Caracterização de um fator de liberação de histamina do veneno
de aranha-marrom (Loxosceles intermedia)
Lucas Pedrosa da Silva - Bolsista PIBIC Fundação Araucária
Orientadores : Silvio Sanches Veiga, Olga Meiri Chaim, Marianna Bóia Ferreira.
Introdução / Objetivos
Aranhas do gênero Loxosceles (aranhasmarrons) produzem veneno composto por
diversas
toxinas,
responsáveis
pelo
envenenamento conhecido como loxoscelismo.
Uma proteína da família TCTP foi identificada
nesta mistura, e seu papel ainda não está bem
esclarecido, porém na literatura há trabalhos
que descrevem seu papel biológico em outros
organismos, como um fator liberador de
histamina (HRF), sendo assim o objetivo deste
trabalho e a caracterização biológica de um
possível fator de liberação de histamina da
família TCTP obtido a partir de biblioteca de
cDNA da glândula de veneno de aranha-marrom
(Loxosceles intermedia).
Resultados/Discussão
A expressão recombinante mostrou uma banda intensa de
~25 kDa, sendo a purificação em condições híbridas mais
eficiente que em condições nativas.
Método
- Expressão foi realizada em cepa BL21 DR PlysS
por 4 horas a 23 ºC, com indutor 0,01mM IPTG e
a purificação se deu em condições híbridas.
- A expressão foi analisada em SDS-PAGE e em
Western Blotting.
- Cultivo Celular RBL-2H3
- Dosagem de b-hexosamina.
- Ensaio de influxo de cálcio.
A liberação de b-hexosaminidase é tempo e concentração
depentente, indicando que a LiRecTCTP age como um fator
de liberação de histamina.
LiRecTCTP não induz o influxo de cálcio intracelular podendo
isso indicar que a degranulação seja independente de IgE.
Referencias:
MEKORI,Y.A.; METCALFE,D.D. Mast cells in innate immunity. Immunological reviews, v.173, p.
131-140, 2000.
Conclusões
Ao fim dos experimentos, concluímos que a proteína da
família das TCTP’s contida no veneno da Loxoscelis intermedia
é um fator liberador de histamina (HRF), porém o seu
mecanismo de liberação ainda é pouco entendido, tornando
interessante o avanço no estudo sobre essa toxina.