55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Análise dos complexos da cadeia respiratória
em linhagens celulares cíbridas com mutações
no DNA mitocondrial
Rodrigues, ADS; Tengan, CH
Disciplina de Neurologia Clínica, Departamento de Neurologia e Neurocirurgia
Universidade Federal de São Paulo, Escola Paulista de Medicina
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Palavras-chave: cadeia respiratória, mitocôndria, complexos respiratórios, doenças mitocondriais, DNA mitocondrial
Introdução: Existe uma grande dificuldade no diagnóstico das doenças mitocondriais, pois a maior parte delas não
apresenta alterações à biópsia muscular. O melhor método para o diagnóstico destas formas de doença mitocondrial se
baseia na análise das atividades dos complexos respiratórios por espectrofotometria, sendo este um método de difícil
realização. Objetivo: avaliar os complexos da cadeia respiratória utilizando métodos de análise protéica. Materiais
e métodos: foram estudadas 4 linhagens celulares cíbridas contendo DNA mitocondrial (DNAmt) normal (143B), e
mutações no DNAmt em homoplasmia: A8344G, A3243G e uma deleção de 7,5kb, (del-7,5kb). O complexos foram
avaliados pela técnica de BN-PAGE (blue native polyacrylamide gel electrophoresis) seguido de Western blotting (BNPAGE-Western), BN-PAGE seguido de detecção da atividade no gel (BN-PAGE- atividade “in gel”) e Western blotting
multiplex (análise simultânea dos 5 complexos utilizando anticorpos para uma subunidade de cada complexo
respiratório). Resultados: A análise pelo BN-PAGE Western mostrou a ausência ou redução dos complexos I, III e IV
nas linhagens com as mutações. Pelo BN-PAGE-atividade “in gel” observamos ausência da atividade dos complexo
I e IV em todas as linhagens com mutações, além de presença de bandas adicionais com atividade para complexo
V. O Western blotting multiplex mostrou redução ou ausência das subunidades dos complexos I, III e IV em todas
as linhagens com mutações. Conclusão: Os três métodos detectaram alterações nos complexos com subunidades
codificadas pelo DNAmt (complexos I, III, IV e V) nas linhagens com mutações, sugerindo que sejam bons métodos
auxiliares para o estudo de pacientes com doenças mitocondriais.
Apoio Financeiro: FAPESP E CAPES