3M Petrifilm
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Placa para Contagem de Leveduras e Bolores
Guia de
Interpretação
3M Petrifilm
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Placa para Contagem de Leveduras e Bolores
Este guia apresenta resultados das placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores.
Para mais informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.
A Placa 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Leveduras e Bolores (YM) é um meio de cultura pronto para uso que contém
um agente geleificante solúvel em água fria, nutrientes e um corante indicador para dar contraste e facilitar a contagem.
1
Contagem Total = 20
Contagem de Leveduras = 16
Contagem de Bolores = 4
Esta Placa 3M™ Petrifilm™ YM contém colônias de leveduras e bolores.
3
2
Contagem Total Estimada ~500
Contagem Estimada de Leveduras ~480
Contagem de Bolores = 21
Quando o número de colônias é maior que 150, estime a
contagem. Determine o número médio de colônias num
quadrado (1cm2) e multiplique-o por 30 para obter a contagem
total por placa. A área inoculada é de aproximadamente 30 cm2.
A cor das colônias pode variar de pálida (como neste exemplo)
a azul esverdeada.
Contagem de Leveduras e Bolores = 0
A figura 2 mostra uma Placa 3M™ Petrifilm™ YM
sem leveduras e bolores.
5
4
Contagem Estimada de Leveduras~INC
(contagem atual > 104 )
A Placa 3M™ Petrifilm™ YM, na figura 4, contém colônias
de leveduras incontáveis (INC). As colônias pequenas e azuis
na borda da placa (realçadas na caixa) estão presentes na
placa toda, embora menos visíveis.
Contagem Estimada de Bolores ~64
As colônias de bolores, na figura 5, estão começando a se
aglomerar e sobrepor umas as outras na placa. Conte cada
margem da colônia ou foco. A placa pode ser dividida em
seções para facilitar a contagem.
Neste exemplo, aproximadamente 1/4 da placa foi contada,
e o número de colônias contado foi multiplicado por 4 para
obter a contagem estimada na placa.
A seção mostrada tem 16 bolores.
As placas nas figuras 6a e 6b são da mesma amostra. A figura 6a é uma
diluição 1:10 e apresenta colônias pequenas, pálidas e numerosas,
tornando difícil a contagem. A figura 6b é uma diluição 1:100 e mostra
como a diluição do produto, para obter uma contagem menor que 150
colônias, facilita a contagem. Como na maioria dos meios, num ambiente
altamente competitivo (como a figura 6a), o crescimento de colônias
típicas será inibido. Para amostras altamente contaminadas, como
esta, diluições maiores são recomendadas para obter uma contagem mais
precisa e maior crescimento de colônias típicas (como na figura 6b).
6a
Contagem de
Bolores ~INC
6b
Contagem de
Bolores = 64
Reação de Fosfatase
7
Contagem de Leveduras e Bolores = 0
8
Contagem de Leveduras e Bolores = 0
As Placas 3M™ Petrifilm™ YM utilizam o corante indicador da fosfatase. Por essa razão, alguns produtos alimentícios que contêm fosfatase
podem causar uma reação de cor azul na Placa 3M™ Petrifilm™ YM. Dois tipos de reações de cor são encontradas: uma coloração de fundo
azul uniforme ou pontos azuis intensos. A figura 7 mostra uma coloração de fundo azul uniforme e a figura 8 mostra um ponto azul intenso,
muitas vezes encontrado em condimentos e produtos granulados. A figura 8 também mostra partículas de alimentos que produzem fosfatase.
Para reduzir a reação da fosfatase, siga uma ou mais das técnicas a seguir:
1. Dilua a amostra: Diluições maiores da amostra irão minimizar a coloração azul de fundo ou reduzir o número de pontos azuis intensos.
2. Preparo da amostra: Misture a amostra e deixe sedimentar por 3 a 5 minutos antes de plaquear. Pipete a amostra da porção central
do recipiente ou use saco para homogeneização com filtro a fim de evitar o plaqueamento de partículas.
3. Observe e anote: Observe as placas dentro de 24-36 horas de incubação e anote qualquer mudança de cor a fim de auxiliar na
interpretação final.
3M Petrifilm
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Instruções de Uso Placa para Contagem de Leveduras e Bolores
Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE
RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO VEJA A BULA DO PRODUTO.
Armazenamento
Petrifilm
1
Refrigere os pacotes fechados a < 8ºC.
Use antes da data de vencimento
impressa na embalagem. Antes do uso,
deixe os pacotes atingirem a
temperatura ambiente para abri-los.
Petrifilm
2
Para selar os pacotes abertos,
dobre a extremidade e sele com
fita adesiva.
Petrifilm
3
Para prevenir contra a exposição à
umidade, não refrigere os pacotes
abertos. Mantenha os pacotes
re-selados num lugar fresco e seco
por até um mês. Evite expor as
placas a uma temperatura > 25ºC
e/ou umidade relativa > 50%.
6
Misture ou homogeneize a amostra
utilizando métodos de rotina.
Preparo da Amostra
4
Prepare a diluição da amostra. Pese
ou pipete a amostra num recipiente
estéril, como saco para
homogeneização ou frasco de
diluição.
5
Adicione a quantidade adequada de um dos
diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato de
Butterfield, água peptonada 0,1%, diluente
salina peptonada (método ISO 6887-1),
solução salina (0,85 – 0,90%), caldo letheen
sem bissulfato ou água destilada.
Não use tampões contendo citrato, bissulfato
ou tiossulfato; eles podem inibir o crescimento.
Se o tampão citrato for indicado no procedimento
padrão, substitua-o por um dos tampões
listados acima, pré-aquecido a 40-45ºC.
Não é necessário ajustar o pH da amostra,
contudo, amostras com pH ajustado podem
ser usadas.
Inoculação
7
Coloque a Placa 3M™ Petrifilm™ em
uma superfície plana. Levante o filme
superior.
8
Com a 3M™ Pipeta Eletrônica ou
equivalente, posicionada
perpendicularmente a Placa 3M™
Petrifilm™, coloque 1ml da amostra
no centro do filme inferior.
9
Desça o filme superior sobre a
amostra.
ifilm
Petr
ilm
trif
Pe
ilm
trif
Pe
10
Coloque o difusor do Petrifilm™
Leveduras e Bolores no centro
da placa.
11
Incubação
Distribua a amostra pressionando
delicadamente o centro do difusor.
Não gire nem arraste o difusor.
12
Retire o difusor. Espere 1 minuto,
no mínimo, para o gel solidificar.
Interpretação
Métodos Listados:
<70°F
• Estados Unidos
* Contagem de Leveduras e Bolores em Alimentos:
Método Oficial AOAC 997.02
13
Incube as Placas com a face transparente
para cima, em pilhas de até 20 placas a
20-25ºC por 3 e 5 dias. (Devido ao fato de
que alguns bolores podem crescer
rapidamente, pode ser interessante ler e
contar as placas em 3 dias, pois pequenas
colônias podem ser ocultadas pelos bolores
maiores, crescidos em 5 dias. Se isto
acontecer, a contagem com 3 dias pode
ser usada; contudo, deve ser reportada
como uma contagem estimada).
14
As Placas 3M™ Petrifilm™ podem ser
contadas em um contador de colônias
comum ou outro sistema de amplificação.
• Canadá
* Amostragem Ambiental:
Placas para Contagem de Leveduras e Bolores
Método MFLP-41A
* Produtos Alimentícios e Ingredientes:
Placas para Contagem de Leveduras e Bolores
Método MFHPB-32
Diferenciação Macroscópica
Se for necessário diferenciar colônias de leveduras e bolores nas Placas 3M™ Petrifilm™ Leveduras e Bolores,
procure uma ou mais das seguintes características típicas, mencionadas abaixo.
10
9
Contagem de Bolores = 29
A figura 10 mostra colônias típicas de bolores.
Características típicas de bolores incluem:
Contagem de Leveduras = 43
A figura 9 mostra colônias típicas de leveduras.
Características típicas de leveduras incluem:
• A colônia cresce espalhada
• A colônia tem borda difusa
• A cor da colônia pode variar, pois os bolores
produzem uma variedade de pigmentos (marrom,
bege, laranja, azul-esverdeado)
• A colônia aparece plana
• A colônia usualmente tem um foco no centro
(usualmente mais escuro, mas também pode ser de
cor diferente)
• A colônia é pequena
• A colônia tem borda definida
• A cor da colônia pode variar de pálida a
azul-esverdeada
• A colônia pode aparecer elevada
• A cor da colônia é uniforme sem foco no centro
(centro mais escuro)
Diferenciação Microscópica
Leveduras e bolores estão relacionados e nem sempre podem ser distinguidos um do outro sem
exame microscópico.
Figura 11
Figura 12
Figura 13
Figura 14
Figura 15
Para isolar as colônias
para posterior identificação,
levante o filme superior e
remova a colônia do gel
usando uma alça ou
dispositivo similar.
Transfira a colônia para
uma lâmina de microscópio
com uma gota de água
estéril e cubra com uma
lamínula. Observe o
microscópio de
imersão (óleo).
As leveduras são
tipicamente
ovais e podem mostrar
brotamento.
Os bolores aparecem
tipicamente como
filamentos (micélio)
retos ou ramificados.
Os bolores mostrados acima
estão em diferentes estágios
de germinação.
Junho/09 Bretas
Microbiologia
3M do Brasil Ltda.
Via Anhanguera, km 110
13181-900 - Sumaré - SP