Fundo Nacional de Investigação - MCT
Faculdade de Agronomia e Engenharia Florestal- UEM, Universidade de Pretória
5 º Seminário Nacional de Divulgação dos Projectos Financiados
20 a 21 de Novembro de 2014
Centro Internacional de Conferências Joaquim Chissano
Maputo, Moçambique
Diversidade genética de duas espécies de mangal,
Avicennia marina e Ceriops tagal em Moçambique:
estudo baseado em SSRs – instrumento para o apoio à
gestão sustentável dos
mangais em Moçambique
FA U R A M A R I ZA C A N G Y A M A D E ( M S C . )
P R O F. PA X I E C H I RWA
SECÇÃO 1: Objectivos do Projecto
O papel da instituição que aloja o projecto;
Gestão financeira e admnistrativa do projecto;
 Auxílio na aquisição de materiais;
 Fornecimento de bens e equipamentos;
SECÇÃO 1: Object. Cont.
Os objectivos do projecto
 Quantificar a variação genética dentro das populações da
Ilha, e entre estas e as populações da zona continental;
 Avaliar a estrutura genética/diferenciação das populações e o
fluxo de genes;
 Descrever a relação filogenética entre as populações.
 Produzir um relatório que sirva de instrumento para o apoio
à gestão e conservação dos mangais em Moçambique;
SECÇÃO 1: Object. Cont.
O local de implementação
do projecto:
 Província de Maputo,
Zambezia e Cabo Delgado.
Cabo
delgado
Zambézia
Beneficiários
 Por identificar um
estudante, para a realização
do seu trabalho de tese.
Maputo
SECÇÃO 1: Object. Cont.
Desafios e constrangimentos encontrados
 O projecto é parte da tese do PhD que está a decorrer na Universidade
de Pretória, portanto, as vezes a supervisão não acompanha o tempo
proposto para a execusão das actividades do projecto;
 Testados 15 marcadores microssatelite, encontrados na literatura, e
apenas dois pares de marcadores da espécie Avicennia marina foram
aprovados para o estudo da sua estrutura genética;
 A quantidade de DNA obtida atravéz do método CTAB e os kits de
extração Zymo research e Nucleospin plant II, para a espécie Ceriops
tagal, foi baixa ( > 60 ng/ml).
SECÇÃO 1: Object. Cont.
A proposta de solução dos mesmos
 Continuar a tentar outros método de extraccao para plantas
com altos níveis de polissacarídeos e fenóis e testar outros
Kits de extração de DNA para a espécie Ceriops tagal;
 Criar novos marcadores microssatelite, para as espécies
Avicennia marina e Ceriops tagal.
SECÇÃO 2: Os resultados do projecto
Os resultados principais alcançados;
 Local de amostragem: Costa do Sol –
Província de Maputo.
 Laboratório do Inqaba Biotech - Pretória.
 DNA isolado (61.3 ng/µl) em 1 amostra da
folha, kit Zymo Research Plant/Seed DNA
 Isoladas as sequências com SSR de
Avicennia marina, método FIASCO (Fast
solation by AFLP of Sequences Containing
Repeats)(Zane et al., 2002 ).
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
Método FIASCO consiste numa reacção eficiente de
digestão e ligação, seguindo o procedimento do AFLP.
1. Digestão DNA: 10μL de DNA genômico, 1 μL of MseI,
2 μL 10x Buffer R, volume total de 20 μL. Incubação a
65ºC por 2 h.
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
2. Ligação: 2 μL adaptor, 2 μL digested DNA, 1 μL T4
buffer, 2 μL of H2O, 1 μL PEG 4000. Incubado 22º C 1 h.
Amplificado PCR: 1 μL DNA digerido-ligado, 2 μL AFLP
Adaptor – specific MseI-N primer, 12.5 μL Dream Taq,
V.total 25 μL, a 95ºC 2 min, 95ºC 30 sec, 53ºC 1 mim, 72ºC
2 mim and 72ºC at 7 mim, 25 ciclos.
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
3. Hibridização do DNA com sondas
3 grupos de combinações de di, tri e tetranucleotidos: Grupo 1
(GATA)6, (GTG)9 e (AGGG)6, G2 (ATA)7, (AAAT)6 e (AC)10, e
G3 (TGC)8 e (CT)10.
Portanto, 23 µL de DNA amplificado foi misturado com 1μL de
oligonucleotidos biotinados, e of SSC 4.2 X SDS 0.07% para o
volume t. de 100 µL.
As moleculas de DNA hibridizadas foram selectiv.
capturadas por esferas magnéticas de streptavidina.
As esferas previamente preparadas foram adicionadas ao DNA +
moléculas hibridizadas c sondas e incubadas 30min c constante
agitação.
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
O complexo esferas-sondas-DNA foi separado do tampão de
hibridização por um campo magnético, e descartado.
A duas últimas etapas foram 3 lavagens não específicas e 3
lavagens específicas.
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
Sustentabilidade do projecto
Os fundos e o tempo previsto para a
implementacao do projecto não serão suficientes,
devido a etapa da criação dos marcadores
microssatélite para as duas espécies.
SECÇÃO 2: Os resul. Cont.
A utilidade destes para a área de pesquisa
 A biblioteca dos microssatelites será util para estudos
sobre as população das espécies de Avicennia marina
e Ceriops tagal, e para outras espécies que tiverem
compatibilidade com as mesmas.
 Saber sobre a estrutura genética, o fluxo de genes;
 Recomendar em casos de reflorestamento.
OBRIGADA