Instruções de uso
IVD Bacterial Test Standard
Padrão de calibração contendo perfil típico de proteínas e peptídeos de
Escherichia coli DH5 alpha e algumas proteínas adicionais.
Para uso em espectrômetro de massas do tipo desorção e ionização a laser
auxiliada por matriz e analisador por tempo de vôo (MALDI-TOF-MS).
Os produtos CARE são projetados para fornecer a nossos clientes em todo o
mundo bens de consumo, acessórios e kits especializados de alta qualidade.
A gama de produtos CARE é especificamente otimizada e certificada para uso
com todos os sistemas da Bruker Daltonics.
Idioma: pt-br
www.bruker.com/care
4ª revisão (Janeiro de 2014)
Bruker
1 Uso indicado
2
2 Descrição do produto
2
3 Inspeção, armazenamento e estabilidade
3
3.1
Inspeção à chegada
3
3.2
Armazenamento à chegada
3
3.3
Armazenamento após a alíquota
3
4 Informação de risco e segurança
3
5 Requisitos de software
4
6 IVD BTS procedimento de preparação da amostra
4
6.1
Solubilização e preparação de alíquotas IVD BTS
5
6.2
Preparação da amostra de IVD BTS na placa de MALDI
5
7 Calibração do espectrômetro de massa Bruker MALDI-TOF usando IVD BTS
6
7.1
Pontos de calibração usados
6
7.2
Procedimentos de calibração
6
7.2.1 Procedimento de calibração manual
6
7.2.2 Procedimento de calibração automático
9
8 Fabricante
1
12
Uso indicado
O IVD Bacterial Test Standard é um produto de diagnóstico in-vitro que se destina à calibração e à
otimização dos espectrômetros de massa Bruker MALDI- TOF, assim como ao controle de
desempenho da identificação de microorganismos, cultivados a partir de amostras humanas.
2
Descrição do produto
O IVD Bacterial Test Standard (referido como "IVD BTS") contém um extrato de Escherichia coli DH5
alpha preparado cuidadosamente e exibe um espectro de massas adquirido com MALDI-TOF com um
perfil típico de proteínas e peptídeos. O extrato é fortalecido com duas proteínas adicionais que
alargam o limite superior do intervalo de massa abrangido pelo IVD BTS. O intervalo de massa global
abrangido pelo IVD BTS é de 3,6 a 17 kDa.
Cada tubo contém material suficiente para a preparação de aproximadamente 40 spots de placas de
MALDI.
Este kit é um dispositivo de diagnóstico in-vitro.
Informação de encomenda
Produto
Número de peça
IVD Bacterial Test Standard, 5 tubos
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IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
8290190 ou 290190
4ª revisão
Bruker
3
Inspeção, armazenamento e estabilidade
3.1
Inspeção à chegada
Verifique a embalagem do IVD BTS à chegada. Se esta se encontrar danificada, verifique os tubos. Se
os tubos estiverem danificados, o IVD BTS não deverá ser usado. Proceda à eliminação do IVD BTS
(tubos e embalagem) em conformidade com as diretrizes definidas na Folha de Dados de Segurança
do material do produto e contate o Departamento de manutenção da Bruker Daltonik GmbH
([email protected]) para uma substituição.
3.2
Armazenamento à chegada
–18°C
3.3
O IVD BTS é expedido à temperatura ambiente, mas deverá ser armazenado a
–18°C ou a uma temperatura inferior imediatamente após a chegada. A data de
expiração na embalagem é válida para o IVD BTS fechado quando armazenado
a –18°C ou temperatura inferior à chegada.
Armazenamento após a alíquota
O IVD BTS deverá ser solubilizado antes do uso. Recomendamos vivamente que o IVD BTS
dissolvido seja fracionado e congelado usando micro tubos de tampa de rosca de 0,5 mL com tampas
de rosca.
–18°C
4
O IVD BTS congelado e dissolvido poderá ser armazenado durante um período
de até 5 meses a –18°C ou temperatura inferior. Com a passagem do tempo,
poderão detectar- se produtos de oxidação. Estes produtos de oxidação não
influenciam significativamente a qualidade do espectro.
Informação de risco e segurança
Este produto não se encontra classificado de acordo com a Regulação (CE) Nº 1272/2008 e, por isso,
não está classificado de acordo com o Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e
Rotulagem de Produtos Químicos (GHS). De acordo com a experiência do fabricante, o produto não
possui qualquer efeito nocivo se for usado e manuseado de acordo com as as especificações. No
entanto, todos os materiais poderão conter perigos desconhecidos, devendo ser manuseados com
cuidado. Para maiores informações, ler o Folha de Dados de Segurança disponível em
www.bruker.com/msds.
Outros reagentes podem ser necessários para os procedimentos presentes nesta Instrução de Uso.
Leia cuidadosamente a Folha de Dados de Segurança, disponibilizada pelo fornecedor e siga as
regulamentações gerais de segurança quando manoseando reagentes químicos.
4ª revisão
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
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Bruker
5
Requisitos de software
Existem determinadas versões/combinações de software que requerem um patch de software para
suportar o IVD BTS (ver Tabela 1). Contate sua Equipe de manutenção local da Bruker Daltonics para
obter suporte à instalação.
Tabela 1
Requisitos do patch de software
Versão do software
Versão do Compass
1.4
1.3
1.2 1.1 1.0
Versão do flexControl
3.4
3.3
3.0 2.4 2.2 2.0 1.2 1.1
É necessário um patch de
software?
Não Não Sim Sim Sim Sim Sim Sim
6
IVD BTS procedimento de preparação da amostra
Nota
O procedimento a seguir não deve ser empregado caso seu protocólo faça uso dos métodos
de preparação de amostras do IVD BTS (por exemplo, IVD MALDI Biotyper SOPs).
Observações preliminares
Uma preparação de amostra pobre irá diminuir a sensibilidade e irá produzir uma resolução baixa e
uma reprodutividade de qualidade inferior. A geração de íons pela fonte de MALDI depende de uma
proporção ótima de matriz em relação ao substrato. Para melhores resultados, use soluções
preparadas recentemente e reagentes químicos com o maior grau de pureza possível (por ex.
solventes CHROMASOLV LC-MS).
Químicos e materiais necessários
l
l
l
l
IVD Matrix HCCA-portioned (referido como "IVD HCCA") (# 8290200 ou # 290200) ou Matrix
HCCA- portioned (referido como "HCCA", HCCA = α- ácido ciano- 4- hidrocinâmico)
(# 8255344 ou # 255344), que deverá ser preparado, conforme descrito nas Instruções de uso
relevantes.
Solvente padrão (acetonitrile 50%, água 47,5% e ácido trifluoroacético 2,5%), Sigma-Aldrich
(# 19182), foi testado pela Bruker Daltonik GmbH e é recomendado para solubilização do IVD
BTS.
Os micro tubos de tampa de rosca (Sarstedt, # 72.730.003) com tampas de rosca (Sarstedt,
# 65.716.002).
Placa de MALDI do tipo selecionado para seu procedimento.
Equipamento e instrumentos necessários
Centrífuga, agitador (vortex), pipetas e ponteras
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IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
4ª revisão
Bruker
6.1
Solubilização e preparação de alíquotas IVD BTS
1. Adicione 50 µL do solvente padrão à pastilha IVD BTS e dissolva pipetando para cima e para baixo
pelos menos 20 vezes à temperatura ambiente controlada.
Evite que a solução fique espumosa!
2. Incubação da solução IVD BTS durante um período de 5 minutos à temperatura ambiente e
posteriormente pipete para cima e para baixo pelos menos 20 vezes para auxiliar na
homogeinização.
3. Centrifugue a 13.000 rpm durante 2 minutos a temperatura ambiente.
4. Pipete alíquotas de 5 μL do sobrenadante para micro tubos com tampa e feche bem.
5. Armazene as alíquotas a –18°C ou temperatura inferior.
6.2
Preparação da amostra de IVD BTS na placa de MALDI
Nota
As alíquotas congeladas IVD BTS deverão ser descongeladas a uma temperatura ambiente
controlada e misturadas batendo levemente na tampa fechada do micro tubo com o dedo. Os
micro tubos de tampa de rosca deverão ser fechados e armazenados a – 18°C ou
temperatura inferior imediatamente após a preparação dos pontos de amostra do IVD BTS.
Cada alíquota de 5 µL contém material suficiente para pelo menos quatro spots de amostra.
1. Deposite 1 µL da solução IVD BTS em qualquer posição da placa de MALDI.
2. Seque o spot contendo a amostra IVD BTS a temperatura ambiente.
3. Cubra o spot contendo a amostra IVD BTS com 1 μL da solução matriz IVD HCCA ou HCCA
imediatamente após a secagem.
4. Seque o spot contendo a amostra a temperatura ambiente.
Deverá observar-se uma preparação homogênea.
4ª revisão
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
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Bruker
7
Calibração do espectrômetro de massa Bruker
MALDI-TOF usando IVD BTS
7.1
Pontos de calibração usados
Tabela 2
Pontos de calibração com um limite de tolerância de massa de ±300 ppm
Proteína
Massa de referência (massa média)
Intervalo de ±300 ppm
RL29 [M+2H]2+
3637,8 Da
3636,7 Da – 3638,8 Da
RS32 [M+H]+
5096,8 Da
5095,3 Da – 5098,3 Da
RS34 [M+H]+
5381,4 Da
5379,8 Da – 5383,0 Da
RS33met. [M+H]+
6255,4 Da
6253,5 Da – 6257,3 Da
RL29 [M+H]+
7274,5 Da
7272,3 Da – 7276,7 Da
RS19 [M+H]+
10300,1 Da
10297,0 Da – 10303,2 Da
RNAse A [M+H]+
13683,2 Da
13679,1 Da – 13687,3 Da
Mioglobina [M+H]+
16952,3 Da
16947,2 Da – 16957,4 Da
7.2
Procedimentos de calibração
Estão disponíveis os procedimentos de calibração manual e automática. O procedimento manual pode
ser usado com todas as versões do flexControl, enquanto que para o procedimento automático é
necessário o flexControl 3.3 ou uma versão mais recente.
7.2.1
Procedimento de calibração manual
1. Insira o placa MALDI preparado com a amostra IVD BTS no espectrômetro MALDI-TOF.
2. Certifique-se que o flexControl está operando.
3. Use o método padrão do flexControl MBT_ FC.par (modos Linear e Positivo) para
a medição e calibração.
4. Meça manualmente um espectro de soma de 40 disparos de laser a partir de 6 diferentes posiçoes
no spot contendo IVD BTS. Em cada posição, clique no botão Start
e no botão
Add
para registrar um total de 240 disparos de laser, exibido como
nível de energia laser deverá ser otimizado.
Opcional:
Alternativamente um espectro somatório pode ser adquirido automaticamente por:
l
clique na guia AutoXecute
selecione o método autoX MBT_AutoX a partir da lista suspensa Method.
(Figura 1)
l
clique no botão Run method on current spot
l
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.O
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
.
4ª revisão
Bruker
Figura 1
AutoXecute guia com a seleção do método MBT_AutoX para a
medição automática do espectro de soma.
Este procedimento mede automaticamente um espectro de soma.
5. Clique no botão da barra de ferramentas Single Buffer para ocultar o único espectro exibido
atualmente. Esse procedimento ativa o botão da barra de ferramentas Sum Buffer
espectro de soma medido.
6. Clique no botão da barra de ferramentas Smooth Spectrum
soma (Figura 2).
Figura 2
e exibe o
para uniformizar o espectro de
Espectro de soma uniformizado de IVD BTS
7. Clique na guia Calibration e selecione o arquivo de calibração MBT_Standard a partir da
Mass Control List lista suspensa (Figura 3).
Figura 3
Calibrationguia exibindo a Mass Control List
8. Clique no botão Automatic Assign
de calibração corretos.
4ª revisão
para efetuar a atribuição automática dos picos
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
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Bruker
9. Verifique se a atribuição automática dos picos de calibração funcionou corretamente. A lista de
picos de calibração deverá exibir que todos os picos se encontram atribuídos e que o desvio
máximo Err/ppm não é superior a ±300 ppm em nenhum dos picos (Figura 4).
Figura 4
Resultado da atribuição automática dos picos de calibração em que todos os picos
estão atribuídos e o desvio máximo Err/ppm é inferior a ±300 ppm em todos os
picos
Dependendo do resultado, proceda da seguinte forma:
l
l
l
l
l
Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300
ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi
efetuada com êxito. Avance para a etapa (12).
Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a
±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9).
Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for inferior a
±300 ppm em qualquer pico, avance para a etapa (10).
Se alguns picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a
±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9).
Se nenhum dos picos se encontrar atribuído, avance para a etapa (11).
10. Clique no botão Apply
Automatic Assign
e repita a atribuição de picos automática clicando no botão
.
Certifique-se que todos os picos se encontram atribuídos e se o desvio máximo Err/ppm é inferior
a ±300 ppm em todos os picos.
l
l
Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300
ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi
efetuada com êxito. Avance para a etapa (12).
Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a
±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9).
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IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
4ª revisão
Bruker
11. Efetue a seleção manual do pico a m/z 6255.4 Da clicando do lado esquerdo do pico no espectro. A
linha vertical junto ao pico deverá passar de vermelho a verde, se a atribuição de pico for efetuada
com êxito (os dados correspondentes são inseridos na lista de picos de calibração). Clique no
botão Apply
Assign
e repita a atribuição de pico automática clicando no botão Automatic
.
Certifique-se que todos os picos se encontram atribuídos e se o desvio máximo Err/ppm é inferior
a ±300 ppm em todos os picos.
l
l
Se todos os picos se encontrarem atribuídos e o desvio máximo Err/ppm for inferior a ±300
ppm em todos os picos, tal significa que a atribuição automática dos picos de calibração foi
efetuada com êxito. Avance para a etapa (12).
Se todos os picos se encontrarem atribuídos, mas o desvio máximo Err/ppm for superior a
±300 ppm em qualquer pico, repita as etapas (4) a (9).
12. Depois de todos os picos terem sido atribuídos automaticamente com um desvio máximo Err/ppm
inferior a ±300 ppm em todos os picos, clique no botão Apply
.
13. Salve os novos valores de calibração no método flexControl (MBT_FC.par). Ao clicar no botão
da barra de ferramentas Save method as
abrirá a caixa de diálogo Save flexControl
Method As. Clique no botão Save. Confirme a substituição do arquivo (MBT_FC.par ) clicando
no botão Yes na caixa de diálogo de confirmação (Figura 5).
Figura 5
Caixa de diálogo de confirmação na substituição do arquivo do método
especificado
7.2.2
Procedimento de calibração automático
Nota
É necessária a versão do flexControl 3.3 ou uma versão mais recente para o procedimento
de calibração automático.
1. Insira a placa de MALDI preparado com a amostra IVD BTS no espectrômetro de massa MALDITOF.
2. Certifique-se que o flexControl está operando.
3. Use o método padrão do flexControl MBT_FC.par (modos Linear e Positivo) para a medição e
calibração.
4ª revisão
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
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Bruker
4. Selecione Tools > Method Calibration Parameters ( Figura 6 ) para definir ou verificar as
definições de calibração do método flexControl.
Nota
Os parâmetros de definição de calibração são necessários somente na primeira
calibração (inicial). Para calibrações posteriores, somente a seleção do método autoX
(MBT_AutoX) deverá ser verificada.
Figura 6
Method Calibration Parameters comando do menu Tools
5. Insira ou verifique as definições dos parâmetros de calibração automática exibidos na Figura 7. Em
seguida, clique no botão OK.
Figura 7
Página 10 de 12
Caixa de diálogo Edit Auto Calibration Parameters.
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
4ª revisão
Bruker
6. Na guia Calibration (Figura 3), certifique-se que o parâmetro Peak Assignment Tolerance está
definido para o valor máximo de 1000 ppm (Figura 8).
Figura 8
Parâmetro Peak Assignment Tolerance
7. Para dar início a um procedimento de calibração, clique no botão Calibrate
.
É obtido automaticamente um espectro de soma, somando os disparos de laser de 6 x 40 de
diferentes posições no spot contendo o IVD BTS e a calibração é automaticamente concluída.
Uma caixa de diálogo de informação da calibração abre após uma calibração efetuada com êxito
(Figura 9). Clique no botão OK para concluir a calibração.
Figura 9
Caixa de diálogo de informação da calibração
8. Se a calibração falhou, repita o procedimento de calibração automático, etapas (4) a (7) ou siga o
procedimento de calibração manual descrito na seção 7.2.1.
4ª revisão
IVD Bacterial Test Standard – Instruções de uso
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Bruker
8
Fabricante
Bruker Daltonik GmbH
Fahrenheitstraße 4
28359 Bremen
Alemanha
Suporte
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Telefone:
Fax:
[email protected]
+49 (421) 2205-1401
+49 (421) 2205-106
Informações de Vendas
E-mail:
Telefone:
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+49 (421) 2205-0
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# 8290190 ou 290190
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