ESTUDO COMPARATIVO ENTRE A ATIVIDADE PROLIFERATIVA DO EPITÉLIO
MAMÁRIO DE RATAS NORMAIS E EM ESTRO PERMANENTE POR MEIO DA
EXPRESSÃO DO ANTÍGENO Ki-67
Sara Batista Lima (bolsista PIBIC/CNPq), Prof. Dr. Benedito Borges da Silva
(Orientador, Dpto. Materno-Infantil - UFPI)
INTRODUÇÃO: O estradiol tem um papel chave na cinética celular e na progressão das neoplasias
da mama sendo seu estudo importante para o desenvolvimento de tratamentos. Todavia, o estudo
das interações hormonais no epitélio humano normal, por questões éticas, é limitado daí a busca de
modelos experimentais. O modelo animal representa uma boa opção, tem contribuído bastante para a
compreensão da biologia e desenvolvimento de estratégias terapêuticas no câncer mamário
(HARRIS, 1986; CLARKE, 1996). A rata em estro-permanente é um modelo biológico sob constante
estímulo estrogênico, que vem despertando interesse para o estudo de diversas substâncias
hormonais. Atualmente existe a preferência pelo estro permanente conseguido por meio da
administração de androgênios, em particular propionato de testosterona nos primeiros dias de vida
(BARRACLOUGH, 1961). Porém, há escassez de estudos comparando a proliferação celular da
mama de ratas com o ciclo normal com a proliferação celular da mama de ratas em estro permanente
por meio de um marcador sensível como o Ki-67, o que nos levou à concepção do presente estudo.
METODOLOGIA: 1. DESENHO DO ESTUDO: estudo experimental randomizado, controlado. 2.
SELEÇÃO DOS ANIMAIS: Foram utilizadas ratas Wistar-Hannover (n=26) do biotério do CCA da
UFPI. 3. CÁLCULO DA AMOSTRA E DIVISÃO DOS GRUPOS: Os animais foram divididos
aleatoriamente em dois grupos: Grupo I (controle, n=13) e Grupo II (Estudo, Estro permanente, n=13).
As do grupo II (Estro permanente) receberam no 2º dia de vida injeção SC de 1,25 mg de propionato
de testosterona por via dorsal da região lombar até a cervical. Aos 90 dias de vida, a avaliação do
estro permanente dos animais do Grupo II foi realizada considerando a estenose do terço inferior e
queratinização da vagina após autópsia. A seguir, os animais foram eutanasiadas com pentobarbital
sódico intraperitoneal e foram submetidas à ressecção do primeiro par mamário abodômino-inguinal
que foi parafinizado. 4. MÉTODO IMUNOISTOQUÍMICO: A análise imunoistoquímica foi realizada em
laboratório de consultoria em São Paulo. Os cortes foram corados pela técnica de estreptavidinaperoxidase com o anticorpo anti-Ki-67 (MIB-5/DAKO/REF.: M7240) para posterior análise no
microscópio. 5. MÉTODO QUANTITATIVO: As células eram consideradas com expressão positiva
para o Ki-67 caso os núcleos exibissem coloração marrom. Realizou-se contagem das células no
setor de Pesquisa do Laboratório de Ginecologia do Hospital Getúlio Vargas, utilizando um
microscópio de luz Marca Nikon Eclipse E-400 (Tóquio, Japão), acoplado a vídeocâmera colorida
(Samsung) com captura de imagem em microcomputador Pentium IV. A contagem de células por
lâmina, processadas pelo Imagelab® (Softium Informática), foi no mínimo de 500(aumento de 400x).
O índice de proliferação celular para o ki-67 foi determinado por meio da relação entre núcleos
corados e o total de núcleos contados multiplicado por 100. 6. MÉTODO ESTATÍSTICO: A análise
dos dados foi realizada pelo teste t de Student. O nível de significância para rejeição da hipótese de
nulidade foi fixado em α<0,05.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O estudo quantitativo mostrou que o valor da porcentagem média
dos núcleos corados com o MIB-5 no grupo I (controle) foi de 15,94 ± 1,16, enquanto no grupo II
(estro permanente) foi de 41,79 ± 1.30, conforme Tabela 01. O estudo apresenta significância
(p<0001).
Tabela I. Média da porcentagem e desvio padrão de núcleos corados com Ki-67 no epitélio mamários
de ratas adultas em grupos I (controle) e II (estro permanente)
Grupo
N
Média
Erro
Desvio
Padrão
Padrão
Mínimo
Mediana
Máximo
I
13
15,94
1,16
4,18
9,74
16,05
22,75
IIII
13
41,79
1,30
4,70
36,56
40,00
51,35
Figura 1. Fotomicrografia de um corte histológico do epitélio mamário de ratas. Note os núcleos
corados em marrom com o anti-Ki-67, anticorpo MIB-5, no grupo controle (A) e no grupo estro
permanente (B).
Após a análise dos dados, foi encontrada uma maior concentração de células em atividade
proliferativa na glândula mamária de ratas do grupo em estro permanente em com comparação ao
grupo controle. Estes achados se devem ao contínuo influxo de estrogênios, e estão de acordo com
dados relatados por Jacobsohn e Norgren (1965). O propionato de testosterona. A droga
administrada nos primeiros dias de vida, em estágio crítico da diferenciação hipotalâmica, lesa a área
pré-optica supraquiasmática, responsavel pela liberação cíclica de gonadotrofinas (BARRACLOUGH
e GORSKI, 1961). Quando adultos, os animais apresentavam anovulação, ovário policísticos
e
comprtamento agressivo em contato com os machos ( HARRIS e LEVINE, 1965; DA SILVA, 1997).
Portanto, as ratas em estro-permanente representariam um modelo experimental ideal para o estudo
de drogas hormonais sobre a glândula mamária.
CONCLUSÃO: O estudo mostra que as ratas androgenizadas nos primeiros dias de vida tiveram
significativo aumento da proliferação do epitélio mamário em comparação com as ratas normais do
grupo, comprovado por meio da expressão imunistoquímica do antígeno Ki-67.
APOIO: Universidade Federal do Piauí.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1.BARRACLOUGH, C. A. e GORSKI, R. A. Evidency that hypothalamus is responsible for androgeninduced sterility in female rat. Endocrinology, v. 66, p, 68-79, 1961.
2.CLARKE, R. Animals models of breast câncer: their diversity and role in biomedical research.
Breast Cancer Res. v. 3, p. 1-6, 1996.
3.DOWSETT,M. RING,A. Mechanisms of tamoxifen resistance. Endocr.Relat Cancer, v. 11, p. 643658, 2004.
4.HARRIS, C. C. Human tissue and cells in carcinogenesis research.Cancer Res. v. 47, p. 1-10,
1967.
5.PFEIFFER, C. A. Sexual differences of hipophises and their determination by gonads. Amer J Anat,
v. 58, p. 195, 1936.
6.SILVA, B.B, LOPES-COSTA, P.V, ROSAL, M.A, et al. Morphological and morphometric analysis of
the adrenal cortex of androgenized female rats.GynecolObstet Invest. 2007;64:44Y48
PALAVRAS-CHAVE: Estro-permanente. Mama. Wistar-Hannover.