55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Estudo de expressão gênica entre os sexos e suas
implicações na busca por genes candidatos para as
fissuras lábio-palatinas não-sindrômicas
Kobayashi, GS; Sunaga, DY; Bueno, DF; Aguena, M; Passos-Bueno, MR
Laboratório de Estudo de Genes do Desenvolvimento
Instituto de Biociências – USP
[email protected]
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Palavras-chave: fissura lábio-palatina, expressão gênica, células-tronco mesenquimais, sexo, genes candidatos
As fissuras lábio-palatinas não-sindrômicas (FLP/NS) são uma das malformações congênitas mais comuns. É
considerada uma doença de etiologia multifatorial, tendo influência de vários loci e fatores ambientais, sendo
duas vezes mais prevalente no sexo masculino em relação ao feminino. As FLP/NS podem ser originadas em
decorrência de distúrbios de migração, proliferação, diferenciação celular e/ou apoptose durante o desenvolvimento
embrionário. Há um esforço mundial na tentativa de se identificar genes de predisposição e compreender a sua
etiologia e patogenia, porém, o entendimento desta doença continua relativamente pobre. Considerando-se que as
células-tronco mesenquimais (CTMs) correspondem a um tipo celular mais indiferenciado e de fácil obtenção, e
as mais próximas às células presentes no embrião, um dos objetivos de nosso grupo é identificar genes associados
às FLP/NS por meio da comparação entre os perfis de expressão gênica de CTMs de indivíduos portadores de
FLP/NS e controles. Porém, para tanto, é necessário averiguar se o sexo interfere no perfil de expressão gênica.
Atualmente tem-se relevado a importância da arquitetura genética e regulação gênica sexo-específica, e seu efeito
no fenótipo. Discute-se que estudos que ignoram estes fatores poderiam falhar em identificar uma proporção
significativa de genes de risco para doenças complexas (Ober et al., Nature Reviews Genetics 9, 2008). Portanto,
com o objetivo de verificar se o sexo interfere no perfil de expressão gênica e na análise de identificação dos genes
candidatos às FLP/NS, foram estabelecidas 12 culturas de CTMs de polpa dentária de crianças normais (6 meninos
e 6 meninas), segundo protocolo previamente estabelecido (Costa&Bueno et al., 2008). O RNA total foi extraído com
o kit NucleoSpinII (MACHEREY-NAGEL) e hibridado em chips Human Gene 1.0 ST de microarray da Affymetrix. Os
dados foram normalizados com o método Robust Multi-Array Average (RMA). Os genes diferencialmente expressos
(GDEs) foram selecionados por 2 métodos distintos: Limma e RankProd, ambos com p-valor < 0.05 ajustados por
False Discovery Rate (FDR). Foram identificados 1270 GDEs com o Limma e 103 GDEs com o RankProd, sendo 29
GDEs comuns entre os dois resultados. A análise funcional com os programas Ingenuity Pathway Analysis (http://
www.ingenuity.com/) e DAVID Bioinformatics Resources (http://david.abcc.ncifcrf.gov/) indicou o envolvimento
destes genes com funções de resposta imune, regulação transcricional, e espermatogênese. Ainda com o Ingenuity
foi possível identificar uma via de sinalização relacionada ao sistema imune e desenvolvimento embrionário
contendo 13 genes up-regulated no sexo masculino. Além disso, 19 dos 29 GDEs se localizam em autossomos,
indicando uma variação natural não só inerente aos cromossomos sexuais. Uma vez mais estudados e validados
com outras metodologias, esses dados auxiliarão na interpretação do perfil de expressão observado em indivíduos
com FLP/NS e controles, e poderão ser importantes para outros grupos utilizando CTMs como ferramenta de
estudo.
Apoio: CEPID/FAPESP, CNPq