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Avaliação da atividade antimicrobiana do óleo essencial de Rosmarinus
X Salão de
officinalis L. frente a Pseudomonas aeruginosa
Iniciação
Científica
PUCRS
Isabel da Costa Schaefer1, Marcos Aurélio Almeida Pereira1e 2, Denise Milão1 (orientador)
1
Faculdade de Farmácia, PUCRS
2
PGETEMA, PUCRS
Introdução
Devido ao aumento crescente da resistência bacteriana aos medicamentos disponíveis
no mercado, alternativas terapêuticas aos antimicrobianos devem ser estudadas e pesquisadas.
O alecrim, Rosmarinus officinalis (Lamiaceae), possui diversos usos e é amplamente utilizado
empiricamente como antioxidante, antitumoral, antiinflamatório, analgésico, diurético, alem
de diversos outros usos. A utilização de óleos essenciais na pesquisa sobre a atividade
antimicrobiana é bastante intensa e tem aumentado a cada ano. Existe uma demanda pelo uso
terapêutico de produtos naturais e várias pesquisas apontam para encontrar óleos essenciais
com atividade antimicrobiana suficiente para poderem ser utilizados como componentes
ativos em produtos farmacêuticos. A presente pesquisa teve como objetivo estudar a atividade
antimicrobiana do óleo essencial de Rosmarinus officinalis L contra Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853. O óleo essencial foi obtido por destilação por arraste de vapor das partes aéreas
floridas Rosmarinus officinalis L. A Pseudomonas aeruginosa é um microorganismo
patogênico oportunista que não deve estar presente em formulações farmacêuticas.
Metodologia
Para a verificação da atividade antimicrobiana do óleo essencial, foi utilizado o
método de difusão em ágar. Foi preparado uma suspensão de Pseudomonas aeruginosa em
solução salina (NaCl 0,9%) para obter aproximadamente 108 UFC/mL (escala de McFarland).
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Foram preparadas placas de Petry contendo 15 mL de agar Müller-Hinton como meio de
cultura base. Sobre essa foi adicionado uma camada do mesmo meio de cultura inoculado
com Pseudomonas aeruginosa na concentração de aproximadamente 105 UFC/mL. Foram
distribuídos cilindros de aço inoxidável esterilizados nas placas onde foi adicionado 0,2 mL
do óleo essencial nas concentrações de 8%, 4%, 2%, 1%, 0,5%, 0,25% e 0,125% utilizando
Tween 20. As placas foram colocadas em estufa a 37ºC por 24 horas. Apos este período, foi
realizado a análise dos resultados através da observação e medida dos halos de inibição.
Resultados e discussão
Após o período de incubação de 24 horas não foram observados formação de halo de
inibição em nenhuma das concentrações testadas do óleo essencial. Este resultado difere dos
encontrados na literatura onde este óleo essencial apresenta halo de inibição contra P.
aeruginosa. Neste tipo de ensaio, é necessário que ocorra a difusão da substância testada
através do meio de cultura sólido para o aparecimento de um halo de inibição de crescimento
do microorganismo. Este método é utilizado normalmente para substâncias de natureza
hidrofílica e os testes são padronizados para esta condição (Nascimento, 2007). Desta forma,
nos ensaios com óleos essenciais, que são voláteis, insolúveis em água, viscosos e complexos, é
necessário utilizar solventes e agentes solubilizantes, como por exemplo do Tween 20
(Fraternale, 2006), Tween 80 (Tzakou, 2007), DMSO - dimetilsulfóxido (Sabulal, 2007),
Dietil-eter (Oladimeji, 2004) e álcool (Tan, 2007). Neste estudo foi utilizado Tween 20 como
solubilizante, mas apesar disto pode não ter ocorrido difusão suficiente do óleo essencial
através do ágar para formar halo de inibição. Também podem ter ocorrido outros fatores que
interferem na formação dos halos de inibição. A carga microbiana inicial e o tempo da fase lag
do microorganismo relacionadas com a velocidade de difusão da substância no ágar são
determinantes para a formação e o tamanho do halo de inibição. Por isto o tempo da prédifusão é importante, pois a temperatura é mantida abaixo da temperatura ideal de crescimento
do microorganismo permitindo que a difusão do produto atinja uma área maior no ágar. Alem
disto, é importante determinar a concentração crítica que é a concentração do produto na
posição limítrofe entre o crescimento e a inibição e a população crítica que é a população
microbiana no tempo (t0), no qual ainda não foi atingida a população inibitória. Um
crescimento além da população critica resulta numa quantidade de microorganismos capazes de
absorver completamente o produto testado e impedindo uma maior difusão (Lourenço, 2006).
Também deve ser levado em consideração na interpretação dos resultados que a
atividade antimicrobiana de um mesmo óleo essencial pode variar de acordo com a sua
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composição química que sofre influência da região onde a planta é cultivada e das condições de
coleta, de armazenamento e secagem, assim como das condições de extração do óleo da planta.
Conclusão
Neste estudo não foi possível observar ação antimicrobiana de óleo essencial de
Rosmarinus officinalis L. contra Pseudomonas aeruginosa, mas outros estudos devem ser
realizados sendo necessário padronizar as condições de ensaio conciliando o fenômeno físico
de difusão (velocidade de difusão dos componentes lipofílico do óleo essencial através do
ágar) e os fenômenos biológicos relacionados ao microorganismo (concentração do inoculo e
tempo de crescimento), ao meio de cultura (espessura e uniformidade da camada do meio de
cultura) e as condições de incubação (tempo de pré-incubação), para que a distância da
difusão possa ser medida, após a revelação sob a forma de halo de inibição.
Referências
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Departamento de Farmácia da Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, 2006.
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de métodos. Revista Brasileira de Farmacognosia. Vol. 17, Nº 1 (2007), pp. 108-113.
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Greece. Journal of Essencial Oil Research. Vol. 19, (2007), pp. 292-294.
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