Componentes: Danilo Predes Gabriel Soares Isabela Dale Sucupira João Gabriel O. Silva Matheus Nunes Vírus da dengue •  Flavovírus (classificado também como arbovírus); •  Fita única de RNA; •  Quatro Mpos denominados DEN-­‐1, DEN-­‐2, DEN-­‐3 e DEN-­‐4. Capsídeo Extraído de viralzone.expasy.org Capsídeo Proteína E só é expressa de forma correta, quando a proteína M também é expressa. Extraído de viralzone.expasy.org Incidência da dengue Ministério da Saúde Incidência da dengue Tipos de vacinas •  Vivas: Compostas de microrganismos vivos atenuados em laboratório; •  InaMvadas: Compostas de microrganismos inaMvados ou de fragmentos dele. Propostas de vacinas •  pVAC1DEN3: Duas mutações no domínio III da proteína E, resultando em mudanças dos aminoácidos Y para S (posição 478) e de V para A (posição 485) •  pVAC2DEN3: Duas mutações no domínio III da proteína E, K488T e K501R •  pVAC3DEN3: Uma única mutação na proteína M (prM), F39C. Materiais e Métodos Foram uMlizados: •  Células C6/36, Vero e HeLa •  Camundongos fêmea Balb/c de 3 semanas E as técnicas de: •  ELISA •  Imunoprecipitação e Immunoblolng •  Ensaio de sobrevivência a dose letal Expression of recombinant DENV-­‐3 prM and E proteins 1. 
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pVAC1DEN3 pVAC2DEN3 pVAC3DEN3 pCI DEN3 Expression of recombinant DENV-­‐3 prM and E proteins 1. 
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pVAC1DEN3 pVAC2DEN3 pVAC3DEN3 pCI AnMbody response in immunized mice Cytokine response in immunized mice DEN-­‐3-­‐specific T cell proliferaMon in DNA-­‐vaccinated mice Fig. 4 ProliferaMon responses to dengue virus in mice receiving DNA vaccines. Splenocytes, obtained from each mouse 7 days aoer the final immunizaMon, were tested by a BrdU incorporaMon assay. C-­‐: negaMve control (RPMI Medium); 104: 1 3 104 pfu/ml of inacMvated DENV-­‐3; 106: 1 3 106 pfu/ml of inacMvated DENV-­‐3; ConA concanavalin A DEN-­‐3-­‐specific T cell proliferaMon in DNA-­‐vaccinated mice Fig. 4 ProliferaMon responses to dengue virus in mice receiving DNA vaccines. Splenocytes, obtained from each mouse 7 days aoer the final immunizaMon, were tested by a BrdU incorporaMon assay. C-­‐: negaMve control (RPMI Medium); 104: 1 3 104 pfu/ml of inacMvated DENV-­‐3; 106: 1 3 106 pfu/ml of inacMvated DENV-­‐3; ConA concanavalin A Challenge of immunized mice Conclusão •  Imunização com pVAC3DEN3 induziu proteção sólida contra desafio de DENV-­‐3 , comparado ao observado no camundongo com DENV-­‐3 inoculado. •  A menor taxa de proteção observada em animais imunizados com outros clones de DNA recombinante, ocorre possivelmente devido à mutações geradas no domínio III da região E. Essa região é vastamente considerada uma região alvo críMca para anMcorpos neutralizantes. Conclusão Considerando que a resposta imune induzida pela vacina pVAC3DEN3 foi boa, e considerando que os outros trabalhos desse mesmo grupo de pesquisa, certamente a vacina pVAC3DEN3 será analisada em um formato de vacina com DNA tetravalente para determinação de eficiência da vacina. Obrigado! Danilo Predes Gabriel Soares Isabela Dale Sucupira João Gabriel O. Silva Matheus Nunes