UNIVERSIDADE
FEDERAL
RURAL
INSTITUTO
CURSO
ESTUDO
AO
DE
PÓS-GRADUAÇÃO
COMPARATIVO
CARRAPATO
DE
DA
EFETIVIDADE
Boophilus
Ixodidae)
EM
DO
RIO
DE
JANEIRO
BIOLOGIA
MEDICINA
DOS
microplus
VETERINÁRIA
ACARICIDAS
NO
(Canestrini)
COMBATE
(Acarina:
NAS R E G I Õ E S DE A R U J Á E P I N D A M O N H A N G A B A
NO ESTADO DE SÃO P A U L O
SOSUKE
SOB
A
ORIENTAÇÃO
DO
TAKAHASHI
PROFESSOR:
DR. G O N Z A L O E F R A I N M O Y A B O R J A
TESE SUBMETIDA COMO REQUISITO
PARCIAL PARA A OBTENÇÃO
DO
G R A U DE M E S T R E EM M E D I C I N A VETERINÁRIA,
ÇÃO
EM
RIA
Itaguaí,
Rio de J a n e i r o
setembro,
1985
ÁREA
DE
PARASITOLOGIA
CONCENTRAVETERINÁ-
TÍTULO
ESTUDO
COMBATE
ni)
COMPARATIVO
AO
DA EFETIVIDADE
CARRAPATO
(Acarina:
DA TESE
Boophilus
Ixodidae)
PINDAMONHANGABA
NO
NAS
DOS
ACARICIDAS
microplus
REGIÕES
ESTADO
DE
DE
SÃO
NO
(CanestriARUJÁ
E
PAULO
AUTOR
SOSUKE
TAKAHASHI
DR.
GONZALO EFRAIN MOYA
Presidente
DR.
HUMBERTO
MACHARETTI
DR.
GENEROSO
MANOEL
BORJA
CHAGAS
À minha
esposa
Ao m e u
Aos
meus
pais
filho
Gunji
Fátima
Ákira
e Teruko
BIOGRAFIA
SOSUKE
Takahashi,
onde
TAKAHASHI,
nasceu
realizou
Municipal
Municipal
em
o
de
20
de
novos
arroz,
pela
junho
e
o
Gunji
de
primário
Ishinomaki
de
de
disciplina
de
Takahashi
1946,
e
em
e
Teruko
Miyagi,
Japão,
secundário
curso
na
colegial
no
Escola
Colégio
de M i y a g i .
Tóquio
curso
de
curso
Ingressou
de
filho
na
Faculdade
Agricultura
e
Fitossanitarismo
mesmo
durante
Ao
final
do
herbicidas
como
tese
todo
seus
de
1970,
curso
e
Agronomia
Tecnologia
em
do
de
o
em
universitário
mecanismos
Bacharelado.
Tal
1966,
tendo
período
de
da
Universidade
concluindo
sido
bolsista
o
da
universitário.
optou
ação
pela
na
herbicida
invenção
plantação
foi
de
patenteado
Universidade.
Em
1970,
Agrícolas
pela
Tecnologia.
Logo
Laboratório
Tóquio,
Japão
Univesidade
após,
Central
até
obteve
o
grau
de
ingressou
de
novembro
à
Pesquisas
de
1978.
de
Bacharel
Tóquio
de
Divisão
de
da
Showa
em
Ciências
Agricultura
Química
Denko
Fina
S.A.,
e
no
em
Neste
período,
realizou
pesticidas,
produtos
invenção
desenvolvimento
e
"Stucker".
veterinários
do
1973,
participou
desenvolvimento
dos
produtos
Nacional
Animal,
Saúde
Em
1974,
da
Associação
em
1975,
Aviária
Japonesa
UFRGS,
Brasil.
acaricida
SK-09
toxicologia
e
No
e
1978,
período
8
de
sobre
em
SK-41,
1971,
denominado
pesquisas
veterinários
Neste
8
publicações
grupo
Curso
no
da
sobre
Instituto
e
Conferência
Zoologia
Intensivo
mesmo
ano,
novos
Showa
anos,
e
e,
Coccidiose
inventou
ao
o
novo
grupo
de
imigrou
ao
produtos.
Denko
S.A.
sintetizou
10
Anual
Aplicada
sobre
incorporando-se
da
de
do
criar
saiu
herbicida
Entomologia
1º
a
pesquisas
medicamentos;
ativamente
SK-38,
continuou
Em
produtos,
de
do
e
Tóquio.
participou
participou
na
Brasil.
em
e
novo
Em
de
estudos
e
cerca
patentes
de
6
internacionais
mil
e
domésticas.
Após
Federal
Divisão
onde
Rural
do
pesquisou
mestrado
do
meses
Rio
Agroquímica
Em
Rural
5
em
Rio
novas
1981,
no
de
da
Janeiro.
Sandoz
formulações
iniciou
Parasitologia
de
Brasil,
Janeiro.
o
ingressou
De
1979
S.A.,
Rio
de
Curso
a
à
1981,
de
Universidade
trabalhou
Janeiro,
na
Brasil,
pesticidas.
de
Veterinária
Pós-Graduação
da
a
Universidade
nível
de
Federal
AGRADECIMENTOS
Agradecimento
Unversidade
EDISON
Federal
BARBOSA
dedicada
e
do
DE
MACHARETTI
RESENDE,
de
Veterinária,
NICOLAU
DA
no
informações
os
ao
DONALD
Medicine
-
de
referências
HUGO
a
amizade
MOYA
CHAGAS,
HANSEN
YASUO
of
informação
Doutor
pelo
a
mim
BORJA,
pela
HUMBERTO
prestimosa
SHIGEO
de
de
auxílio
Pós-Graduação
LAERTE
e
em
e
GRISI
esclarecimentos
trabalho;
da
Medicine,
Depertment
e
Curso
deste
localização
Professor
of
Professor
UFRRJ;
Professores
FREIRE,
Veterinary
para
ao
SERRA
Doutor
of
à
e
EFRAIN
do
desenvolvimento
ao
da
dispensada;
Coordenadores
MAUÉS
Vice-Reitor
(UFRRJ),
apoio
ingresso
MANOEL
Parasitologia
Schoool
pelo
GENEROSO
mim
ao
Janeiro
GONZALO
aos
prestados
de
Professores
e
a
especial
Rio
oportunidade
aos
orientação
em
Oregon
Oregon,
referências
CHINZEI
Medial
da
Mie
Zoology,
State
University
E.E.U.U.,
-
pelas
internacionais;
University,
Japão,
pelo
School
envio
técnica;
KITAOKA
do
National
Institute
of
vii
Animal
Health,
Tsukuba,
Japão,
pelo
envio
de
referências
bibliográficas;
ao
pela
Doutor
doação
de
ao
S.A.,
pelo
reagentes
Sr.
Pós-Graduação,
aos
dedicação
todos
SERGIO
pelo
os
AKIO
de
apoio
KONDO
todo
prestação
e
da
o
carinho
do
de
da
Beecham
Japan
S.A.,
eletroforese;
Professores
funcionários
e
TSUTSUMI
para
acompanhamento
a
pela
YOSHIATSU
Curso
Fatec
Química
bioensaio
e
Industrial
realizado;
colegas
do
Curso
de
demonstrado;
de
serviço.
Parasitologia
da
UFRRJ
viii
ABREVIATURAS
1. A C h E
Acetilcolinesterase
2. BIS
N,N-Metilenbisacrilamida
3. BPB
Azul de B r o m o f e n o l
4. DL 50
Dose Letal
5. FAO
OrganizaÇão Mundial
50
de A l i m e n t o s
e Agricultura
6. HJ
Hormônio Juvenil
7. MAO
Monoaminoxidase
8. P A G E
Eletroforese
9. PAS
Ácido Periódico-Schiff
em Gel de P o l i a c r i l a m i d a
10. p p m
partes por m i l h ã o
11.
(p/p)%C
b/a + b x 100; onde,
12.
(p/v)%T
(a + b)%
a=acrilamida;
b=BIS
; peso total dos p r o d u t o s
dissolvidos
em
13. P i n d a b a
Pindamonhangaba
14. S D S - P A G
Eletroforese
100 ml de água
em Gel de P o l i a c r i l a m i d a
com D o d e c i l s u l f a t o
15. SDS
Dodecilsulfato
16. Tris
Tris
17. Vn
Vitelina
18. Vg
Vitelogenina
de S ó d i o
de Sódio
(hidroximetil)
aminoetano
Í N D I C E
pág.
RESUMO
XV
SUMMARY
I.
xvii
INTRODUÇÃO
II.
REVISÃO
A.
1
DE
IMPORTÂNCIA
Boophilus
B.
C.
III.
A.
LITERATURA
ECONÔMICA
3
DO
CARRAPATO
microplus
3
RESITÊNCIA
5
DETERMINAÇÃO
1.
Bioensaio
2.
Estudo
MATERIAL
ANÁLISE
DE
DA
RESISTÊNCIA
7
Direto
7
10
Bioquímico
14
E MÉTODOS
DA
ARUJÁ
COMPARAÇÃO
E
DA
RESITÊNCIA
PINDAMONHANGABA
DOS
CARRAPATOS
15
X
B.
1.
Carrapato
2.
Produtos
3.
Procedimentos
do
Bioensaio
E CARACTERIZAÇÃO
Produtos
Usados
2.
Extração
e
Purificação
dos
e
Larvas
Ovos
ENZIMAS
18
18
das
Proteínas
18
em
Gel
de
Poliacrilamida
(PAGE)
4.
Eletroforese
em
Gel
de
Poliacrilamida
com
Sulfato
Identificação
de
das
Sódio
(SDS-PAGE)
Proteínas
21
22
DAS
LARVAS
EM
DIFERENTES
IDADES
INTERPRETAÇÃO
DA
1.
Eletroforese
em
Gel
de
Poliacrilamida
(PAGE)
2.
Eletroforese
em
Gel
de
Poliacrilamida
com
de
Sódio
3.
Sulfato
Caracterização
ELETROFORESE
da
APÊNDICE
22
24
(SDS-PAGE)
Resistência
dos
24
25
Carrapatos
26
30
CONCLUSÕES
REFERÊNCIAS
19
20
E DISCUSSÃO
SUSCEPTIBILIDADE
Dodecil
VII.
DAS
Eletroforese
RESULTADOS
VI.
17
3.
B.
V.
15
1.
5.
A.
Usados
ISOLAMENTO
Dodecil
IV.
15
BIBLIOGRÁFICAS
32
42
ÍNDICE
DAS
FIGURAS
pág.
Figura
1.
Desenvolvimento
microplus
dos
Figura
2.
seqüencial
na
Austrália
na
e
a
espécie
redução
da
Boophilus
eficiência
carrapatos
Ovopostura
de
43
B.
microplus
no
4º
a
6º
dia
após
a coleta
44
Figura
3.
Larvas
de
Figura
4.
Coleta
das
ensaio
com
Figura
5.
Transferência
um
Figura
6.
B.
funil
Funis
sua
de
microplus
larvas
um p i n c e l
das
lacrada
B.
nº
as
de
duas
semanas
microplus
no
de
idade
tubo
45
de
B.
microplus
para
45
filtro
larvas
44
de
1
larvas
papel
contendo
base
de
de
de
B.
microplus
com
46
xii
Figura
7.
Sistema
de
"Slab"
-
com
sem
poliacrilamida
Figura
8.
Comparação
da
ou
eletroforese
dodecil
microplus
em
de
Pindamonhangaba
diferentes
aos
gel
sulfato
susceptibilidade
B.
em
das
de
de
sódio
larvas
idades,
acaricidas,
de
provenientes
Coumaphos
e
Decamethrin
Figura
9.
48
Susceptibilidade
provenientes
das
de
larvas
Arujá
de
e
B.
microplus
Pindamonhangaba
a
5
acaricidas
Figura
10.
"Slab"
50
- eletroforese
as p r o t e í n a s
Figura
Figura
11.
12.
Figura
13.
dos
Cálculo
da
proteínas
dos
larvas
Identificação
larvas
pelo
e m gel
ovos
ovos
da
(L)
da
(O)
de
e das
relação
lipoproteína
corante
larvas
(L)
51
eletroforítica
larvas
glicoproteína
pela
poliacrilamida:
e das
(O)
migração
Identificação
das
46
Sudan
dos
das
(L)
51
ovos
(O)
e
52
PAS
dos
Negro
ovos
B
e
das
52
xiii
Figura
14.
"Slab"
com
- eletroforese
dodecil
proteínas
de
2
Figura
15.
SDS
Figura
16.
5%
minutos
e
Identificação
17.
em
18.
foram
sódio
das
(SDS-PAGE):
desnaturadas
2-mercaptoetanol
aplicadas
poliacrilamida
com
em
0,1%
glicoproteínas
com
100ºC
de
as
2%
de
durante
SDS
dos
ovos
53
pela
54
proteínas
das
larvas
entre
SDS-PAGE
54
eletroforética
em
das
proteínas
das
SDS-PAGE
Identificação
pela
de
das
Migração
larvas
Figura
ovos
de
de
em SDS-PAGE
Comparação
PAGE
Figura
dos
e
PAS
sulfato
em gel
reação
das
PAS
55
glicoproteínas
e SDS-PAGE
das
larvas
55
ÍNDICE
DAS
TABELAS
pág.
TABELA
1. S u s c e p t i b i l i d a d e
larvas
TABELA
Boophilus
2. Comparação
B.
da
provenientes
de São
período
microplus
em
susceptibilidade
microplus
Estado
de cada
de
de
duas
Arujá
Paulo
idade
das
Pindamonhangaba
das
semanas
e
de
larvas
de
47
de
idade,
Pindamonhangaba
no
49
RESUMO
As
de
duas
foram
larvas
regiões
impregnados
quanto
pela
com
solução
resistentes
aos
organofosforados,
aos
foi
a
mas,
analisadas
(PAGE)
e
por
ao
por
São
Paulo,
a
cinco
Coumaphos,
das
larvas
de
no
acaricidas
em
papéis
de
(Método
Pindamonhangaba
Arujá
com
houve
Brasil,
Fenvalerate
acaricidas
de
não
de
ao
40%
a
70%
diferença
resistência
tipo
maior
e
filtro
da
FAO).
mostraram-se
de
resistência
entre
ambas
as
Mackay
das
ou
resistência
larvas
tipo
ao
de
ambas
Ridgelands
Chlorfenvinfos
na
e
Coumaphos.
brutas
das
proteínas
eletroforese
eletroforese
sódio
de
microplus
sintéticos.
teve
estruturas
foram
de
de
similar
qual
resistência
As
sulfato
as
Boophilus
resistência
óleo
caracterização
regiões
baixa
que
piretróides
A
de
bovino,
Estado
provenientes
mais
Austrália,
à
inclusão
Larvas
as
do
Chlorfenvinphos,
Decamethrin)
regiões
carrapato
diferentes
testadas
(Malathion,
do
(SDS-PAGE).
em
gel
em
de
gel
dos
ovos
de
poliacrilamida
e
larvas
poliacrilamida
com
dodecil
xvi
A
proteína
identificada
como
proteínas
das
m e s m a dos
ovos.
principais
como
positiva
(P2)
na
biossíntese
controle
ovos
de
dos
Vitelogenina
e
e
como
pelo
(P5)
(P2)
uma
foi
principal
isoladas
não-acaricidas
da
ovos
também
identificada
dos
coloração
O
produtos
foi
proteínas
sendo
(P5),
proteína
não
dos
lipo-glicoproteína
larvas
Outra
entretanto,
principal
das
PAGE
das
foi
principais
identificada
como
larvas
larvas
a
(P6),
lipo-glicoproteína.
SDS-PAGE,
das
na
As
foram
sugeridas
devido
à
reação
PAS.
carrapatos
foi
e
bovinos
discutido
Vitelina.
pelo
pelos
sistemas
dos
conhecimento
da
SUMMARY
The
from
two
Brazil,
larvae
different
were
(Malathion,
impregnated
with
and
oil
that
of
susceptibility
Coumaphos,
of
larvae
of
with
there
to
microplus
São
Paulo
five
in
acaricides
Fenvalerate
in
filter
acaricides
and
paper
(FAO
packet
Method
-
Method).
40
was
showed
to
no
higher
70%
of
difference
resistant
degree
to
between
both
larvae
from
to synthetic pyrethroids.
regions
Australia,
characterization
was
which
resistant
analyzad
Boophilus
State
Pindamonhangaba
Arujá
but,
tick,
the
Organization
from
from
The
lower
of
solutions
Agriculture
organophosphorus,
both
for
enclosure
Larvae
regions
cattle
Chlorfenvinphos,
by
than
the
regions
tested
Decamethrin)
Food
of
similer
was
to
to
higher
Mackay
resistance
type
resistant
or
to
of
Ridgelands
type
Chlorfenvinphos
in
and
Coumaphos.
The
crude
by
polyacrylamide
SDS-polyacrylamide
of
extructed
gel
proteins
gel
of
eggs
and
electrophoresis
electrophoresis
(SDS-PAGE).
larvae
were
(PAGE)
and
The
main
xviii
protein
of
eggs
lipoglycoprotein
was
also
and
identified
product
by
as
main
as
SDS-PAGE
larvae
one
identified
Other
by
(P2)
a
were
reason
as
main
to
of
suggested
to
as
possitive
systems
was
of
Vitellin.
proteins
to
the
cattle
by
of
larvae
(P6),
however,
main
protein
The
be
identified
as
(P5),
eggs.
larvae
reaction
discussed
was
the
lipo-glycoprotein.
control
and
same
PAGE
two
protein
The
Vitellogenin
of
on
P2
of
of
eggs
and
was
not
isolated
P5
of
PAS.
ticks
knowlege
of
by
non-acaricide
biosynthesis
of
I.
Após
vêm
sendo
aos
insetos
muito
sido
a
II
Guerra
utilizados
em
usados,
extermínio
na
resistentes
no
então
do
Assim
sendo,
a
de
ação
freqüentemente,
induzido
uso.
realizados
Estudos
paralelamente
aparecimento
ao
de
No
comparativo
Arujá
e
luta
tais
vêm
sendo
compostos
têm
pragas.
excelentes
diversidade
possível
o
efeitos
dos
surgiram
raças
cada
épocas,
dos
parte
na
período
acaricidas
dos
de
que
ocorreu
o
carrapatos.
carrapatos
de
e
tem,
mostram
desenvolvemos
Estado
estrutura
utilizados
após
várias
dos
quanto
mesmos.
trabalho,
no
novos
compostos
por
sensibilidade
Pindamonhangaba,
uso,
resistência
resistência
acaricidas
Entretanto,
grande
em
sintéticos
carrapatos
julgou-se
dos
dos
aos
os
aos
desenvolvimento
presente
da
devido
uso
inseticidas
contra
aplicados.
decorrer
mecanismo
esse
época,
carrapatos
até
forma,
a
ostensiva
os
combate
mesma
determinada
dos
acaricidas
Da
no
paralelamente
descobertos
Em
Mundial,
tanto
geral.
e
INTRODUÇÃO
São
nos
um
estudo
municípios
Paulo,
a
de
cinco
acaricidas.
Estas
um
constante
padrão
Arujá;
Diazinon
Além
determinam
carrapatos.
regiões
e
de
foram
aplicação
Amitraz,
disso,
diferentes
escolhidas
as
em
de
acaricidas:
nelas
existe
Coumaphos,
em
Pindamonhangaba.
diferenças
durações
porque
para
climáticas
o
ciclo
nessas
vital
regiões
dos
II. R E V I S Ã O
A.
IMPORTÂNCIA
O
artrópodo
ECONÔMICA
carrapato
parasito
DE L I T E R A T U R A
DO C A R R A P A T O
bovino
do
B.
Boophilus microplus
microplus,
gado
bovino,
é
o
mais
atingindo-o
importante
de
várias
maneiras:
1)
Prejuízos
couro,
diretos
perda
na
de
produção
sangue
e
animal
queda
devido
na
a
produção
danos
de
no
leite
e
carne.
2)
Prejuízos
indiretos
causantes
ou
doenças
Apesar
da
vetores
de
estudos
detalhados
de
42
milhões
cabeça
de
gado
um
na
atribuídos
prejuízo
de
na
(U$
Cr$
como
a
de
agentes
Babesiose
importância
dos
existem
e
patogênicos
Anaplasmose.
carrapatos
atualmente,
como
poucos
bovinocultura.
Austrália,
ao
na
transmissão
patogênicos,
1972,
A$
tais
vasta
agentes
Em
estimads,
pela
carrapato
62
área
356
os
B.
prejuízos
microplus,
milhões),
correspondente
infestada
(McCOSKER,
milhões
foi
totais
foram
de
a
7,30
1979).
atribuído
anuais
ao
U$
No
cerca
por
Brasil,
parasitismo
pelo
carrapato
O
1)
os
produção
Reduzir
de
a
econômicas:
final
aos
aplicação
de
e
método
viável
economicamente
menos
carrapatos
O
DDT
obteve
produtos
ainda
1961,
a
primeiro
&
NORRIS,
tentativa
êxito.
B.
O
usados.
de
grande
ou
a
parasitos
prejuízos
crônicos
dinâmica
de
imersão
controle.
crônicos
e
muito
mais
tradicional,
Apesar
os
o
na
de
imersão
ou
custo
da
pelo
é
ainda
dos
hoje,
químico
mundialmente
foi
porém,
problema
consiste
controle
o
e
com
utilizado,
erradicados.
erradicado
arsenicais
extermínio
que
inconveniente
totalmente
aplicado
1980);
é
sendo
microplus,
doenças,
carrapatos.
Embora
estão
um
acarcidas,
porém,
venha
de
perdas
de
oneroso
dos
às
e,
método
banho
de
incluído
controle
introduzido
de
gado
rigoroso.
hoje
meio
no
transmissão
foi
por
populacional
Quanto
XIX,
aceitável.
não
destes
fatais.
e
seu
até
acaricidas
carrapato
(WHARTON
Latina,
do
século
de
principalmente:
morte
banhos
processo
compostos
em
dos
animais.
1979).
diretos
doenças
controle
do
visa
carrapato
materiais,
Este
Unidos
do
acaricidas
nos
mão-de-obra
os
das
carrapatos,
pulverização
novos
econômicas,
um
(BECK,
carne.
prejuízos
necessário
controle
e
custo
morte,
No
único
o
1974
prejudiciais
freqüência
conseqüentemente,
em
carrapatos
maioria
biologia
determinam
faz
leite
perdas
pela
A
dos
efeitos
as
causados
se
microplus
controle
Eliminar
na
2)
B.
na
em
Estados
1923
e
após
Austrália
e
América
carrapatos,
é
dos
a
o
ainda
não
resistência
aos
B. RESITÊNCIA
O
iniciado
controle
em
1895
resistência
(NOLAN
foi
por
pela
& ROULSTON,
A
acaricidas
químico
carrapato
produtos
primeira
B.
arsenicais
vez
microplus,
e,
em
determinada
foi
1936
nesta
a
espécie
1979).
resistência
foi
do
dividida
do
em
carrapato
4
B.
grupos
microplus
conforme
cada
aos
tipo
de
produto:
1) A r s e n i c a i s
2) DDT
3) BHC
e Clordienas
4) O r g a n o f o s f o r a d o s
carrapato
A
cronografia
B.
microplus
Os
1895
Quanto
e
a
1955
a
aos
e
sua
resistência
eliminação
destes
dos
de
o
No
Austrália
foram
o
sua
DDT,
BHC,
no
leite
mesmos
Figura
usados
durante
41
anos
reduzida
foi
no
e
o
tornaram
problema
de
de
detectada
na
85%
para
mercado,
e
inviável
da
1946
dos
1.
entre
para
a
14%.
1962,
Austrália
em
40%.
outros
Toxafene;
aparecimento
do
77%
utilizado
de
Dieldrin
retirados
o
na
foi
surgiram
resitência
mostrada
efetividade
como
Brasil,
DDT
da
é
foi
produto
carrapatos,
sendo
desenvolvimento
efetividade
deste
redução
organoclorados
produtos,
na
organoclorados,
Após
parte
do
arsenicais
1936
com
e Carbamatos
produtos
porém
a
da
resistência
por
o
uso
de
tais
mercado.
resistência
dos
carrapatos
foi
detectado
organoclorados
ROULSTON,
em
1948
e,
em
aprovado
1956,
no
Ethion
os
primeiro
em
1953
contra
organofosforados
e
o
como
carbamato
auxiliando
toxicidade
No
DDT
e
(NOLAN
&
determinada
a
organofosforados
ROULSTON,
Coumaphos
e
Dioxithion
carrapatos,
do
foram
enquanto
mercado
em
1962
resistência.
resistência
ao
de
de
campo
e,
carbamatos
1970,
introduzido
combater
os
Contudo,
um
no
após
a
produto
eliminação
dos
Dioxathion
foi
posteriormente
em
carrapatos
Chlordimeform
cancerígeno
novo
mercado,
SCHUNTNER
uso
em
de
(1971)
ratos,
seus
tumor
em
de
associado
para
corrente
(WHARTON
em
1971
a
todos
os
(NOLAN
&
Chlordimeform
organofosforados
estes
a
(NOLAN,
provável
posteriormente
identificada
&
NORRIS,
para
1981).
biotransformação
caracterizado
metabólitos,
foi
acaricida,
a
estudou
tendo
ratos
observados
tipo
resistentes
(4-clor-0-toluidina)
colaterais
foram
1979).
Em
produzir
&
(1962).
retirados
ano
e
(WHARTON
(1958),
dos
um
nível
foi
produtos
Diazinon
controle
foram
e
a
do
Diazinon,
Austrália
outros
Carbaril
no
decurso
organoclorados,
na
Dioxathiom
iniciais
organoclorados
à
organofosforado
carrapatos
mercado
efeitos
excelentes,
prima
os
Sucessivamente,
no
Os
foi
contra
aos
1970).
introduzidos
(1950),
o
combate
ROULSTON,
devido
1963
arsenicais,
1979).
Em
que,
contra
sua
como
1980).
contribuíram
para
do
efeito
matéria
capaz
Os
de
efeitos
que
o
acaricida
Chlordimeform
fosse
retirado
A
1974,
o
partir
de
contribuição
dos
piretróides
sintéticos.
NOLAN
resistência
cruzada
Entretanto,
a
raças
(Bos
tem
os
por
animais
indicus)
aos
mesmos.
no
seu
ao
o
parasito,
cruzamento
o
o
sintéticos
como
a
na
gado
da
DDT.
e
combate
baseada
com
e
a
dos
aparecimento
para
usado,
recebeu
grupo
no
métodos
sido
1976.
sintéticos
eficaz
novos
tem
ao
piretróides
mostrado
resistentes
ou
os
em
carrapatos
demonstraram
se
carrapatos
aos
piretóides
entre
Austrália,
mercado
pertencentes
(1977),
entre
resistentes
Na
parasitismo
al.
associação
organofosforados,
carrapatos
combate
acaricidas
et
no
os
dos
evitar
o
criação
de
raça
europeu
Zebu
(POWWEL,
1977).
Estas
parasitismo
uso
por
alternativas
carrapato,
indiscriminado
dos
para
visam
acaricidas,
enfrentar
um
controle
tendo
em
o
problema
maior
vista
quanto
o
seu
do
ao
alto
custo.
C.
DETERMINAÇÃO
1.
Bioensaio
DA
Direto
Segundo
microplus
tem
produtos:
1)
Arsenicais,
RESITÊNCIA
NOLAN
&
desenvolvido
ROULSOTN
resitência
(1979),
aos
o
carrapato
seguintes
grupos
B.
de
2) DDT,
3) BHC e Clordienas ,
4)
Organofosforados
A
testes
da
larval
não
usados
a.
em
filtro
da
resistência
"Dose-Mortalidade",
parasitário.
usando
Os
dois
deve
os
ser
baseada
carrapatos
métodos
no
seguintes
nos
estágio
têm
sido
HAYDOCK,
1962)
países:
de
Papel
de
As
larvas
impregnados
critério
Carbamatos.
confirmação
vários
Método
e
deste
Filtro
dos
Impregnado
carrapatos
com
solução
método
é
a
(STONE
são
de
&
expostas
óleo
de
mortalidade
a
papéis
acaricidas
das
larvas
de
e,
após
o
24
horas.
b. M é t o d o de I m e r s ã o
Este
dos
método
carrapatos
entre
discos
são
de
período,
as
para
um
disco
pela
observação
papel
da
outro
vários
pesquisadores:
1961)
e
em
filtro
de
ou
durante
dez
filtro
lado,
os
impregnados
com
seco.
após
24
métodos
também
imersão
1960),
formulados
emulsão
transferidas,
engorgitada),
WEBBER,
papéis
acaricidas
mortalidade
(fêmea
&
de
são
adulto
(STONE
usa
papel
de
1966)
imersas
larvas
Por
(SHAW,
minutos.
análise
de
larvas
diluídas
Após
um
final
este
pincel
se
faz
horas.
que
foram
(HITCHCOCK,
aplicação
tópica
(STONE
HAYDOCK,
&
as
suspensão
auxílio
A
e
utilizam
o
estágio
demonstrados
1953),
(KITAOKA
1962).
por
injeção
&
YAJIMA,
O
inibição
das
critério
da
dos
ovopostura.
larvas
é
métodos
Porém,
preferível
por
acima
para
citados,
testes
serem
mais
se
de
faz
rotina,
uniformes
pela
o
uso
abundantes
e
de fácil m a n e j o .
Dentre
fatores
da
os
&
(WHARTON
Em
and
este
organofosforados
Na
Ridgelands
Alford
(1970),
dessas
1)
raças
&
a
resistentes
de
1970).
(papel
usado
aos
forma
ROULTON,
impregnado:
sucessivamente
aos
os
para
organofosforados
foi
e
resistentes
e
&
do
ROULSTON
Biarra
as
mais
B.
FAO
por
(Food
HARRIS
microplus
foram
aos
caracterizadas
(1979).
existem
(1963),
pela
demonstrado
carbamatos
NOLAN
são
modificado
9
raças
(1966),
resistentes;
Mackay
estudadas.
As
(1967)
dentre
e
Mt.
características
são:
Ridgelans:
resistência
2)
microplus
método
sido
método
Austrália,
elas,
(WHARTON
Organization)
raças
por
B.
larvas,
1970).
1971,
As
mundialmente
tem
as
mas,
primeiro
carrapatos
Agriculture
(1977).
o
1962),
& ROULSTON,
utilizam
carrapato
similar
Austrália,
os
que
diferentes,
foi
HAYDOCK,
determinar
do
foram
cruzada
Na
STONE
métodos
resistência
organofosforados,
resistência
dois
Biarra:
alta
ao
alta
organofosforados,
resistência
ao
resistência
ao
Dioxathion
e
baixa
Coumaphos.
resistência
ao
principalmente
Chloropyrifos.
Coumaphos
e
outros
Cyanox,
e
baixa
10
3)
Mt.
Alford:
alta
Chloropyrifos,
No
Ridgelands
e
resitência
baixa
Brasil,
e
do
Coumaphos,
resistência
existem
tipo
ao
Minas
ao
raças
Gerais
Ethion
Phosmet.
resistentes
(NOLAN
e
&
do
ROULSTON,
tipo
1979).
2. E s t u d o B i o q u í m i c o
O
estudo
bioquímico
dos
carrapatos
resistentes
pode
ser a s s i m d i v i d i d o :
a)
a)
Mecanismo
b)
Estudo
Mecanismo
sendo
de
aos
investigações
foram
e
detalhadas
provável
os
e
dos
carrapatos.
Acaricidas:
em
Os
sobre
seu
de
no
da
ação,
da
de
estão
dos
anteriormente
que
motivou
ação.
objetivo
inibição
MAO
não
estudo
resistência
este
a
ao
mercado
mecanismo
com
inibição
acaricidas
comparação
problema
trabalhos
a
acaricidas,
o
mecanismo
organofosforados
dos
introduzidos
ocorreu
Dentre
como
dos
profundamente
Estes
acaricidas
ação
Metabólico
Ação
estudados
inseticidas.
de
foi
da
analisado
AChE
pelos
(monoaminoxidase)
pelo
Chlordimeform.
O
embora
mecanismo
tenham
esclarecido.
sido
O
de
ação
eliminados
mecanismo
de
carbamatos,
está
sendo
muito
(NOLAN
al.,
1972;
SMALLMAN
et
dos
arsenicais
do
mercado,
ação
pesquisado
&
dos
pelo
RIDDLES,
e
organoclorados,
ainda
não
está
organofosforados
grupo
1977;
e
australiano
SCHUNTNER
&
11
THOMPSON,
1978).
Até
hoje,
sendo
identificadas
(NOLAN
&
1)
AChE
2)
aos
acaricidas
pelo
Por
(ROULSTON
dos
(1975)
e
mecanismo
efeito
carrapatos
&
a
inibição
inibição
primário
na
da
por
degradação
dos
da
AChE
nas
Mt.
Alford
raças
etc.,
foi
Yeerongpilly
sugeriram
grupo
da
MAO,
THOMPSON
não
da
ação
a
oxidase
da
do
o
mecanismo
de
(como
o
amidina
mas,
(1976),
é
tóxica
que
HOLDEN
&
demonstraram
inibição
função
grupo
da
mista;
das
HADFIELD
que
MAO,
o
o
mas,
que
formamidinas
foi
em
bovinos.
mecanismo
pesquisas
de
novos
de
sensibilidade
susceptível,
possuem
destes
o
dados
AChE
1968);
e
raça
(1973)
&
elucidar
novo
al.,
Mackay
à
Conseqüentemente,
o
et
de
sensibilidade
que
ação
a
da
em:
detoxicação
Biarra,
KNOWLES
fosse
de
atividade
estão
1969)
SCHUNTNER
provavelmente
o
a
produtos
Chlordimeform)
de
diferenças
da
relação
at al.,
AZIZ
ação
de
resistentes
parasita.
Ridgelands,
em
diferença
(ROULSTON,
exemplo,
baixa
carrapatos
divididos
decorrente
acaricidas
bem
1979);
de
da
decorrente
resistência
resistentes:
raças
através
ROULSTON,
resistência
9
método
de
bioensaio
os
de
ação
compostos
controle
direto
resultados
não
acaricidas,
aos
(NOLAN
de
trabalhos
foram
e
&
utilizadas
sim,
carrapatos,
ROULSTON,
visando
para
associados
1979).
nas
programar
com
os
12
b)
Estudo
realizado
Metabólico
dos
com
carrapatos
os
principalmente
resistentes
e
na
aos
Carrapatos:
Este
tipo
de
resistentes,
característica
da
organofosforados
foi
AChE
(NOLAN
&
estudo,
dos
baseado
carrapatos
SCHNITZERLING,
1975
1976).
Por
outro
biossintéticos
(1943)
e
tendo
hematófagos;
de
Este
trabalho
e
carrapato
como
ou
ovos
(Vg)
no
o
era
(Vn)
BREMNER
estudo
a
cadeia
pigmento
o
de
dos
carrapatos.
(1959)
identificou
como
sendo
uma
marron
na
pigmento
parasitos
gema
do
biossíntese
o
WIGGLESWORTH
nos
hemoglobina
da
mecanismos
por
alimentar
cor
da
estudo
dos
iniciado
proveniente
definiu
Vitelina
o
foi
base
seja,
Ixodes,
microplus
lado,
dos
hospedeiro.
da
Vitelogenina
de
ovo
hemoproteína
e
identificou
duas
de
chamou-o
B.
de
"Haemixodovin".
TATCHELL
diferentes
em
ovos
eletroforese.
Em
proteínas
ovos
equivalentes
(1971),
em
e
teleóginas
outros
gêneros,
de
Ornithodorus
quando
examinadas
do
DIEHL
B.
pelas
microplus
por
mostrou
duas
(1970)
moubata,
técnicas
proteínas
as
quais
de
foram
eletroforese
e imunodifusão.
BOCTOR
duas
foram
&
lipovitelinas
semelhantes
KAMEL
em
às
OBENCHAIN
proteínas
nos
ovos
ovos
duas
et
de
(1976),
de
purificaram
Dermacentor
proteínas
al.
da
Rhipicephalus
identificaram
andersoni
hemolinfa
(1978),
e
da
as
quais
fêmea.
identificaram
duas
appendiculatus
como
13
lipo-hemoproteína.
ARAMAN
do
(1979),
Rhipicephalus
mistos
marcados
maior
sanguineus
com
produção
gordurosos.
dos
OLIVER,
1973).
celular
do
anti-Vn
anticorpos
do
mecanismo
seria
com
da
no
cultura
e
proteína
gordurosos
de
B.
através
do
indução
na
caso
controlado
&
os
S-metionina
corpos
iguais
mesmas
da
35
nos
este
(HJ).
POUND
&
OLIVER
formação
dos
espécie
Ornithodorus
síntese
de
metopleno
método
seriam
às
concordantes
através
a
corpos
(OBENCHAIN
(1973)
o
mostrou
dos
traquéia
maior
resultados,
juvenil
na
atividade
traquéia.
hormônio
com
aminoácidos
correspondem
produção
localizados
e
solo
de
células
dados
OLIVER
Vitelogenina
resultado
cujo
teve
microplus
cujo
nas
apresentou
&
da
injeção
difusão,
(Vitelogenina)
Estes
hemocele,
localizam
(1984),
no
da
gordurosos
se
OBENCHAIN
na
biossíntese
proteínas
e
carrapato
a
através
no
corpos
insetos
por
C
das
CHINZEI
descritos
14
Estes
células
estudou
ovos
pela
(1979),
aplicação
parkeri
Vitelogenina
por
mostraram
do
e
hormônio
CHINZEI
hormônio
a
juvenil
(1984)
juvenil
III
observou
I
-
III
na
a
e
(ZR-515).
Esta
carrapatos
pelos
os
produtos
ou
até
não
mesmo
carrapatos.
idéia
pode
ser
chamada
"não-ascaricidas"
acaricidas
controlar
o
poderão
como
(OBENCHAIN,
ser
metabolismo
controle
1979);
usados
e
o
para
na
dos
qual
modificar
desenvolvimento
dos
III.
O
primeiro
resistência
dos
MATERIAL
passo
E MÉTODOS
no
carrapatos
estudo
é
a
do
desenvolvimento
detecção
de
sua
de
ocorrência
prévia.
Neste
duas
regiões
trabalho,
diferentes
os
no
carrapatos
Estado
de
São
respectivamente.
foi
a
das
Andorinhas
cujo
até
hoje,
usa
acaricidas
(organofosforados
se
Em
Pindamonhangaba,
Experimental
de
Instituto
Zootecnia
quente
de
e
úmido.
organofosforados
(Amitraz)
é
o
Os
suas
Zootecnia
Há
produto
em
por
aos
de
é
coleta
de
frio
anos,
usava-se
Arujá
de
e
coleta
úmido;
na
onde
Estação
pertencente
onde
o
nesta
o
de
Coumaphos).
fez
Paulo,
hoje,
e
-
se
São
em
ponto
Pindamonhangaba
Estado
clima
ao
é
localidade
grupo
amidina
uso.
coletados
vários
DL
o
clima
Diazinon);
carrapatos
"Dose-Mortalidade"
a
de
5
(ex:
resistências
caracterizadas
do
Arujá,
coletados
Paulo;
Pindamonhangaba
Fazenda
Em
foram
50
foram
acaricidas
e
eletroforese.
suas
investigados
através
proteínas
da
foram
quanto
análise
isoladas
de
e
15
A.
ANÁLISE
DA
ARUJÁ
E
COMPARAÇÃO
métodos
eles,
o
larvas
mais
de
afora
para
comum
através
papel
RESISTÊNCIA
DOS
CARRAPATOS
DE
PINDAMONHANGABA
Existem,
outros
DA
e
do
filtro
se
o
teste
examinar
viável
método
impregnado
o
em
da
de
bioensaio
grau
termos
FAO
com
o
de
direto,
vários
resistência.
Dentre
financeiros,
(HARRIS,
produto
é
1977),
o
uso
que
de
utiliza
químico.
1. C a r r a p a t o s :
A
foi
coleta
feita
uma
carrapatos
de
27ºC
A
e
6º
durante
por
e
à
ovopostura
15
a
padronizada
4º
vez
carrapatos
selecionados
temperatura
durante
dos
16
pela
dias
ele
dias
coleta
de
se
semana
de
umidade
(Figura
de
a
período
colocados
iniciou-se
A
dia
idade
manhã.
Os
estufa
à
e
das
continuou
larvas
exclusivamente
período
produção
da
na
2º
feita
Este
(telóginas),
relativa.
ao
2).
ovos
ovopostura.
obtém
no
foram
90%
engorgitados
foi
máxima
entre
escolhido
de
foi
ovos
o
porque
(BENNET,
1974).
Num
semanas
experimento
de
idade,
susceptibilidades
pela
avaliação
2.
preliminar,
da
foram
aos
DL
Produtos
as
testadas
acaricidas,
50.
Usados:
larvas
de
quanto
Coumaphos
e
uma
a
às
cinco
suas
Decamethrin,
16
Para
produtos
se
determinar
a
DL
50
foram
usados
os
seguintes
químicos:
MALATHION
0,0-Dimethyl-S-(1,2-dicarbethoxyethyl)
92%
de
pureza
da
Cyanamid
phosphorodithioate:
Blemco
CHLORFENVINPHOS
2-
Chloro-1-(2,4-dichlorophenyl)vinyl
diethylphosphate:
92% de pureza da Cela Merck
COUMAPHOS
0,0-Diethyl-0-(3-chloro-4-methyl-2-oxo(2H)-1-benzopyran-7-yl)
phosphorothioate:
92% de pureza da Bayer A.G.
FENVALERATE
Cyano-(3-phenxyphenyl)methyl
4-chloro-β-(1-methyl)ethyl
benzenacetate:
92%
de
pureza
da
Sumitomo
Chemical
Ind.
S.A.
DECAMETHRIN
Cyano-3-phenoxybenzyl
cyclopropan
98,5%
de
1-cis-3-(2,2-dibromovinyl)-2-2-dimethyl
carboxylate:
pureza
da
Químio
17
3. P r o c e d i m e n t o
Os
químicos
1977)
na
papéis
foram
com
de
filtro
preparados
segundo
as s e g u i n t e s
modifições:
Uma
básica
proporção
foram
diluição
foi
1)
11
Revirou-se
solução
de
produto
com
do B i o e n s a i o :
1
:
1
aplicado
cm
os
clorofórmio,
a
de
diâmetro,
papéis
várias
a
uma
300)
espécie
com
dentro
dos
Figura
5).
a
funis
com
Lacrou-se
suporte
com
mantidos
a
a
27ºC
Após
abriu-se
sob
o
movimentação
de
base
e
90%
este
calor
das
até
e
idade
de
lacrada
para
umidade
período,
larvas,
de
cada
de
cada
(Whatman
de
nº
Petri.
evaporação
em
quatro
quantidade
semanas,
funis,
do
relativa
nº
larvas
foram
1
(Figura
à
colocadas
permitindo
que
a
4
em
e
um
estufa
e
funis
e
estimulou
a
6).
estufa
mesmo
(200
(Figura
Levados
da
o
de
partes
acomodando-os
baixo.
lâmpada,
ml
Placa
completa
retirou-se
uma
4
filtro
pincel
dos
clorofórmio
dupla.
duas
um
e
(HARRIS,
diluições
numa
a
uma
de
bordas
de
de
produtos
FAO
seguir
dobrados
funil,
de
A
concentração
auxílio
as
várias
colocados
vezes
de
líquida
papéis
foram
de
média
e
e
dela.
dois
numa
Posteriormente,
formando
parafina
partir
pelos
método
preparada
sobre
resultando
o
de
foi
preparadas
impregnados
os
contagem
das
sobreviventes.
Os
cinco
a
mortalidade
seis
foi
testes
vezes
foram
para
corrigida
realizados
uma
pela
em
correção
fórmula
de
duplicata
de
cada
ABBOTT
e
refeitos
diluição.
(1925)
e
a
A
DL
18
50
determinada
pelo
B.
ISOLAMENTO
E
As
dos
principais
duas
presentes
em
Arujá
nos
e
ovos
e
larvas
Pindamonhangaba
foram
mesma
usados
usados
maneira
que
de
a
foi
uma
para
na
estes
seção
duas
do
semanas
estudos
bioensaio.
e
das
foram
A
larvas
idade
foi
de
semanas.
1.
Produtos
Usados:
Todos
de
grau
2.
solução
(cerca
de
Extração
KCl
minutos
e
(Marca
e
grau
1,0
g
M
teflon
temperatura
Modelo
ao
Proteínas
foram
geral
e
transferidos
sobrenadante
transferidos
das
ovos
em
(tipo
-
a
208N)
de
macerados
com
sob
Potter-Elvehjem),
0
Ovos
4ºC
a
ensaio
com
2.300
e
o
ao
foram
uso
g.
de
Foram
10
ml
Larvas:
ml
de
uma
temperatura
homogeneizador
durante
lipídeos
com
10
macerado
o
e
baixa
posteriormente
(proteínas
tubo
experimentos,
dos
pistilo
centrifugou-se
de
nestes
bioquímico.
de
operação,
FANEM;
usados
Purificação
4ºC),
esta
à
produtos
e
0,15
de
vidro
Após
os
analítico
OVOS:
de
ENZIMAS
proteínas
carrapatos
da
ovos
DAS
(1971).
eletroforese.
Os
dos
FENNEY
provenientes
por
preparados
de
CARACTERIZAÇÃO
carrapatos
estudadas
método
3
minutos.
durante
um
20
centrifugador
filtrados
2,0
ml
hidrossolúveis),
de
KCl
0,15M.
19
Centrifugou-se
mais
centrifugação.
O
uma
vez
nas
sobrenadante
mesmas
foi
condições
utilizado
da
na
primeira
aplicação
da
eletroforese.
LARVAS:
maneira
vivas
descrita
e
para
acima.
antes
de
às
A
larvas,
quantidade
macerá-las,
procedeu-se
de
foram
larvas
da
foi
colocadas
mesma
de
no
2,0
g,
congelador
imobilizá-las.
3.
Eletroforese
A
conforme
(1981)
o
em
técnica
método
com
O
"slab-géis"
de
quanto
Gel
de
de
de
Poliacrilamida
gel
de
DAVIS
modificações.
sistema
de
e
0,8%
e
eletroforese
eletroforese,
acrilamida
poliacrilamida
(1964)
algumas
o
(PAGE):
de
foi
MIYAZAKI
de
preparada
&
HAGIWARA
T=7,5%
qual
foi
preparado
de
BIS
no
(p/v)
foi
e
por
tampão
C=2,6%
30%
0,5M
(p/v)
Tris-HCl
(pH:6,8).
Após
cada
solução
0,5M-Tris-HCl
contendo
terminar
de
de
Foram
na
parte
tampão
até
para
o
proteína
(pH=6,8)
0,001%
a
foi
e
dos
50
géis,
ml
Azul
BPB
isolamento.
(marcação
de
de
e
da
Posteriormente
a
com
com
0,1
Bromofenol
da
100v
de
atingir
voltagem
foi
0,5
ml
a
ml
de
de
tampão
60%
(v/v)
(BPB).
amostra
eletroforese
corrida)
a
géis,
glicerina
microlitros
0,025M-Tris-0,192M-Glicina
corante
dos
misturada
0,1
corante
tomados
superior
polimerização
foi
e
executada
voltagem
a
aplicadas
fase
em
estável
de
aumentada
géis
para
20
150v
durante
placa
2
(Figura
Coomassie
coradas
e
com
uso
o
4.
e
meia,
Terminada
a
Azul
(WEBER
R
ácido
as
do
A
(p/v)
Sudan
em
para
sulfato
com
concentração
As
(pH=6,8),
amostra
contendo
de
100v
géis
aumentada
marcação
da
o
para
para
de
(1952)
1976).
Dodecil
poliacrilamida
na
foi
realizada
gel
de
e
com
SDS
dissolvidas
aquecidas
BPB
corante
à
com
e
presença
através
acrilamida
3%
(p/v)
de
foi
durante
ml
água
de
em
5%
do
7,5%
de
gel
Tris-HCl
(v/v)
fervente
ambiente,
de
durante
1
ml
0,0625M-Tris-HCl
2
desta
(pH=6,8),
glicerina.
executada
(marcação
com
da
horas
voltagem
corrida)
Posteriormente,
duas
0,5M
SDS,
temperatura
70%
BPB
de
em
0,1
isolamento.
150v
de
(p/v)
eletroforese
até
SWAHN
al.,
:
usando
foram
2%
misturada
de
com
et
proteínas.
e,
0,05%
Poliacrilamida
(SDS),
(p/v)
de
al.,
pelo
glicoproteínas
(ZACHARIUS
método
(ABE
coradas
as
et
gel
sódio
resfriá-las,
A
de
em
0,1%
contendo
foi
de
foram
(PAS)
B
(SDS-PAGE
amostras
Após
de
(1970),
das
2-mercaptoetanol
minutos.
limite
1969);
pelo
Negro
Gel
de
LAEMMLI
constante
OSBORN,
coradas
eletroforese
de
o
proteínas
periódico-Schiff
corante
Eletroforese
método
até
as
&
lipoproteínas
dodecil
4ºC
corrida,
S u l f a t o de S ó d i o
de
a
7).
pelo
1969)
horas
e
meia
a
atingir
constante
a
voltagem
(Figura
7).
fase
foi
21
5.
Identificação
As
Coomassie
das
proteínas
Azul
R,
as
acético-etanol-água
YAMASHITA,
quais
foram
foram
(2:9:9)
coradas
diluídas
após
glicoproteínas
periódico-Schiff
As
Sudan
totais
em
com
0,25%
solução
de
eletroforese
de
ácido
(HORIO
&
1981).
As
ácido
Proteínas:
Negro
(PAS)
lipoproteínas
B
pelo
foram
método
identificadas
(ZACHARIUS,
foram
de
método
com
o
do
1969).
identificadas
SWAHN
pelo
(1953).
corante
IV.
A.
SUSCEPTIBILIDADE
A
acaricidas
e na
Figura
Coumaphos
uma
semana
resitência
a
0,011488%
de
com
(114,88
0,0201%
mostrando
cinco
DIFERENTES
larvas
IDADES
de
e
Decamethrin
é
de
idade
larvas
as
das
(245,49
DL
e
ppm)
diferentes
mostrada
ou
isto
na
quatro
semanas
0,0207%
idades,
Tabela
1
cada
seja,
se
período
quanto
DL
mais
50
ser
e
a
a
de
cinco
sesceptível
com
Coumaphos.
de
(207
Quando
mostrou
de
é,
contra
a
de
ppm)
50
variação.
larvas
semanas;
de
duas
(201
das
resistência;
ppm)
pequena
resistência
EM
das
0,024549%
menor
Entre
de
LARVAS
E DISCUSSÃO
8.
A
semanas
DAS
susceptibilidade
aos
maior
RESULTADOS
idade,
ppm)
compara
de
a
maior
ao
à
idade
a
DL
50
Coumaphos,
DL
foi
foi
99,
de
uma
idade,
a
a
menor
resistência.
Por
duas
com
menor
semanas
0,001712%
outro
de
idade,
(17,12
resistência:
lado
ppm)
isto
(contra
mostraram
de
é,
DL
Decamethrin),
ser
50
mais
e
a
de
quatro
as
maior
semanas
susceptível
com
larvas
de
resistência
de
idade,
0,000552%
23
(5,52
ppm)
devem
ser
mínimo
e
a
de DL
50.
Segundo
o
utilizadas
de
melhor
21
fase
produtos
químicos.
de
duas
Tabela
entre
para
que
as
a
pelas
do
entre
Conforme
B.
obteve
DL
50
e
a
dias
Tabela
idade,
as
idade
no
1
e
Figura
8,
a
uma
e
duas
resistência
aos
acaricidas
comparando
Pindamonhangaba,
larvas
de
foi
maior
cinco
50
acaricidas,
contra
as
grau
de
mostrado
na
o
foi
foi
Arujá
de
e
Decamethrin
Pindamonhangaba,
entre
os
piretróides
sintéticos
aos
organofosforados
pode
acordo
nas
com
as
Pindamonhangaba
aos
organofosforados
ppm
e
os
tóxicos
resistência
mostrada
atribuída
ao
uso
estudadas.
efetuadas,
mostraram
que
7,8
mais
ser
avaliações
se
a
mais
sintéticos
foram
maior
regiões
7,1
o
respectivamente.
piretróides
A
produtos
foi
aproximadamente
organofosforados.
de
7
a
dos
de
1977),
microplus,
grupo
De
resistentes
DL
os
destes
provenientes
5
comparação
larvas
integral
os
de
organofosforados,
os
da
(HARRIS,
9.
larvas
Na
que
se
Arujá
Dentre
já
onde
semanas
2 e Figura
tóxico
máximo.
do
análise
FAO
bioensaio
larvas
idade,
A
resitência
no
das
de
de
para
dias
semanas
larvas
método
de
as
41
as
a
larvas
69%
mais
provenientes
de
Arujá.
No
diferença
isto
grupo
evidente
significa,
organofosforados
que
e
dos
tanto
a
piretóides
em
Arujá
ocorrência
piretróides
não
e
da
foi
sintéticos,
como
em
não
houve
Pindamonhangaba;
resistência
observada.
cruzada
entre
24
B.
INTERPRETAÇÃO
A
em
ambas
aos
regiões
na
bioensaio
ELTROFORESE
eletroforese
as
diferença
DA
do
etudadas,
primeira
direto
Neste
eletroforese,
da
em
mostrou
DL
realizado
do
ovos
não
embora
50)
parte
de
que
o
maior
com
os
larvas
nenhuma
resultado
a
que
isolamento
e
houve
determinasse
Pindamonhangaba
trabalho,
foi
obtido
experiência,
(análise
organofosforados
material
resistência
em
das
carrapatos
do
Arujá.
enzimas
por
coletados
em
Pindamonhangaba.
1.
Eletroforese
A
apresentou
foram
em
Gel
de
eletroforese
mais
mais
de
8
do
bandas,
nítidas.
A
Poliacrilamida
material
sendo
banda
que
P2
obtido
3
foi
(PAGE)
delas
a
dos
(P1,
mais
ovos
P2
e
evidente
P3)
(Figura
10).
Nas
bandas,
larvas,
sendo
4
principalmente
entre
ovos
e
observadas
0,04
a
P5
0,05,
das
as
larvas
bandas
e
0,12
a
reação
dos
foram
P2
e
(P4,
P6
larvas,
isoladas
eletroforese
bandas
P1
&
a
e
do
PAS
ovos
são
P2
mesma
0,21
e
e
Na
&
a
0,22
demonstrou
em
P7)
mais
mais
comparação
P5
migração
larvas;
na
resultou
P6
10).
P4,
0,14
positivas
P5
P5,
(Figura
praticamente
A
bandas
a
e
P3
de
nítidas;
das
&
P6,
bandas
foram
eletroforética;
(Figura
a
somente
com
11).
característica
P2
6
dos
ovos
reação
PAS
(Figura
12);
constituídas
por
glicoproteínas.
ou
das
e
P5
seja,
25
Mas,
positiva
seja,
e
P5
P2
é
proteína
com
e
Sódio
de
bandas,
que
Após
P2
a
bandas,
bandas
(P5
primeiro
P2
sendo
migração
P6)
grupo
eletroforética
e
base
a
O
significa
PAS;
na
3
ovos
muito
ou
que
a
P6
é
e
Dodecil
15),
por
conforme
(Figura
com
PAGE
seja,
as
larvas
foram
seus
5
em
pesos
mais
de
14).
PAS,
justificando
por
eletroforese
separadas
proteínas
5
a
bandas
constituição
apresentou
bandas
uma
de
banda
SDS-PAGE
PAGE.
das
grupos
nitidamente
bem
isoladas
banda
G1
e
foram
G3
foi
(Figura
testados
18)
iguais
e,
(Figura
na
separadas
em
isolados,
embora
PAGE
de
de
(Figura
0,23
0,37
mais
e
da
0,61
de
duas
16).
O
migração
de
cada
17).
grupos
glicoproteína
foram
nítidas
das
ou
fossem
G2
com
também
separação
isolamento
eletrofolética
(Figura
a
(Figura
da
Estes
positivos
foi
13);
lipo-glicoproteína
isoladas
dos
bandas
proteínas
e
P2
(Figura
Isto
Poliacrilamida
foram
tratamento
ao
As
20
3
glicoproteína.
correspondem
uma
de
permitiu
positivas
positiva
positivas
apenas
(SDS-PAGE)
proteínas
sendo
resultaram
Gel
proteínas
As
é
B,
diferente.
Sulfato
moleculares.
Negro
lipoproteína.
ovos
em
o
Sudan
fracamente
por
Eletroforese
SDS
como
foram
dos
proteína
e
12
corante
constituída
As
com
P6
principal
outra
2.
o
à
12).
por
P5
PAS
na
PAGE
foram
porque
fracamente
teve
como
26
3.
Caracterização
os
de
A
foi
a
foram
característica
Austrália
Segundo
de
às
larvas
razões
de
2,01
(WHARTON
NOLAN
&
&
à
Arujá
das
aos
de
(1979),
Malthion
Coumaphos,
50
de
em
Mackay
e
organofosforados;
e
ao
Fenvalerate
no
e
Ridgelands
et
al.,
Brasil
tipo
e
Pindamonhangaba;
STONE
existem
as
Chlorfenvinphos
2,33
1970
Arujá.
ambas
ao
e
larvas
resistência
em
ao
raças
ROULSTON,
ROULSTON
resistência
DL
as
maior
carrapatos,
das
em
que
provenientes
resistência
As
semelhante
mostraram
resistência
baixa
Carrapatos
apresentaram
dos
alta
e,
Decamethrin.
Coumaphos
que
dos
bioensaio
característica
Chlorfenvinphos
e
do
Pindamonhangaba
organofosforados
regiões,
Resistência
resultados
provenientes
aos
da
1976).
dois
Ridgelands
na
tipos
e
tipo
Minas Gerais.
PATARROYO
de
outra
Minas
raça
examinados
A
foi
mais
presença
o
tipo
trabalho
não
é
do
principalmente
& ROULSTON,
De
aos
que
da
AChE
a
resistência
da
organofosforados
a
Minas
que
identificaram
Alford.
tipo
atividade
pela
(1980)
Mt.
mostra
reduzida
da
COSTA
resistente
Gerais:
presente
&
Gerais
das
nem
raças
Mt.
o
dos
as
raças
produtos
existência
Estado
de
resultado
do
dos
carrapatos
Alford.
Mackay
susceptível,
ambas
detoxicação
no
característica
raça
em
Porém,
a
e
Ridgelends
Yeerongpilly
resistentes
aplicados
e
a
foi
(NOLAN
1979).
maneira
semelhante,
a
resistência
dos
carrapatos
27
verificada
no
do
quando
produto
presente
Por
estudadas
de
trabalho,
seu
outro
Decamethrin
possibilidade
de
ou
os
carrapatos
mostraram
sintéticos,
e
combatê-los
seja,
atribuída
à
detoxicação
isolado.
lado,
não
(1977);
uso
foi
ambas
as
regiões
resistência
aos
piretróides
Fenvalerate.
Isto
sugere
através
com
em
do
método
combinação
do
dos
NOLAN
a
et
al
piretróides
e
organofosforados.
REICH
B.
de
&
ZORZÓPULOS
microplus,
apresentaram
maior
fosfatase
ácida.
voltaram
ao
com
(1978)
uma
atividade
Estas
nível
a
das
apresentaram
inicial
no
semanas
uma
a
os
bioensaios
com
vistas
a
(1971)
identificou
que
as
como
duas
proteínas
foram
PAS
Amido
Schwartz.
elevado
positivas,
teor
identificar
pela
Isto
de
estas
identificação
Na
larva,
a
sendo
das
as
DL
apenas
sugere
dos
uma
tratar-se
glicídeos.
Ainda
proteínas
de
mais
com
e
dia
esta
razão
para
dos
ovos
de
também
demonstrou
deste
carrapato
foi
uma
corada
pelo
mucoproteína
TATCHEL
as
9º
50.
ovos
delas
e
escolhidas
proteínas
e
idade,
alcalina
Por
foram
larvas
de
no
idade.
idade
principais
duas
pico
de
determinação
as
fosfatase
hemoglicoproteína
mas
não
proteínas
com
conseguiu
da
fêmea
imunológica.
comparação
proteína
lipo-glicoproteína
de
que
semanas
um
dia
de
microplus
duas
20º
larvas
B.
duas
enzimas,
as
TATCHEL
evidenciaram
que
fizemos
principal
e
uma
das
do
entre
ovo
a
proteína
(P2)
principais
mostrou
proteínas
do
ovo
ser
da
e
uma
larva
28
(P5)
também
PAS
e
apresentou
pelo
Sudan
Ambas
sendo
a
proteína
da
proteínas
Isto
ovo
larva
e
núcleos
proteicos
permanecendo
o
Sabe-se
vitelina,
a
de
proteína
proteínas
leva
B.
recém-nascida
e
quase
principal
P8
como
ou
3
delas
que
outra
migração
foram
(P6),
iguais
das
proteínas
proteína
interpretada
de
às
identificação
maioria
em
principais
CHINZEI
(P5)
da
como
os
(1983),
e
ninfa.
proteína
principal
do
ovo
lipo-glicoprotéica.
do
sua
de
a
trabalho
de
mas
proteínas
critérios
no
ovo
larva
(P2)
e
(P5)
seja,
P2
e
da
Neste
uma
larva
trabalho,
das
principais
apresentaram-se
e
P5
seriam
é
como
vitelina
do
microplus.
(1984),
de
70%
O.
da
BREMNER
hemoproteína
a
que
proteína
constituição
CHINZEI
ovo
e
da
identificadas
pela
as
transformada
nova
que
pelo
protéica.
concluir
estágio
lipo-glicoproteína;
carrapato
a
sendo
P3
até
sendo
PAS.
uma
proteína
eletroforética,
mostrou
reação
esteja
da
foram
independente
pelos
formando
P5
característica
bandas,
nos
(P2)
foi
larva
e
e
migração
SDS-PAGE
5
da
eletroforética
do
sua
em
P2
pela
(P6)
método
isoladas
característica
B.
proteína
e
O
mesma
proteínas,
larva
eletroforética
(P2)
Negro
as
mesma
a
da
informou
moubata
vitelina
(1959),
segunda
que
corresponde
até
ao
também
semana
10º
a
a
dia
mostrou
de
idade
vitelina
85%
de
da
da
larva
vitelina
do
consumo
da
idade.
que
da
o
larva
de
B.
29
microplus
foi
hemoproteína
trabalhos
sobrevivência
vitelina
para
a
(P5)
da
e
da
do
larva
vitelina
que
microplus,
cujo
(CHINZEI,
1984).
70%
e
mostraram
BREMNER
foi
inicia-se
ocorre
Uma
de
sua
influência
CHINZEI
qual
PUOND
&
OLIVER
a
indução
da
(I)
HJ
conseguiram
do
HJ
e
da
50%
a
da
(1984),
o
CHINZEI
morte
onde
induz
(1979)
síntese
(III)
nas
que
e
por
cerca
e
de
para
o
perda.
biossíntese
das
da
larvas
da
vitelina
já
a
influência
do
síntese
e
da
larva
mortalidade
a
sugere
perde
a
abordou
idêntico
(1984)
da
biossíntese
de
energética.
moubata
quase
fato
fonte
que
consumo
trabalho
pesquisar
hipótese
(HJ),
por
a
com
importante
Nosso
O.
do
mostrou
como
apoiada
quando
1984)
decorre
(1959)
semelhante
mesmo
por
moubata
papel
conteúdo
juvenil
O.
mostraram
muito
vitelina
aplicação
mantendo
(1983
microplus.
inicial,
o
É
hormônio
seja,
B.
hipótese
60%
resumida
de
de
do
tenha
(1959)
foi
ou
CHINZEI
larva
hamoproteína
BREMNER
B.
de
trabalho
Esta
da
30%;
inicial.
Os
a
quase
da
vitelogenina.
CHINZEI
vitelogenina
espécies
O.
idéia
de
(1984)
já
através
da
parkeri
e
O.
moubata.
OBENCHAIN
(1979)
carrapatos
pelo
juvenil
repelentes.
e
uso
Através
agravante
resolvido.
problema
de
do
da
resumiu
produtos
a
não
acaricidas
desenvolvimento
resistência
dos
da
controle
como
o
hormônio
biotecnologia,
carrapatos
dos
poderá
este
ser
V.
Baseados
podemos
1.
As
larvas
de
B.
regiões
resistentes
As
microplus
de
aos
piretróides
Arujá
acaricidas
larvas
de
que
diferença
as
Alta
entre
e
e
Coumaphos,
em
Ridgelands
da
estudo
poliacrilamida
extração
as
uma
e
Pindamonhangaba
a
e
duas
base
larvas
larvas
trabalho
de
semanas
de
idade,
foram
mais
organofosforados
e
foram
de
mais
resistentes
Arujá;
provenientes
mas,
das
não
duas
aos
houve
regiões
ao
estudadas
ao
Fenvalerate.
das
larvas
nas
Chlorfenvinphos,
indica
microplus
na
ao
resistência
Malathion
O
neste
de
Pindamonhangaba
organofosforados
4.
obtidos
sintéticos.
Decamethrin
3.
resultados
concluir:
das
2.
nos
CONCLUSÕES
que
ambas,
a
as
duas
e
regiões
a
susceptibilidade
resistência
regiões,
do
é
do
carrapato
tipo
ao
B.
Mackay
ou
gel
de
Austrália.
bioquímico
(PAGE)
dos
ovos,
da
demonstrou
eletroforese
uma
identificada
banda
pelo
PAS
em
principal
e
pelo
(P2)
Sudan
31
Negro
B,
como
com
a
vitelina
Na
extração
foram
e
e
proteína
por
A
A
as
lipoproteína,
sendo
P2
P6
dados
focalizaram
identidade
principais,
P5
e
que
e
praticamente
não
poliacrilamida
com
P6
P5
P6
sendo
biosíntese
da
no
larva
isolada
na
mínimo,
foi
possui
reação
à
e
dos
de
isolada
reação
de
5
reação
proteínas
também
à
demonstrou
à
5
distinta
crítico
vitelina.
de
mais
positivas
bioensaio
ponto
em
positivas
mostrou-se
quanto
gel
(SDS-PAGE),
foram
delas
do
o
foi
de
da
3
em
sódio
bandas
P5
proteína
Os
bandas
identificadas;
de
constituída
eletroforética
7.
duas
eletroforese
ovo,
proteína
bandas,
6.
do
todas
é
sua
ovo.
pouca
dodecilsulfato
P2
Sugere-se
glicoproteína.
estudo
que
do
larvas,
isoladas
possui
O
(Vn)
das
glicoproteína
5.
lipo-glicoproteína.
P5
que
bandas,
PAS;
a
sendo
ou
seja,
diferentes.
em
mais
de
20
PAS.
tanto
na
mobilidade
PAS.
do
estudo
carrapatos,
eletroforético
como
sendo
a
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substrate
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8:
from
SCHNITZERLING;
strains
Acarology,
as
acaricide-resistance
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acetylcholinesterases
susceptible
Sci.,
cattle
enzyme
and
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H.J.,
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microplus
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Boophilus
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enzyme
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the
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Inhibition
lesion
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39
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resistance
31(4):
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microplus.
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Linkage
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resistance
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inheritance
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40
the
cattle
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microplus.
Aust.
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STONE,
B.F.
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resistant
microplus,
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TATCHELL,
of
11:
R.J.,
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R.H.
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ZACHARIUS,
M.,
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Boophilus
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Soc.
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the
J.
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I:
proteins
cattle
tick,
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244(16):
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1960.
105-119.
microplus.
&
weight
to
haemolymph,
Boophilus
WEBER,
WEBBER,.G.,
of
other
(Biol.),
MORRISON,
4406-4412.
Control
6:
gel
of
parasitic
135-164.
Resistance
of
ticks
to
381-404.
haemoglobin
in
blood-sucking
131:
Rhodnius
artropods.
313-339.
J.H.
&
WOODLOCK,
J.J.,
41
1968. Glycoprotein staining
following
acrylamide gels. Anal. Biochem.,
electrophoresis
73: 148-152.
on
VII. A P Ê N D I C E
F i g u r a 1. D e s e n v o l v i m e n t o s e q ü e n c i a l da r e s i s t ê n c i a na e s p é c i e B o o p h i l u s m i c r o p l u s
na A u s t r á l i a e a r e d u ç ã o da e f i c i ê n c i a dos a c a r i c i d a s . (WHARTON & NORRIS, 1980)
Tempo de uso do p r o d u t o
Uso l i m i t a d o a
poucas
regiões
R e t i r a d o s do m e r c a d o ou uso p r o i b i d o
Resistência reconhecida
E x a m i n a d o s no c a m p o
44
Figura
2. O v o p o s t u r a de B. m i c r o p l u s
após a coleta.
Figura
3. Larvas
idade.
de B. microplus
no 4º a 6º
de duas
semanas
dia
de
45
Figura
4. C o l e t a das larvas de B. microplus
de e n s a i o com um pincel nº 1.
no
tubo
Figura
5. T r a n s f e r ê n c i a das larvas de
B. microplus
para um funil de papel de filtro.
46
Figura
6. F u n i s c o n t e n d o as larvas de
com sua b a s e lacrada.
B.
microplus
Figura
7. S i s t e m a de "Slab"
e l e t r o f o r e s e em gel de
poliacrilamida com ou sem dodecil sulfato de sódio.
Tabela
1. Susceptibilidade de cada período de idade das larvas,
em Pindamonhangaba.
Boophilus microplus
Figura
8.
Comparação
da
susceptibilidade
das larvas de B.
microplus
em
diferentes
idades,
provenientes
de
Pindamonhangaba aos acaricidas, Coumaphos e Decamethrin.
Tabela
2.
Comparação
da
susceptibilidade
das
larvas
de
B.
microplus
de
duas
de
idade,
provenientes
de
Arujá
e
Pindamonhangaba
no
Estado
de
São
* Pindaba : Pindamonhangaba; Cl - fenvinphos : Chlorfenvinphos
semanas
Paulo.
Concentração
Figura
9.
(ppm)
Susceptibilidade
das
larvas
de
B.
microplus
provenientes de Arujá e Pindamonhangaba a 5 acaricidas.
51
F i g u r a 10. "slab" e l e t r o f o r e s e
p o l i a c r i l a m i d a : as
proteínas
(O) e das larvas (L).
em gel de
dos
ovos
Figura
11.
Cálculo
da
migração
e l e t r o f o r é t i c a das p r o t e í n a s dos ovs (O)
e das larvas (L).
52
Figura 12. I d e n t i f i c a ç ã o da g l i c o p r o t e í n a
dos
ovos
(O)
e das
larvas
(L)
pela
r e l a ç ã o PAS.
F i g u r a 13. I d e n t i f i c a ç ã o da l i p o p r o t e í n a
dos ovos e das larvas pelo corante Sudan
Negro B.
53
F i g u r a 14. " S l a b " - e l e t r o f o r e s e e m
gel
de poliacrilamida
com dodecil sulfato de
sódio
(SDS - PAGE): as p r o t e í n a s d o s o v o s
f o r a m d e s n a t u r a d a s c o m 2% d e SDS e 5% d e
2-mercaptoetanol
em
100ºC
durante
2
m i n u t o s e a p l i c a d a s c o m 0 , 1 % d e SDS.
54
F i g u r a 15. I d e n t i f i c a ç ã o das g l i c o p r o t e í n a s
dos ovos pela PAS em SDS - PAGE.
Figura
larvas
16. C o m p a r a ç ã o das
proteínas
entre P A G E e em SDS - PAGE.
das
55
Figura 17. Migração
eletroforética
proteínas das larvas em SDS - PAGE.
das
Figura 18. Identificação das glicoproteínas
das larvas pela reação PAS em SDS - PAGE.