EFEITO DO TEMPO, TEMPERATURA E MEIOS SOBRE A VIABILIDADE
FOLICULAR NA ESPÉCIE EQUINA – Resultados preliminares.
Autores: Roberta G. Gomes1; Evelyn R. Andrade2; Marcelo M. Seneda1*
1- Professor(a) do Departamento de Clínicas Veterinárias - CCA/UEL, Londrina PR
2- Bolsista PRODOC/CAPS
E-mail: [email protected] *
Introdução
Resultados
O desenvolvimento de protocolos ideais para conservação de
A análise prévia dos resultados mostrou que a temperatura
folículos pré-antrais é o primeiro passo para a obtenção e manipulação
parece ser mais importante do que o meio de conservação. Na
de milhares de folículos presentes nos ovários de animais, vivos ou
temperatura de 4 graus, independentemente do meio utilizado (MEM
mortos. As condições de transporte até o laboratório são cruciais para
ou PBS), os folículos mostraram-se bem conservados, com tendência
viabilizar todas as etapas posteriores da biotecnologia dos gametas
a um maior percentual de degeneração conforme o intervalo de tempo
femininos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o impacto das
aumentava. Nas temperaturas de 20º e 39ºC observou-se alto grau de
variáveis temperatura, meios de cultura e tempo pós-colheita sobre a
degeneração em todos os tempos e meios estudados.
viabilidade de folículos ovarianos pré-antrais conservados in situ na
espécie equina.
Discussão
Material e Métodos
De acordo com nosso conhecimento, este é o primeiro trabalho
Ovários (n = 10) oriundos de éguas (n=10) de diversas raças em
a relatar uma estratégia viável de transporte de ovários equinos,
anestro estacional foram obtidos em frigorífico de eqüinos, distante
considerando tempo, meios e temperaturas. A partir dos resultados
120 km do laboratório. Imediatamente após a morte dos animais, os
deste experimento, torna-se possível uma utilização mais eficiente
ovários foram lavados em álcool 70% e em solução salina 0,9% por 10
dos folículos primordiais da espécie equina, com aproveitamento de
segundos e então dissecados, dividindo a porção cortical (mais
milhares de folículos primordiais para as biotécnicas de cultivo
interna) em 19 fragmentos de aproximadamente 3 x 3 x 1 mm. Um
folicular, FIV e clonagem. As perspectivas de tais biotécnicas são
fragmento de cada ovário foi imediatamente fixado em Carnoy por 24 h
como controle (T1). Os outros 18 foram distribuídos em tubos
contendo 10 ml de MEM (Meio Esssencial Mínimo) ou PBS (Phosphatebufferid saline) a 4, 20 ou 39º C e conservados por 4, 12 ou 24 horas
altamente promissoras, considerando-se a obtenção de blastocistos
ovinos a partir do cultivo de folículos pré-antrais. Ressalta-se, ainda,
a importância de uma melhor compreensão da fisiologia folicular
(figura 1). A avaliação foi realizada em todos os tratamentos através de
para a espécie equina, considerando-se a escassez de ovários de
histologia clássica e coloração com ácido periódico de Schiff (PAS) -
égua disponíveis para trabalhos experimentais.
hematoxilina.
Conclusão
19 fragmentos
Este trabalho mostra como resultados preliminares que
18 fragmentos + 1 fragmento (T1 – Tempo 0)
PBS
4º C
20º C
Incubação
39º C
4h 12h 24h 4h 12h 24h 4h 12h 24h
(T2) (T3) (T4) (T5) (T6) (T7) (T8) (T9)
4º C
20º C
quando coservados in situ em MEM ou PBS a 4ºC por 4 horas.
Referências
MEM
Incubação
foliculos ovarianos apresentaram-se morfologicamente normais
39º C
4h 12h 24h 4h 12h 24h 4h 12h 24h
(T10) (T11) (T12) (T13) (T14) (T15) (T16) (T17) (T18) (T19)
Figura 1. Delineamento experimental para preservação de folículos pré-antrais de ovários
eqüinos.
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Universidade Estadual de Londrina – Centro de Ciências Agrárias - Departamento de Clínicas Veterinárias