PT
Staphaurex Plus*
utilizaÇÃO PREVISTA
O Staphaurex Plus* é um teste rápido de aglutinação de látex
utilizado para a identificação de estafilococos que possuam um
factor de agrupamento, proteína A e/ou antigénios de superfície
característicos do Staphylococcus aureus.
Resumo e Explicação do Teste
O S. aureus possui um conjunto de propriedades que são utilizadas
para confirmar a identificação. Estas incluem a coagulase
livre, o factor de agrupamento (coagulase de agrupamento), a
termonuclease e a proteína A1. O teste de coagulase em tubo
detecta a coagulase livre e é classificado como teste de referência
para a detecção do S. aureus1. Este teste demora, no entanto,
4 a 24 horas, podendo o plasma exibir uma variação de lote
para lote2. Na última década foram desenvolvidos ensaios de
aglutinação de partículas que proporcionam uma identificação
muito mais rápida3,4. Estes ensaios de primeira geração baseiam-se
nas partículas de látex ou nas células vermelhas revestidas com
apenas fibrinogénio para detecção do factor de agrupamento,
ou no fibrinogénio e imunoglobulina G (IgG) para detecção do
factor de agrupamento e da proteína A do grupo de estafilococos.
Recentemente, foi demonstrado que estes testes podem
não conseguir detectar determinadas estirpes de S. aureus,
particularmente o grupo de estirpes resistentes à meticilina/
oxacilina (SARM)5,6,7. Algumas destas estirpes podem apresentar
níveis não detectáveis de factor de agrupamento e de proteína A8.
Os dois antigénios, somático tipo 189 e capsular tipo 510,11 foram
associados ao fenótipo resistente à meticilina. Adicionar anti-soros
a estes antigénios poderá melhorar a sensibilidade dos ensaios de
aglutinação para as estirpes de SARM. Investigações realizadas em
estirpes que se revelaram negativas durante os ensaios rápidos
demonstraram que os anticorpos para um antigénio somático
simples ou capsular são insuficientes para detectar todas as
estirpes que são negativas com a primeira geração de testes
de aglutinação de partículas. O teste Staphaurex Plus* utiliza
camadas de látex revestidas com fibrinogénio para detectar a
maior parte das estirpes clínicas e IgG específica para um grupo
de estirpes cuidadosamente seleccionado que se revelou negativo
quando submetido aos testes da primeira geração.
Princípio do Procedimento
O Látex de Teste Staphaurex Plus* é composto por partículas
de látex amarelas, que foram revestidas com fibrinogénio e
imunoglobulina G (IgG) de coelho específica para o S. aureus.
Quando uma gota de reagente é misturada num cartão com
organismos do S. aureus, ocorre uma aglutinação rápida através
da interacção do (i) fibrinogénio e do factor de agrupamento,
(ii) segmento Fc da imunoglobulina G e proteína A ou (iii)
imunoglobulina G e antigénios de superfície das células.
Algumas estirpes de Staphylococcus spp., particularmente o
S. saprophyticus, poderão causar uma agregação não específica
das partículas de látex. Por esta razão, um Látex de Controlo
é fornecido para auxiliar a identificação das reacções não
específicas.
Reagentes
e o rótulo do produto para obter mais informações sobre os
componentes potencialmente perigosos.
Conteúdo do Kit
Staphaurex Plus*
ZL33/R30950102
150 Testes
ZL34/R30950201
450 Testes
1. Látex de Teste (tampa amarela)
2. Látex de Controlo (tampa cinzenta)
3.Cartões de Reacção Descartáveis (RT64/R30369001)
4. Varetas de Mistura Descartáveis
5. Instruções para Utilização
1 frasco
conta-gotas
1 frasco
conta-gotas
2 embalagens
3 frascos conta-gotas
3 frascos
conta-gotas
6 embalagens
3 pacotes
1
9 pacotes
1
Descrição dos Reagentes, Preparação para Utilização
e Condições de Armazenamento Recomendadas
Consulte igualmente a secção Avisos e Precauções.
As suspensões de látex são fornecidas prontas para utilização e
devem ser armazenadas na vertical, a uma temperatura entre 2
e 8°C, condições sob as quais permanecerão activas pelo menos
até à data indicada no rótulo do frasco. Não congelar. Evitar o
armazenamento à temperatura ambiente (15 a 30°C). Não expor
os reagentes à luz intensa na bancada.
Látex de Teste
Suspensão-tampão de partículas
de látex de poliestireno amarelas
revestidas com fibrinogénio humano
e imunoglobulina G de coelho.
Contém 0,05% de Bronidox® como
conservante12.
Os materiais de origem humana
foram testados quanto à presença
do antigénio de superfície da hepatite
B, anti-HCV e anti-HIV-1/HIV-2 e os
resultados foram negativos.
Látex de Controlo
Suspensão-tampão com partículas
de látex de poliestireno amarelas,
revestidas com uma proteína de soro
bovino não reactiva com o S. aureus.
Contém 0,05% de Bronidox® como
conservante12.
Os Cartões de Reacção e as Varetas de Mistura devem ser
armazenados à temperatura ambiente (15 a 30°C). O teste
Staphaurex Plus* (ZL33/R30950102 e ZL34/R30950201) foi
desenvolvido utilizando os Cartões de Reacção Descartáveis RT64/
R30369001. Não utilize outra lâmina descartável para os Cartões
de Reacção Descartáveis RT64/R30369001 quando as amostras
estiverem a ser utilizadas com o teste Staphaurex Plus*.
Avisos e Precauções
Apenas para diagnóstico in vitro.
Apenas para uso profissional.
Cuidado: Este produto contém borracha natural seca.
Consulte as folhas sobre dados de segurança do fabricante
Informações sobre Saúde e Segurança
1.
ATENÇÃO: Este kit contém componentes de origem
humana. Nenhum teste conhecido pode oferecer garantia
absoluta de que os produtos derivados de componentes
de origem humana não transmitirão infecções. Por esta
razão, todos os componentes de origem humana devem
ser considerados como potencialmente infecciosos.
Recomenda-se que estes reagentes e amostras de teste
sejam manuseados de acordo com as boas práticas de
trabalho laboratoriais estabelecidas.
2.
Os utensílios não descartáveis devem ser esterilizados através
de um procedimento adequado após a utilização, embora o
método preferido seja o autoclave durante 15 minutos a
121°C; os utensílios devem ser esterilizados em autoclave
ou incinerados. O derrame de materiais potencialmente
infecciosos deve ser limpo imediatamente com papel
absorvente, e as áreas contaminadas esfregadas com um
desinfectante bactericida normal. Os materiais utilizados
para limpar líquidos derramados, incluindo luvas, devem
ser descartados como sendo potencialmente infecciosos.
3.
Utilizar bata de laboratório, luvas descartáveis e protecção
para a vista quando manusear as amostras e durante
o ensaio. Lavar bem as mãos depois de terminar o
procedimento.
4.
Quando utilizados de acordo com os princípios das Boas
Prácticas Laboratoriais, normas correctas de higiene
ocupacional e de acordo com as indicações fornecidas
nestas Instruções para Utilização, os reagentes fornecidos
não são considerados perigosos para a saúde.
Precauções Analíticas
1.
Não utilizar os reagentes após o prazo de validade.
2.
Os reagentes de látex devem estar à temperatura
ambiente (15 a 30°C) antes da utilização. Os reagentes de
látex que exibam sinais de agregação ou “agrupamento”
antes da utilização poderão ter sido congelados e não
devem ser utilizados.
3.
É importante segurar os frascos conta-gotas na vertical e
que a gota se forme na ponta do bocal. Se o bocal ficar
húmido, formar-se-á um volume incorrecto em volta da
extremidade e não em volta da ponta; se isto ocorrer,
secar o bocal antes de prosseguir.
4.
Não tocar as áreas de reacção dos cartões.
5.
Não interpretar a aglutinação observada após 30 segundos
como um resultado positivo. Agitar demais pode causar
reacções positivas falsas em alguns isolados de coagulase
negativa.
6.
A contaminação microbiológica dos reagentes deve ser
evitada, uma vez que isto poderá reduzir o tempo de vida
do produto e causar resultados erróneos.
Colheita e Armazenamento das Amostras
Para obter mais informações sobre a colheita e tratamento das
amostras, dever-se-á consultar um livro sobre o assunto1. As
culturas poderão ser testadas em qualquer um dos meios a seguir:
Ágar de sangue
Ágar Columbia CNA
Ágar nutriente
Ágar Mueller Hinton com 5%
Ágar de soja de triptona
de sangue
Ágar de soja de triptona com Ágar Baird-Parker
5% de sangue
Ágar de manitol-sal†
Ágar de sangue Columbia
†Nota: as amostras cultivadas num meio com antibióticos ou num
meio com bastante sal, como por exemplo o ágar manitol-sal,
poderão apresentar uma aglutinação com agregados de aspecto
filamentado.
RECOMENDA-SE A UTILIZAÇÃO DE CULTURAS FRESCAS QUE
TENHAM FICADO A MULTIPLICAR-SE DE UM DIA PARA O OUTRO.
Procedimento
Material Fornecido
São fornecidos materiais suficientes para 150 (ZL33/R30950102)
ou 450 (ZL34/R30950201) testes. Consultar a secção Conteúdo
do Kit.
Procedimento de Teste
Ler cuidadosamente as Precauções Analíticas antes de realizar
o teste.
Passo 1
Agitar vigorosamente e verificar se
os reagentes de látex aglutinam
antes de utilizar. Consultar a secção
Procedimentos de Controlo de
Qualidade e Inspecção Visual para
obter mais informações.
Passo 2
Para cada amostra de teste, colocar
uma gota de Látex de Teste num
círculo do Cartão de Reacção (RT64/
R30369001) e uma gota de Látexde
Controlo num círculo em separado.
Manter os frascos conta-gotas na
vertical para dispensar uma gota
precisa.
Passo 3
Utilizando uma vareta de mistura,
remover uma quantidade suficiente
de cultura pura ou colónias bem
isoladas para cobrir a extremidade
plana da vareta. Colher uma
quantidade de cultura equivalente
a seis colónias de tamanho médio
e utilizar essa quantidade como
referência.
1 gota
Passo 4
Passo 5
Passo 6
Passo 7
Emulsionar a amostra da cultura
numa gota de Látex de Teste
esfregando com a extremidade
plana da vareta. Misturar bem
mas não vigorosamente, caso
contrário a superfície do cartão
poderá danificar-se. Para algumas
estirpes,
particularmente
as
espécies diferentes do S. aureus,
a emulsificação continua a ser
difícil de realizar. Isto deve ser
tido em conta, uma vez que os
agrupamentos de culturas não
emulsionadas podem fazer com que
o látex apresente uma aparência
‘rugosa’ ou ‘filamentada’ durante
a leitura. Espalhar o látex sobre
aproximadamente metade da área
do círculo.Descartar a vareta de
mistura de forma segura.
Emulsionar
a amostra
Utilizando uma vareta de mistura
nova, emulsionar uma quantidade
semelhante de amostra da cultura
no Látex de Controlo, Passo 4.
Descartar a vareta de mistura de
forma segura.
Emulsionar
a amostra
Agitar o cartão lentamente até
30 segundos observando ao
mesmo tempo quaisquer sinais
de aglutinação. O cartão deve ser
mantido a uma distância de leitura
normal (25 a 35 cm) dos olhos. Não
utilizar uma lupa.
Agitar
Inspecção visual
A agregação das suspensões de látex deverá ser sempre observada
à medida que estas forem sendo deitadas no Cartão de Reacção.
Se houver sinais de agrupamento antes da amostra de teste ser
adicionada, a suspensão não deve ser utilizada. Após um período
de tempo prolongado, poderá ocorrer uma leve agregação ou
secura em volta do topo do frasco. Se isto se verificar, o frasco
deverá ser agitado vigorosamente durante alguns segundos até
que a suspensão volte a ficar completa.
5.
Procedimento de controlo
O desempenho dos reagentes dos Látex de Teste e de Controlo
poderá também ser confirmado utilizando culturas de referência
de estirpes de bactérias frescas, deixadas de um dia para o outro,
seguindo o método descrito no Procedimento de Teste. As
estirpes de referência apropriadas são indicadas abaixo.
Características Específicas de Desempenho
ESPÉCIE
Descartar de forma segura o Cartão
de Reacção utilizado.
S. aureus (ATCC® 25923TM)
S. epidermidis (ATCC® 12228TM)
Controlo de Qualidade
Os testes de controlo de qualidade devem ser realizados com
cada remessa e cada novo número de lote de kits recebidos. Cada
laboratório deve cumprir os regulamentos locais e nacionais.
Qualquer desvio aos resultados esperados indica que poderá
haver um problema com os reagentes; isto deve ser resolvido
antes de se continuar a utilizar as amostras clínicas.
–
–
Limitações do Procedimento
1.
2.
3.
Resultado Negativo
A falta de aglutinação em ambos os reagentes significa que a
cultura submetida ao teste tem pouca probabilidade de ser S.
aureus.
Resultados Não Interpretáveis
A aglutinação visível do Látex de Controlo, quer seja mais fraca ou
mais forte que o Látex de Teste, indica uma reacção não específica.
+
–
Interpretação dos Resultados
Uma reacção positiva indica a presença de um ou mais factores
de agrupamento, proteína A ou antigénios na superfície das
células na cultura submetida ao teste, e um resultado negativo
indica a sua ausência.
REsultados
Resultados Positivos
A aglutinação do Látex de Teste acompanhada por uma falta
aglutinação do Látex de Controlo indica a presença de coagulase,
proteína A ou outros antigénios encontrados habitualmente no
S. aureus na cultura que está a ser submetida ao teste. A maior
parte das reacções positivas serão quase instantâneas. Se a leitura
do teste for efectuada depois de passados 30 segundos, poderão
ocorrer resultados positivos falsos.
RESULTADO ESPERADO
LÁTEX DE
LÁTEX DE
TESTE
CONTROLO
4.
As amostras cultivadas num meio com antibióticos ou
num meio com bastante sal, como por exemplo o ágar
manitol-sal, poderão apresentar uma aglutinação com
agregados de aspecto filamentado.
Para além da espécie S. aureus, mais concretamente
as espécies S. hyicus, S. intermedius, S. lugdunensis e S.
schleiferi, algumas espécies de estafilococos poderão
fornecer resultados positivos quando submetidas aos
testes de coagulase e poderão também reagir com os
procedimentos de teste rápido de látex. Se necessário,
estas espécies poderão ser identificadas através de
procedimentos de teste bioquímicos. As espécies S. hyicus
e S. intermedius são raramente encontradas nos testes
realizados em laboratórios clínicos.
Algumas espécies de estafilococos, negativas quando
submetidas ao teste de coagulase, como por exemplo a
S. capitis, possuem factores de agrupamento da proteína
de plasma, os quais não reagem com o teste Staphaurex
Plus*. No entanto, algumas estirpes bioquimicamente
identificadas como S. saprophyticus forneceram reacções
positivas fracas e poderá ser necessário efectuar uma
identificação posterior dos isolados de urina.
Alguns estreptococos e possivelmente outros organismos
com imunoglobulina ou outros factores de agrupamento
de proteína de plasma poderão reagir no teste de látex.
Existem também diversas bactérias, como por exemplo
a E. coli, onde as partículas de látex podem aglutinar
de forma não específica. Para eliminar uma possível
interferência destes organismos, deve utilizar-se o método
de coloração de Gram para que sejam testados apenas os
organismos com morfologia estafilococa.
Todos os resultados duvidosos deverão ser avaliados
quanto ao grau de puridade e identificados através de
um meio alternativo.
Resultados Esperados
Aglutinação forte com as culturas de S. aureus, sem aglutinação
com os estafilococos que não possuem factor de agrupamento,
proteína A nem antigénios de superfície característicos da S.
aureus.
O desempenho do teste Staphaurex Plus* foi avaliado em quatro
laboratórios de referência microbiológicos nos E.U.A. e em dois
na Europa, num total de 646 isolados clínicos (presumivelmente
estafilococos) de rotina e em 671 culturas armazenadas. As
culturas foram testadas simultaneamente com o procedimento
de teste de coagulase em tubo, com o teste de coloração de
Gram e com pelo menos um teste rápido alternativo para a
identificação da S. aureus. Os resultados encontram-se resumidos
no Quadro 1 e 2.
Isolados Clínicos
S. aureus Resistente à Meticilina (SARM)
Nos laboratórios de referência americanos e europeus foram
testadas um total de 151 culturas frescas S. aureus que apresentaram
resistência a um ou mais antibióticos. O teste Staphaurex
Plus* identificou correctamente 150 destes isolados. O isolado
discrepante apresentou um resultado positivo quando submetido
ao teste de coagulase em tubo e a um teste rápido de látex
alternativo.
A sensibilidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
SARM é estimada como sendo de 99,34% (150/151).
S. aureus Sensível à Meticilina (SASM)
O teste Staphaurex Plus* identificou correctamente 335 de 337
culturas confirmadas como sendo S. aureus pelos laboratórios de
referência microbiológicos. Os isolados discrepantes incluíram
um, o qual forneceu um resultado negativo quando submetido
ao teste rápido de látex alternativo.
A sensibilidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
SASM é estimada como sendo de 99,41% (335/337).
Outros estafilococos
Foram também testados um total de 157 isolados de estafilococos não
S. aureus frescos. O teste Staphaurex Plus* forneceu um resultado
negativo para 150 destes isolados, que incluíram o S. saprophyticus,
S. epidermidis e o S. haemolyticus. As sete culturas restantes que
forneceram um resultado positivo quando submetidas ao teste
Staphaurex Plus* incluíram três que também apresentaram um
resultado positivo com o teste rápido de látex alternativo.
A especificidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
de estafilococos não S. aureus é estimada como sendo de 95,54%
(150/157).
Desempenho Geral do Teste Staphaurex Plus* em
Comparação com o Teste de Coagulase em Tubo nos Isolados
S. aureus
Sensibilidade Relativa
99,4%
Especificidade Relativa
95,5%
Conformidade Geral
98,4%
NOTA: O Teste Staphaurex Plus* forneceu um resultado não
interpretável em 0,15% (1/646) das culturas frescas e foi excluído
do resumo acima.
Culturas Armazenadas
S. aureus Resistente à Meticilina (SARM)
Foram testadas um total de 282 culturas S. aureus resistentes
a um ou mais antibióticos. O teste Staphaurex Plus* identificou
correctamente 281 destes isolados. A cultura discrepante
apresentou um resultado positivo quando submetida ao teste de
coagulase em tubo e um resultado negativo quando submetida a
um teste rápido de látex alternativo.
A sensibilidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
SARM é estimada como sendo de 99,65% (281/282).
S. aureus Sensível à Meticilina (SASM)
O teste Staphaurex Plus* identificou correctamente 242 de 248
culturas confirmadas como sendo S. aureus pelos laboratórios de
referência microbiológicos. As culturas discrepantes foram quatro,
as quais forneceram um resultado negativo quando submetidas
ao teste rápido de látex alternativo.
A sensibilidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
SASM é estimada como sendo de 97,6% (242/248).
Outros estafilococos
Foram também testadas um total de 139 culturas de estafilococos
não S. aureus armazenadas. O teste Staphaurex Plus* forneceu
um resultado negativo para 132 destes isolados, que incluíram o
S. saprophyticus, S. epidermidis e o S. haemolyticus. As sete culturas
restantes que forneceram um resultado positivo quando submetidas
ao teste Staphaurex Plus* incluíram duas que também
apresentaram um resultado positivo com o teste rápido de látex
alternativo.
A especificidade do teste Staphaurex Plus* neste grupo de culturas
de estafilococos não S. aureus é estimada como sendo de 95,0%
(132/139).
Desempenho Geral do Teste Staphaurex Plus* em
Comparação com o Teste de Coagulase em Tubo nas Culturas
S. aureus
Sensibilidade Relativa
98,7%
Especificidade Relativa
95,0%
Conformidade Geral
97,9%
NOTA: O Teste Staphaurex Plus* forneceu um resultado não
interpretável em 0,3% (2/671) das culturas armazenadas e foi
excluído do resumo acima.
Quadro 1
Reactividade do Teste Staphaurex Plus*
nos Isolados Clínicos de Estafilococos Presumíveisa
S. aureus Resistente à Meticilina (SARM)
S. aureus Sensível à Meticilina (SASM)
Isolados não S. aureus b
Resultados do Teste
Staphaurex Plus*
Positivo Negativo
150
335
7
1
2
150
Total
151
337
157
O Teste Staphaurex Plus* forneceu um resultado não
interpretável em 1 amostra. Este resultado foi excluído do
quadro.
b
inclui o S. saprophyticus, S. epidermidis e o S. haemolyticus.
a
Quadro 2
Embalagem
Reactividade do Teste Staphaurex Plus*
nas Culturas de Estafilococos Armazenadasa
Resultados do Teste
Staphaurex Plus*
PositivoNegativo Total
S. aureus Resistente à Meticilina (SARM)
S. aureus Sensível à Meticilina (SASM) Isolados não S. aureus b
281
242
7
1
6
132
282
248
139
O Teste Staphaurex Plus* forneceu um resultado não
interpretável em 2 amostras. Este resultado foi excluído do
quadro.
b
inclui o S. saprophyticus, S. epidermidis e o S. haemolyticus.
ZL33/R30950102..............................150 testes
ZL34/R30950201............................. 450 testes
Legenda dos símbolos
Dispositivo médico para diagnóstico in vitro
Número de Catálogo
a
Bibliografia
Kloos, W.E. and Lambe, D.W. (1991). Staphylococcus. Manual of Clinical
Microbiology, 5th Ed., edited by Balows, A., Hausler, W.J., Herrmann,
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polysacchande Type 5 among oxacillin-resistant Staphylococcus aureus.
J. Clin. Microbiol., 25, 1932-1933.
12
Henkel KGaA. Informações do Fabricante e Folha de Dados de Segurança
para o Bronidox® L.
1
Limites de temperatura (Temperatura de
Armazenamento)
Consulte as instruções para utilização (IFU)
Código de lote (Número de Lote)
Utilizar até (Data de Expiração do Prazo de
Validade)
Atenção, consulte os documentos que
acompanham o produto.
fabricante
Bronidox® é uma marca registada da Cognis UK Ltd.
ATCC® é uma marca registada da American Type Culture Collection.
*marca comercial.
IFU X7826 revista março 2012
Remel Europe Ltd
Clipper Boulevard West,
Crossways Dartford, Kent,
DA2 6PT Reino Unido
Para obter assistência técnica, entre em contacto com o seu
distribuidor local