
Resultados e discussão
Considerações dos índices
• Variações de idade (níveis de Hb)
• Sexo
• Etnias
• Interferentes ambientais (altitude, tabagismo)
• Os valores de VCM baixo é sugestivos de defeito na síntese de
hemoglobina
• Os valores de HGB foram relativamente baixas (mostrando uma provável
deficiência na síntese de hemoglobina)
Resultados e discussão
• Os valores de HCT estavam baixos, podendo levar a má oxigenação tecidual
• Os valores baixos de VCM  presença de microcitose
• Os valores de HCM baixos  hipocromia dos eritrócitos
• Alterações no CHCM não foram significativas
• As mulheres foram as mais afetadas em todos os parâmetros em ambas as
regiões
• Os dois índices mais afetados foram os níveis de HGB e o HCT
Resultados e discussão
O perfil das duas regiões são discretamente diferentes
• devido à composição étnica destas regiões
• fatores nutricionais
Os índices eritrocitários complementam os testes de triagem de
hemoglobinopatias
Os resultados contribuíram para caracterizar o perfil dos portadores de
talassemia alfa na população brasileira, visando uma melhora na
qualidade de vida desses pacientes
Aconselhável a análise molecular das principais alterações genéticas
do gene alfa globina