Padrão de identidade em eletroforese (SDS-PAGE) de cultivares de soja livre
de lipoxigenase
Electrophoresis (SDS-PAGE) of lipoxygenase-free soybeans
Marilia P. Stephan1, Alexsandro A. dos Santos2, Tatiana de Lima Azevedo3, Rosemar
Antoniassi1, Ilana Felberg1, Renata G. Borguini1, Mercedes C. Carrão-Panizzi4
1
Pesquisadoras, Embrapa Agroindústria de Alimentos, Rio de Janeiro, RJ
Assistente, Embrapa Agroindústria de Alimentos, Rio de Janeiro, RJ
3
Analista, Embrapa Agroindústria de Alimentos, Rio de Janeiro, RJ
4
Pesquisadora, Embrapa Soja, Londrina,SC
2
Palavras-chave: BRS 213, BRS 257, lipoxigenases.
Introdução
A soja (Glycine max (l.) Merrill) é um alimento de alto valor nutricional, rica em compostos
biologicamente ativos e seu consumo na dieta vem sendo associado a diversos efeitos
benéficos à saúde (MESSINA, 2006). Entretanto, produtos de soja processados de maneira
inadequada apresentam sabor e aroma desagradáveis ao paladar dos povos ocidentais,
resultantes da presença de compostos formados pela ação de enzimas lipoxigenases (LOX)
em presença de umidade, durante seu processamento. Esses compostos, uma vez
formados, não são eliminados. Muito embora, outras causas sejam consideradas no
desenvolvimento de “off flavor” dos produtos de soja, nos programas de melhoramento de
soja, existem variedades livres de LOX. As lipoxigenases se caracterizam por catalisarem a
reação de transformação dos ácidos linoléico e linolênico em compostos carbonílicos de
cadeia curta como aldeídos, álcoois, cetonas e hidrocarbonetos. Alguns destes compostos
podem ser detectados sensorialmente em partes por bilhão, e nenhuma quantidade de calor
aplicada posteriormente à sua formação, eliminará os sabores e aromas desagradáveis
desenvolvidos. Estão presentes na soja, três isoenzimas, LOX1, LOX2 e LOX3,
categorizadas em duas classes, sendo que a Classe I a qual pertence a LOX1, apresenta
pH ao redor de 9, que produz na oxidação, maiores quantidades de 13-hidroperóxido,
enquanto que as demais tem pH ótimo ao redor de 7, com formação de quantidades iguais
de hidroperóxidos 9 e 13 (KUMAR et al, 2003). A Embrapa Soja lançou duas cultivares de
soja (BRS 213 e BRS 257) que apresentam característica genética de ausência das
lipoxigenases (LOX1, LOX2 e LOX3), as quais são isoenzimas que migram em eletroforese
na faixa de 100 kDa As cultivares de soja BRS 213 e BRS 257, quando utilizadas como
matéria-prima, podem evitar o desenvolvimento do sabor desagradável. Este trabalho teve
como objetivo obter os padrões de identidade destas variedades geneticamente melhoradas
e compará-los com duas cultivares convencionais (IAS 5 e BRS 273).
Material e Métodos
A soja foi triturada e o óleo foi extraído por Soxhlet com éter de petróleo por 16 horas. A
extração das enzimas foi feita através de solubilização da torta desengordurada de soja em
tampão Na2CO3 0,05 M, uréia 6 M, sacarose 12% e SDS 1% e agitação durante 1 h. Após
filtração em filtro de algodão, as amostras foram centrifugadas a 4000 rpm durante 10
minutos. Para o presente trabalho foi utilizado o sistema de eletroforese da marca Biorad,
segundo a metodologia de preparação dos géis descrita por Laemmli (LAEMMLI, 1970). A
corrida em gel de poliacrilamida a 12% foi feita durante 7 h a 100 V. As proteínas dos géis
foram coradas com o reagente de cor “Coomassie brillant blue R250”, durante uma noite e
descoradas com uma solução contendo: 40% de metanol, 10% de ácido acético e 50% de
água, por 3 h.
Resultados e discussão
A análise do padrão de identidade protéica das variedades melhoradas geneticamente
permite concluir que os perfis protéicos destas, distinguem-se acentuadamente daqueles
observados para as variedades convencionais (IAS 5 e BRS 273) na faixa de massa
molecular de 100 kDa. A ausência de aparecimento das bandas nas variedades livres de
LOX confirma que não há expressão gênica de nenhuma das lipoxigenases investigadas,
sugerindo que estas cultivares podem apresentar vantagens sensoriais quando utilizadas
como alimento.
Figura 1. Eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) das proteínas de variedades de
soja
Conclusões
A análise por eletroforese das proteínas do farelo de soja confirmou a ausência de
lipoxigenases nas duas cultivares de soja BRS 213 e BRS 257.
Referências bibliográficas
KUMAR, V.; RANI, A.; TINDWANI, C.; JAIN, M. Lipoxygenase isozymes and trypsin inhibitor
activities in soybean as influenced by growing location. Food Chemistry, v.83, p.79-83,
2003.
LAEMMLI, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of
bacteriophage t4. Nature, London, v. 33, p. 680-685, 1970.
MESSINA, M., MCCASKILL-STEVENS, W.; LAMPE, J.W. Addressing the soy and breast
cancer relationship: Review, commentary, and workshop proceedings. J. Natl. Cancer Inst.,
v.98, n.18, p.1275–1284, 2006.
Autor a ser contactado: Marilia Penteado Stephan – Embrapa Agroindústria de Alimentos –
Rio de Janeiro – e-mail: [email protected]