UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA
“JÚLIO DE MESQUITA FILHO”
unesp
Instituto de Biociências – Campus de Rio Claro
Departamento de Biologia
MECANISMOS DE ENDOCITOSE DO METOTREXATO INCORPORADO A
NANOCÁPSULAS LIPÍDICAS EM LINHAGENS CELULARES MURINAS DE GLIOMA
E MICROGLIA.
PEREIRA, N. R. C.¹; LOIOLA, R. A.¹; OLIVEIRA, C.²; PANTALEÃO, L.¹; SPATTI, M. C.¹;
GUTERRES, S.²; POHLMAN, A.²; RODRIGUES, S.F.P.¹; FARSKY, S.H.P.¹
1. Universidade de São Paulo, FCF, Programa de Toxicologia e Análises toxicológicas; 2.
Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Programa de Pós-Graduação em Ciências
Farmacêuticas.
Estudos demonstraram que metotrexato incorporado a nanocápsulas lipídicas (MTX-LNC) reduz o
volume tumoral em modelo de glioblastoma murino. O presente estudo avaliou os mecanismos de
endocitose de MTX-LNC conjugada a rodamina B (MTX-LNC/RB) em linhagens murinas de
glioma (GL261) e microglia (BV2), células importantes no contexto tumoral. As células foram
incubadas (1 hora, 37º C) com MTX-LNC/RB na ausência (controle) ou presença de bloqueadores
da fagocitose (citocalazina D – Cito D; 10 µmol/L); ou macropinocitose (amilorida – Amil; 1
mmol/L); ou endocitose mediada por clatrinas (sacarose – Sac; 0.5 mol/L) ou caveolinas (metil-âciclodextina, MâCD; 10 µmol/L). O transporte dependente de energia foi inibido pela incubação
com azida sódica (15 mmol/L) ou à 4o C. Imagens foram captadas por microscópio e a intensidade
de fluorescência foi determinada. Os resultados representam redução (%) da captação de MTXLNC/RB em comparação ao controle (100%). A endocitose de MTX-LNC/RB em GL261 foi
reduzida pela MβCD (12,4%), enquanto Amil (59,5%) e Cito D (48,1%) inibiram a captação de
MTX-LNC/RB em BV2. A azida (GL261: 39,3% e BV2: 58,7%), ou a incubação à 4ºC (GL261:
59,1% e BV2: 33,1%) também reduziram a endocitose de MTX-LNC/RB. Em conclusão, MTXLNC/RB penetram em células tumorais GL261 por endocitose dependente de caveolinas e em
células BV2 por fagocitose e macropinocitose. Além disso, a endocitose de MTX-LNC/RB também
é mediada por mecanismos independentes de gasto energético.
Palavras-chave: Fagocitose; macropinocitose; caveolinas; glioblastoma.
Financiamento: CNPq; FAPESP
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