UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
Métodos Analíticos em Bioquímica
Prof. Alcir Dafré
Princípios Básicos da Oximetria
de Alta Resolução
Paulo Silveira
Roberta Martins
Orientadora: Alexandra Latini
Respiração Mitocondrial
Substratos para Respiração
Mitocondrial
Transporte de Substratos
Inibidores para Respiração
Mitocondrial
Oxímetro
Oxygraph-2k
(Oroborus Instruments)
Aula Prática
Amostra: Concentrado de Mitocôndrias de Fígado de Ratos
Técnica:
Reagentes
10µl de piruvato + 10 µl de
malato 2mM
25 µl ADP 0,25M
4 µl Rotenona 1mM
20 µl Succinato
25 µl ADP 0,25M
5 µl Cianeto
Resultados Aula Prática
Reagentes
10µl de piruvato + 10 µl
de malato 2mM
25 µl ADP 0,25M
4 µl Rotenona 1mM
20 µl Succinato
25 µl ADP 0,25M
5 µl Citocromo C
Consumo de Oxigênio
(Marks Statistics)
Resultados Aula Prática
Estágio III: Quantidade de Oxigênio consumido na
presença de substratos e ADP.
Estágio IV: Quantidade de Oxigênio consumido após a
exaustão dos substratos e ADP.
Controle Respiratório (RCR):
RCR ADP/Pir+Mal =
RCR ADP/Succinato=