54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Aplicação da técnica de DGGE
na investigação de genes ribossomais
de microrganismos que realizam
fermentação lática em cacau
Santana, LKD; Aragão, EV; Santos, ACF; Rezende, RP; Dias, JCT
Universidade estadual de Santa Cruz (UESC-BA)
[email protected]
Palavras-chave: Fermentação, cacau, bacterias láticas, 16S RNA, DGGE
A análise de seqüência dos genes para o RNA ribossomal (rRNA) tem sido amplamente aplicada em estudos filogenéticos
e ecológicos. O gene para o rRNA 16S é uma excelente molécula marcadora, uma vez que: está presente em todas as
bactérias e apresenta regiões conservadas, assim como região variada (região ITS flanqueadora dos genes 16S e 23S),
tornando possível o desenvolvimento de primers e sondas com diferentes níveis de especificidade. Estudos a cerca de
comunidades microbianas tem utilizado a técnica de DGGE, na qual iniciadores de regiões específicas do rDNA tem
em uma de suas extremidades um grampo GC que impede total desnaturação da molécula de DNA. Com o objetivo
de aplicar a técnica de DGGE na investigação de genes ribossomais de microrganismos que realizam fermentação lática
no cacau foram utilizados iniciadores baseados em regiões específicas do rRNA. Para tanto foi realizada durante seis
dias, em intervalos de 12 horas, coletas de amêndoas de cacau em fermentação em cochos na Fazenda São Jorge (Km 20
da rodovia Ilhéus- Uruçuca). As amostras foram despolpadas com auxilio de Tween 80 a 0,1%. O DNA das amostras
foi extraído utilizando protocolo baseado em sonicação, choque térmico e extração com fenol- clorofórmio- álcoolisoamílico (25:24:1) e posteriormente amplificados com o conjunto de iniciadores Lac 1, Lac 2 e Lac 3. A diversidade
genética destes genes foi determinada pelo perfil de bandas no gel de DGGE realizado com gradientes de 35-60%
e 20-70%. Considerando que cada banda no gel corresponde a um microrganismo, um grupo foi constante nas 11
amostras coletadas, sendo que a maior similaridade de bandas foi detectada entre 36 e 48 horas. Dois grupos surgem
após 36 horas mantendo-se constante até as 120 horas de fermentação. O numero máximo de bandas foi de 11 para
os primers Lac 1 e 2 e de 12 para Lac 3 e 2. Este trabalho é um trabalho pioneiro, no qual demonstra a possibilidade
da utilização da técnica de DGGE em pesquisa básica e ecologia microbiana.
Orgão Finaciador FAPESB.
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