Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Não alcoólicos
ÁCIDOS ORGÂNICOS
Método 12
1. MÉTODO
Cromatográfico
2. PRINCÍPIO
Baseia-se na separação e identificação dos ácidos orgânicos através de padrão, por cromatografia
em papel.
3. MATERIAL
3.1 EQUIPAMENTOS
a) Balança analítica
b) Secador de cabelo
3.2 REAGENTES E SOLUÇÕES
a) Fase móvel:
Misturar 40 mL de n-butanol (contendo 1 g de azul de bromofenol/Litro de n-butanol) com
20 mL de ácido acético 50 % (v/v).
b) Soluções padrão a 1% de:
ácido tartárico
ácido málico
ácido cítrico
ácido lático e outros
3.3 VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS
a) Papel Whatman nº 1 para cromatografia
b) Micro pipeta ou tubo capilar
c) Cuba cromatográfica
4. PROCEDIMENTO
A 5 cm da base do papel Whatman, aplicar 5 µL dos padrões e da amostra, distanciados de 3 cm.
Introduzir o papel na cuba contendo a fase móvel. Deixar correr ascendentemente até a fase
móvel se aproximar da borda superior do papel, aproximadamente por 4 horas.
Retirar o cromatograma. Marcar a distância percorrida pela fase móvel e secar.
O papel Whatman seco torna-se azulado. Os ácidos separam-se na seguinte ordem: o ácido
tartárico em baixo; logo acima o ácido cítrico; ácido málico no meio; e os ácidos láctico e
succínico ao alto (apresentam o maior Rf). Se existir ácido orgânico na amostra, constata-se a
presença de uma mancha amarela na mesma altura do padrão.
5. CÁLCULO E EXPRESSÃO DO RESULTADO
Rf =
Da
Ds
Onde:
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Não alcoólicos
ÁCIDOS ORGÂNICOS
Método 12
Da = Distância percorrida pela mancha do ácido orgânico da amostra (distância entre a linha de
base e o centro da mancha).
Ds = Distância percorrida pela fase móvel (desde a linha de base até a frente da fase móvel).
Correlacionar o Rf dos padrões com o Rf da amostra, para identificação do ácido orgânico
presente.
REFERÊNCIA
INSTITUTO de tecnologia de alimentos. Manual técnico de análise química de alimentos.
Campinas, 1990.
*BRASIL. Ministério da Agricultura. Portaria nº 76 de 26 de novembro de 1986. Dispõe sobre
os métodos analíticos de bebidas e vinagre. Diário Oficial da República Federativa do Brasil,
Brasília, 28 nov. 1986. Seção 1, pt. 2.
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