OPINIÃO
DESENVOLVIMENTO RECENTE EM
MACAU DAS TÉCNICAS DE ANÁLISE
DO ADN NA MEDICINA FORENSE
Técnicos superiores de 2ª classe do Departamento de Ciências Forenses da PJ, Wu Kit Ian, Sa Fei
I.PREÂMBULO
A técnica de análise do ADN na medicina
forense realiza, at ravés da análise dos
ma rca dores genét icos do A DN encont r a dos
nas a most r as recol h id as, a ident if icação
dos indivíduos e o teste de pater nidade,
aplicando-se pr incipalmente à área de
i n ve s t i g a ç ã o c r i m i n a l p a r a i d e n t i f i c a r o s
suspeitos e def inir a direcção da investigação,
au ment a assim a t axa de resolução dos
c r i m e s . D e s d e q u e a a n á l i s e d o A DN foi ,
pela pr i mei r a vez nos a nos 80, apl ica d a na
I n g l a t e r r a , à i nve s t ig a ç ã o c r i m i n a l , c o m o
meio cient íf ico de per it agem, cred ível e
r ápido, a técn ica tem-se desenvolv ido e
generali zado a su a aplicação a u m r it mo
62
presente texto irá apresentar, de forma breve,
a situação do desenvolvimento destas técnicas
em Macau.
I I . S I T UAÇ ÃO D O
D E S E N V O LV I M E N T O D A S
TÉCNICAS DE ANÁLISE DO ADN
NA PJ
C o m o o r e s u lt a d o d a a n á l i s e d o A DN
p o d e s e r v i r c o m o p r ov a n o ju lg a m e nt o d e
u m c r i m e , q u a n d o s u r g e m n ovo s m é t o d o s
e n ovo s p r o d u t o s n o â m bit o d a a n á l i s e d o
A DN n a me d ici n a for e n s e, o s la b or at ór io s
i nt e r n a c io n a i s d ef i n e m c r it é r io s ge r a i s d e
a d m issão mu ito r igorosos. Isto favorece
o d e s e n vo l v i m e n t o p o s i t i vo d e s t a s n o v a s
técnicas, sendo possível não apenas prevenir
m u it o ele v a d o e m t o d o s o s p a í s e s . C o m a
u m uso imprópr io da técnica e produtos
d e d ic a ç ã o a o e s t u d o p r of u n d o d o s p e r it o s
relat ivos e ma nter a técn ica est a nd a rdi zad a
desta área, su rgiram constantemente, nos
e u n ifor m izad a , mas t ambém m i n i m iza r
últi mos anos, novas técn icas, for mas e
os efeit os negat ivos. Por t a nt o, a nt e s d a
produtos que enriquecem o sistema de
introdução destas novidades, o Departamento
análise do A DN na medici na forense. O
de Ciências Forenses da PJ procede sempre à
Departamento de Ciências Forenses (DCF) da
avaliação da sua ef iciência e quais os limites
Polícia Judiciária sabe que apenas adquirindo
que ex ist e m n a apl ica çã o pr át ica , de modo
const antemente tecnologias e técnicas,
a garanti r que o processo de análise seja
mais recentes e mais ava nça d a s, é possível
sempre executado sob um cont rolo r igoroso,
conseg ui r u m mel hor ser viço de apoio à
que ajuda a excluir er ros devidos a condições
i nve s t ig a ç ã o c r i m i n a l e a o j u lg a m e n t o. O
objectivas, garantindo assim a qualidade
OPINIÃO
d a per ícia e mel hor a ndo a cred ibilid a de do
o “ C h e l e x ”, “ Q I A a m p ® D N A M i n i K i t ” e
resultado da análise.
“ DNA IQ T M Syst e m”, i nt r o d u z iu , e m 2010,
As técnicas que a Secção de Físico-Química
o “QI Aamp ® DNA I nvestigator K it ” que foi
do DCF tem introduzido nos últimos anos são
cr iado especialmente para análise de provas
as seguintes:
no âmbito d a medici na forense, t ambém
(I)M E TO D O LO G I A S D E R EC O L H A
DO ADN
Para obter um resultado completo
na tipif icação do A DN, desig nad amente
no âmbito das substâncias biológicas
duv idosas, u ma metodolog ia adequ ad a é
u ma ga rant ia pa ra o t rabal ho de per it agem.
R el a t i v a m e n t e à r e c ol h a d o A DN , h oj e , é
usado f requentemente, na medicina forense,
o método “Chelex” que tem a vantagem de se
caracterizar por operações simples, poupança
de tempo e facilidade de uso. Todavia, o ADN
recolhido através deste método apresenta um
baixo nível de pureza e quantidade reduzida,
é apenas aplicável a a most r as levemente
p ol u í d a s e c o m q u a n t i d a d e s r e d u z i d a s d e
mater ial i mpu ro. No ent a nto, a maior pa r te
d a s subst â ncia s biológ ica s recol h id a s no
local do cr i me possui bast a nte i mpu rezas e
i n ibidores, que afect am, consequentemente,
a r e a c ç ã o d o P C R e a a n á l i s e s eg u i nt e d o
p ol i mo r i f i s mo d o A DN. Po r t a nt o, d e s d e o
p r i n c ípio, e nt r e o s v á r io s e s t u d o s s ob r e a
análise do ADN na medicina forense, muitos
concent ram-se sobre a possibilidade de
au ment a r a t a xa de recol ha de A DN, a ssi m
surgiram vários métodos como o concentrated
salt method, anionic detergent method,
phe nol e xt ract ion , wate r e xt ract ion , solidphase extraction etc.
Sintetizando o resultado do est udo
feito por per itos e est udiosos, bem como os
realizou a validação das perícias de amostras
comu n s a n al isa d a s n a se cçã o, a sabe r,
matér ias obtidas na cavidade oral, vestígios
de sangue, de esper ma, car tão FTA, cabelos,
u n has, beat as, tecidos hu manos e dentes.
No M a p a 1 foi fe it a u m a c o m p a r a ç ã o d o s
resultados da recolha do ADN efectuada com
o “QIAamp ® DNA Investigator Kit” e com o
“QIAamp ® DNA Mini Kit”. Os quadros A e B
são relativos à electroforese (electrophoresis
mapping ) e most ram o result ado da recol ha
do ADN, proveniente da mesma amostra, com
o “QI Aamp ® DNA Mini K it ” e o “QI Aamp ®
D N A I n v e s t i g a t o r K i t ”, r e s p e c t i v a m e n t e ,
o qu a d ro A most r a u m r e s u lt a do negat ivo,
e n q u a nt o q u e a d i fe r e n ç a d e a lt u r a s e nt r e
picos é ex t re m a me nt e re du z id a , só at r avé s
desse sistema, que mostra o quadro B,
conseg ue-se deter mi nar a tipif icação.
Comparando os métodos que a Secção de
Físico - Q uí m ica ut ili zava a nter ior mente,
o “QI Aa mp® DNA I nvest igator K it ” tem
u ma t axa de recol ha de A DN mais alt a ,
relat iva me nt e a subst â ncia s e m qu a nt id a de
diminuta, consegue-se ainda obter ADN tanto
de maior quantidade como com maior pureza
e m c o m p a r a ç ã o c o m o s m é t o d o s “ C h ele x”
e “ DNA IQ T M Sy s t e m”. O “ QI A a m p ® DNA
I nve s t ig a t o r K it ” é a c t u a l m e nt e o m é t o d o
adoptado formalmente no trabalho quotidiano.
(II)
KIT
DE
REPLICAÇÃO
(AM PLIFIED KIT )
problemas encont rados na a nálise do A DN,
No âmbito da análise do ADN na
a Secção de Físico - Q uí m ica , pa ra além dos
medicina forense, para acompan har a
métodos adopt ados or iginal mente, como
investigação criminal, é necessário proceder,
63
OPINIÃO
Mapa 1: Recolha feita com o QIAamp ® DNA Investigator Kit e QIAamp ® DNA Mini Kit.
c om a m a ior b r ev id a d e p o s sível , à a n á l i s e
“AmpFℓSTR ® Minif iler T M PCR Amplif ication
p r e cis a do s m a r ca dor e s ge nét ic o s do A DN
Kit”. Como mostra o Mapa 2 na nossa Secção
encont rados nas subst â ncias em qu a nt id ade
a c t u a l m e nt e c o n s e g u e - s e a lo c a l i z a ç ã o d e
r e d u z id a e n a q u ele s q u e a p a r e c e m s ó u m a
19 loci e 1 locu s de géne ro (ge nder loc u s),
ve z , a u t i l i z a ç ã o d a t é c n ic a d e r e pl ic a ç ã o
a ut ili zação combi nad a dos k it s pode ai nd a
e a m pl ia ç ã o P C R- ST R s a t i sf a z e s t a s
alcançar u ma probabilid ade de coi ncidência
exigências, este método tem ainda a vantagem
a c u m u l a d a d e 10 - 2 3 , n a i d e n t i f i c a ç ã o d e
de ser altamente sensível, replica u ma
indivíduos o resultado acumulado pode
g ra nde qu a nt id ade de loci, é automat i zado,
at i ng i r os 0.999999999999999. Pa r a eleva r
as operações são rápidas, poupa-se nas
a taxa de sucesso do exame, a Secção de
substâncias recolhidas, é fácil de utilizar etc.
Físico-Química realizou, em 2011, a avaliação
Desde que a Secção de Físico - Q uí m ica
e v a l i d a ç ã o d o “A m p Fℓ S T R ® I d e n t i f i l e r ®
a dopt ou , e m 1998, a t é c n ic a de a n á l i s e do
P l u s P C R A m p l i f i c a t i o n K i t ”, i n c l u s i v e
A DN na medici na forense e após vá r ios
os parâmetros de exactidão, precisão,
a n o s d e d e s e n vol v i m e n t o , o s t i p o s d o k i t
repetibilidade, sensibilidade, poluição,
d e r e p l i c a ç ã o q u e f o r a m u t i l i z a d o s s ã o:
c omp a r a ç ã o e nt r e s u b st â ncia de r efe r ê ncia
“ P o w e r P l e x ® 16 S y s t e m ”, “ P o w e r P l e x ® 16
e amost ra recol hida, est udo das subst âncias
H S S y s t e m ”, “A m p F ℓ S T R ® Y f i l e rTM
mist u radas, nú mero cíclico, equilibração da
“A m p F ℓ S T R ®
ampliação e estudo dos gr upos entre outros. O
PCR Amplif ication Kit” e
resultado da avaliação e validação indica que
P C R A m p l i f i c a t i o n K i t ”,
Sinof iler
64
TM
OPINIÃO
todos os pa râ met ros do k it
satisfazem as exigências, a
PP16
Identifiler
MiniFiler
Sinofiler
par disso, este mostra ainda
LOCI
15+1
15+1
8+1
15+1
u m a m a ior s e n sibi l id a de e
Amelogenin




maior capacid ade de evit a r
CSF1PO




os inibidores, pode-se
certamente aumentar a
taxa de sucesso no exame
de substâncias comuns
e melhorar a qualidade
D12S391

D13S317




D16S539




D18S51




D19S433
D21S11
da peritagem. Se for
D2S1338
reali za d a a re plicação com








D3S1358


Identif iler ®
D5S818


Plus PCR A mplif icat ion
D6S1043
K i t ”, a p r o p o r ç ã o e n t r e
D7S820


o elemento pr incipal e o
D8S1179


secu ndár io de subst ância
FGA


m i s t u r a d a é d e 16:1, o
Penta D

Penta E

TH01


TPOX


vWA


o
“AmpFℓSTR ®
electroferograma do produto
r e pl ic a d o obt id o c o n s eg u e
most ra r, com precisão,
de que tipo são as duas
a most ras, o que i ndica que
e st e k it a mpl ia t ã o be m a s










Mapa 2: O número de loci detectáveis com o kit que o Departamento de Ciências
Forenses está a utilizar actualmente
pa r tes ex istentes em maior
quantidade bem como as outras, ajudando na
análise das substâncias misturadas que ocorre
frequentemente no dia a dia.
(III) EQUIPAMENTO E APETRECHAMENTO
cada vez maior, demonstrando-se assim a sua
importância.
A Polícia Judiciár ia tem vindo a
i mple me nt a r a s l i n h a s de a cçã o no reforço
d o t r a b a l ho p ol icia l ut i l i z a nd o a evolu ç ã o
O analisador genético é um equipamento
d a tecnologia, prest ando muit a atenção
cr ucial na análise do A DN, usavam-se
ao desenvolvimento da tecnologia e à
i n i c i a l m e n t e o s m o d e l o s 3 7 7 e 310 ,
for mação, nesse sentido, foi adqui r ido,
s u r g i r a m m a i s t a r d e o 310 0 e o 313 0X L ,
e s t e a n o, o “24 - c a p ill a r y 350 0X L G e n e t i c
at é à a c t u a l i z a ç ã o c om o mo d elo 350 0, no
A n a l y z e r ”, a p a r e l h o m a i s m o d e r n o c o m
a no p a s s a do. Pa s s ou - s e a s si m d a s 4 pi st a s
c a r a c t e r í s t ic a s d e a lt o r e nd i me nt o e c u r t o
elect roferoses no modelo inicial, para as 16
t e mp o de a n á l i s e, mel hor a ndo a ef iciê ncia
pi s t a s e hoje a s 24 pi s t a s , o q u e sig n i f ic a
da análise e da per ícia. A par disso, há
que a análise do A DN está-se a desenvolver
t ambém mel horamentos no que diz respeito
na direcção de u m rendimento elevado, isto
ao cont rolo da temperat u ra e à est abilidade
r evela q ue a pro c u r a d a a n á l ise do A DN é
da força do si nal ent re capilares diferentes,
65
OPINIÃO
o que satisfaz da melhor forma as exigências
( S N P s )” : s e n d o a t e r c e i r a g e r a ç ã o d e
rigorosas da análise dos fragmentos de ADN.
marcadores genéticos do ADN depois do RFLP
Um s of t wa r e i nt el ige nt e o p e r a c io n a l p o d e
e do STR, os SNPs têm a característica de estar
não apenas si mplif ica r o proced i mento e
distribuído de forma uniforme no genoma, ser
melhorar a ef iciência da análise, mas também
estável geneticamente, ser necessário um curto
pode local i z a r e pe r seg u i r os compone nt e s
fragmento de ADN para se efectuar o exame,
para registá-los no sistema e identif icar
t e r u m r e n d i m e nt o ele v a d o e t c., e s p e r a - s e
aqueles reagentes facilitando assim a gestão
q u e p o s s a aj u d a r a r e s ol ve r p r o bl e m a s d e
da qualidade. Para além disso, a análise que
decomposição e degradação e as dif iculdades
utiliza 6 cores de f lorescência conseg ue
encont radas na tipif icação de substâncias do
realizar a sequenciação do ADN ou a
A DN e m q u a nt id a de s d i m i nut a s. 3) e st udo
comparação de sequências, para além de
d a M e t i l a ç ã o d o A D N: é c o n f i r m a d o q u e
poder detectar STR loci mas também realizar
a Me t i l a ç ã o d o A DN é a pl ic ável à a n á l i s e
a a nálise de vá r ios f r ag mentos, i nclu sive a
na medicina forense e apresenta uma
a nálise de u m “Amplif ied Frag ment Leng th
especif icidade f ilogenética, hereditariedade e
Polymorphisms (AFLP)” e “Single Nucleotide
uma relativa estabilidade, também é aplicável
P o l y m o r p h i s m s ( S N P s )” , o q u e p o d e
à identif icação de gêmeos idênticos, dedução
satisfazer as exigências de desenvolvimento
de idade e sexo etc. 4) Criação e aplicação de
tecnológico futuras. Em resumo, a introdução
uma base dos dados do ADN: a base relativa
d o a n a l i s a d o r g e n é t i c o 35 0 0X L p o d e n ã o
a o s d a do s do A DN é a c t u a l me nt e u m a d a s
apenas melhorar a act ual qualidade do
t a refa s pr i ncipais a dese nvolve r na á rea d a
t r a b a l h o d a S e c ç ã o d e Fí s i c o - Q u í m i c a n a
medicina forense, a sua cr iação pode deixar
análise mas também ser ve como base para o
definitivamente a antiga actuação que era mais
de se nvolv i me nt o s u st e nt ável d a a n á l ise do
passiva, agora, a i nvestigação e localização
ADN.
d e s u s p e it o s , p a s s a p a r a p r o c e d e r à b u s c a
III. CONCLUSÃO
cie nt íf ica e obje ct iva , sele ccion a ndo a ssi m
Desde que a análise do ADN na medicina
p ossíveis s u s p eit os. A Pol ícia Jud iciá r ia
forense foi aplicada à investigação criminal,
est á-se a dedicar act ual mente a u ma lei que
tem-se desenvolvido de forma contínua, tanto a
contemple a utilização de uma base dos dados
nível teórico como das metodologias, hoje em
de A DN, pro cu r a- se a ssi m a c onc ret i z a çã o
dia, os estudos mais importantes a desenvolver
de um sistema racional, científ ico e rigoroso
nesta área são: 1) estudo do polimorf ismo do
relativamente aos mecanismos f iscalizadores
c r omo s s om a X - s e r ve p a r a r e s olve r c a s o s
no âmbito d a cr iação, recol ha , gest ão e
específ icos ligados ao teste de pater nidade,
utilização dos dados relativos ao A DN, com
c o m o a id e n t i f ic a ç ã o d a r el a ç ã o d e i r m ã s
vista a poder ser aplicada à técnica de análise
com o mesmo pai mas diferentes mães e falta
da investigação criminal.
dos pais no momento de proceder à análise,
66
n u m a b a s e d e d a d o s d e A DN , d e m a n e i r a
O su rgi mento e desenvolvi mento
identificação da ligação entre pai e filha etc.;
d a t é c n ica de a nál ise do A DN na me d ici na
2) O s “ S i n g l e N u c l e o t i d e P o l y m o r p h i s m s
forense representam um avanço revolucionário
OPINIÃO
para a investigação criminal, este desempenha
policiais e judiciárias, conseg uindo for necer
u m p a p e l i m p o r t a n t e n a i n ve s t i g a ç ã o , n o
u m f u nd a me nt o ef ica z , pre ciso e obje ct ivo
c ombat e a o c r i me e d u r a nt e o ju lg a me nt o.
na reconst r ução do cr ime, identif icação
É previsível que com o desenvolvi mento na
dos ca d áveres, cr u za mentos ent re vá r ios
medicina forense e a criação de uma base de
c a s o s c r i m i n a i s , d ef i n iç ã o d a d i r e c ç ã o d e
dados de A DN, o Depar tamento de Ciências
investigação, identif icação e investigação de
For e n se s p o s s a p r e st a r u m se r v iç o de
suspeitos etc.
per it agem ainda mel hor para as autor idades
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