56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
96
Utilização de linhagens de Lactococcus lactis invasivas
como veículos para a entrega de plasmídeos vacinais,
codificando o antígeno ESAT-6 de Mycobacterium
tuberculosis, em linhagens celulares epiteliais
humanas
Pereira, VB1; Saraiva, TDL1; Mancha-Agrest, P1; Zurita-Turk, M1; Azevedo, V1; Miyoshi, A1
Laboratório de Genética Celular e Molecular, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Minas gerais
[email protected]
1
Palavras-chave: Vacina de DNA, pValac, ESAT-6, Lactococcus lactis, Mycobacterium tuberculosis.
Introdução: O uso de bactérias como veículo para a entrega de plasmídeos vacinais pela rota oral constitui
uma estratégia de vacinação promissora contra diversas doenças infecciosas. Para isto, bactérias patogênicas
atenuadas como Shigella, Listeria e Salmonella vêm sendo utilizadas, ainda que o risco de reversão da
patogenicidade limite seu uso em humanos. Lactococcus lactis é uma Bactéria Láctica modelo considerada
GRAS (Generally Recognized As Safe) que vem sendo extensivamente utilizada para a produção e entrega de
antígenos e citocinas ao nível de mucosas. Nesse contexto, L. lactis representa uma alternativa atrativa para a
entrega de plasmídeos vacinais em relação à patógenos atenuados. Assim, linhagens invasivas de L. lactis foram
desenvolvidas (FnBPA+) e um plasmídeo de expressão eucariótica foi construído (pValac; Vaccination using
Lactic acid bacteria). Desta forma, a utilização de linhagens invasivas de L. lactis para a entrega do pValac
expressando o antígeno ESAT-6 (6-kDa Early Secreted Antigenic Target) de Mycobacterium tuberculosis, poderia
representar uma nova estratégia para o controle da tuberculose, uma doença infecto-contagiosa que atinge 1/3
da população mundial na forma latente. Objetivos: Utilização de linhagens de L. lactis invasivas (FnBPA+) como
veículos para a entrega de um plasmídeo vacinal (pValac), codificando o antígeno ESAT-6 de M. tuberculosis,
em células de mamíferos. Métodos: A seqüência codificadora de ESAT-6 será amplificada por PCR (polymerase
chain reaction) a partir do DNA genômico de M. tuberculosis linhagem H37Rv para clonagem no vetor Zero Blunt®
TOPO® (Invitrogen) e posteriormente no vetor pValac. A construção final, pValac:ESAT-6, será primeiramente
obtida em E. coli TG1 e posteriormente transferida para L. lactis FnBPA+ por eletroporação. Para a avaliação
da produção de ESAT-6, células da linhagem Caco-2 serão transfectadas com o plasmídeos pValac:ESAT-6 e
a capacidade invasora da linhagem L. lactis FnBPA+(pValac:ESAT-6) também serão verificadas nesta linhagem
celular. Resultados parciais: A ORF ESAT-6 foi amplificada por PCR, com aproximadamente 300pb. ESAT-6 foi
clonado primeiramente no vetor Zero Blunt® TOPO® em E. coli TOP10, e a clonagem confirmada por PCR, digestão
enzimática e sequênciamento (ABI3130). O inserto ESAT-6 foi então clonado no vetor pValac e transformado
em E. coli TG1. A construção pValac:ESAT-6 foi confirmada por PCR, digestão e sequênciamento. Conclusões:
Este projeto constitui um primeiro passo rumo à validação da eficácia e efetividade de novas vacinas gênicas
baseadas em bactérias lácticas geneticamente modificadas, por via de administração em mucosas; o que também
poderá fornecer informações valiosas para a pesquisa e o desenvolvimento de vacinas contra outros patógenos.
Apoio financeiro: CNPq