Image-Pro® Plus –
Medições Histólógicas
mais comuns
Felipe Welter Langer – Acadêmico de Medicina da
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, 13 de dezembro de 2012
Aspectos gerais da medição
histológica
• Parte importantíssima do processo de análise histológica
• Hardware utilizado (mouse, notebook, precisão)
• Pressa x qualidade de medição
• Vários parâmetros passíveis de análise (área, comprimento,
número de células, espessura epitelial, ...)
•Inúmeros softwares disponíveis
Image-Pro® Plus
•Calibragem (4x, 10x, 40x)
•Medição de área
•Medição de comprimento
•Contagem celular manual
•Exportação dos dados para Excel
Princípios gerais de operação do
software
•Comparação: todas as medidas são feitas com base em
uma calibragem inicial, a qual existe para que o número
de pixels que selecionarmos tenha uma correspondência
morfométrica (milímetros, micrômetros, ...)
•Calibragem é feita usando-se fotografia de régua
milimetrada (mostrada a seguir)
Princípios gerais de operação do
software
* Essa será nossa
imagem padrão para
calibragem, utilizada
em diferentes
aumentos conforme
a necessidade!
1 mm
•Corresponde a uma
fotografia de régua
milimetrada
•1 mm = 1000 µm
Calibragem no Image-Pro Plus
•Uma calibragem necessária para cada aumento (4x, 10x, 40x)
•Para cada aumento, uma imagem de régua a ser aberta (mesma imagem,
diferentes aumentos)
1 mm
0,9 mm
4x
10x
0,2 mm
40x
Calibragem no Image-Pro Plus
1º passo: abrir programa
Calibragem no Image-Pro Plus
2º passo: abrir imagem da régua no aumento selecionado (no exemplo, 4x)
File -> Open -> Selecionar imagem na pasta correspondente
Calibragem no Image-Pro Plus
3º passo: ir para “Measure -> Calibration -> Spatial”
Calibragem no Image-Pro Plus
4º passo: selecionar a opção “New”
Calibragem no Image-Pro Plus
5º passo: Nomear e alterar unidade para micrômetros
Calibragem no Image-Pro Plus
6º passo: Clicar em “Image” para selecionar o trecho da imagem a ser medido
Calibragem no Image-Pro Plus
7º passo: Selecionar o trecho a ser medido e inserir a medida correspondente EM
MICRÔMETROS
* Para maior precisão, ampliar imagem da régua
Calibragem no Image-Pro Plus
•Para aumentos de 10x e 40x, o processo é o mesmo, só atentando
para alterar valor de micrômetros na hora de salvar a calibragem!
•Uma vez feitas as calibragens, é possível iniciar as medidas.
Medidas no Image-Pro Plus
Medidas Abordadas:
Comprimento
Área
Contagem celular
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
• Abrir a imagem a ser medida (File -> Open ou ctrl + O)
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
* No ícone “Spatial Calibration”, selecionar aumento em que foto foi tirada (após
calibrado o programa)
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
* Clicar em “Manual Measurements” e selecionar “Create click and drag feature”
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
*Clicar na imagem e arrastar até atingir ponto desejado
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
•
Processo se repete para as próximas medições, sendo que
as novas medidas aparecerão abaixo da primeira (L1) na
aba “Features”
•
Para exportar dados, clicar na aba “Input/Output” (a ser
abordado posteriormente)
Medidas no Image-Pro Plus
2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)
•
Mesmos procedimentos iniciais, modificando-se a opção selecionada da aba
“Features” (Create polygon feature)
Medidas no Image-Pro Plus
2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)
•
Há dois modos de se medir área através da ferramenta
selecionada:
a) Seleção com um único clique contínuo (arrastando-se o
mouse sem soltá-lo)
b) Seleção clicando-se várias vezes em torno da imagem
•
Em ambas, após o fim da seleção, clica-se com o botão
direito do mouse para concluir a área a ser medida
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Na maior parte das vezes, usa-se uma “Grid Mask” para
realizar as medições, que é conjunto de linhas, pontos ou
formas aplicado sobre a imagem original
•
Diferentes Grid Masks podem ser utilizadas, a critério da
preferência do pesquisador
•
Objetivo do uso de Grid Masks: definir, de forma
aleatória, áreas cujos núcleos serão contados
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Para aplicar: Process -> Grid Mask
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
•
Exemplo de Grid Mask para contagem de núcleos: distribuição de
retângulos em 4x4
Após abrir janela de Grid Mask, selecionar “CircConc.grd” e definir
tamanho adequado em “Spacing” na aba Grid
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Clicar em Apply e não fechar a janela (caso contrário, grid
desaparecerá)
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Outros exemplos:
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Outros exemplos:
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
•
Para não “se perder” na contagem: usar a “Create polygon feature”
(mesma da medição de área) e clicar sobre cada núcleo contado
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
•
Manual measurements -> aba “Input/Output” -> Selecionar “Data to
ouput: Features” e “Output data to: File...” e clicar em “Export now”
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
•
Após selecionar a pasta de destino e salvar, o arquivo aparecerá da
seguinte maneira:
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
• Como se vê, os dados estão desalinhados, e somente um
deles nos interessa, a área
• Logo, copiaremos somente o valor da área e colaremos
em uma tabela do Excel
• O processo se repete para cada medição feita
• DETALHE IMPORTANTE: os pontos dos números
precisam ser trocados para vírgulas!
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
Muito Obrigado pela atenção!
Dúvidas:
[email protected]
Santa Maria, 13 de dezembro de 2012