Biotecnología Universidad Nacional de Moquegua “Año del bicentenario del Perú 200 años de independencia “ Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental TEMA: ANALISIS DE SECUENCIAS DEL GEN 16S Presentado por: Joshelin Shantal Alarcon Mamani Docente: Prof. Dr. Hebert H. Soto Gonzales Ciclo: VII Fecha: 18/09/2021 ILO - Perú 2021 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental ÍNDICE I.INTRODUCION ......................................................................................................................................... 3 II.OBJETIVOS .............................................................................................................................................. 5 2.1. OBJETIVO GENERAL ..................................................................................................................... 5 2.2. OBJETIVO ESPECIFICO ................................................................................................................. 5 III.MATERIALES Y METODOS ................................................................................................................ 6 3.1. MATERIALES .................................................................................................................................. 6 3.2. METODOS ........................................................................................................................................ 8 IV.RESULTADOS......................................................................................................................................15 V.CONCLUCIONES ..................................................................................................................................19 VI.BIBLIOGRAFIA ...................................................................................................................................20 VII.ANEXOS ..............................................................................................................................................21 pág. 2 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental I.INTRODUCION La Bioinformática ha demostrado obtener mejoras en la investigación en áreas afines. Biólogos usan programas para alinear secuencias y crear estructuras, que son de importancia para analizar los resultados dados por dichos programas de software. Para identificar una muestra, debe hacerse una extracción de ADN, y una vez obtenidas sus secuencias, efectuar el análisis con ayuda de programas como bioEdit, genDoc, Mega, Autodimer, Dnasp5 (para alinear y analizar secuencias de ADN), PAUP, Mr. Bayes, Beast y Dambe (para la creación de árboles filogenéticos). Luego, los resultados obtenidos se analizan. Alineamiento de secuencias de ADN Según el modelo propuesto por Watson y Crick, la molécula de ADN está compuesta por dos hebras helicoidales (Torres, 2007), cada una siguiendo una secuencia de nucleótidos {A;T;C;G}, y formando parejas de {C;G} y {A;T} entre las dos hélices (Ferrández, Hernández & Pastor, 2003). Una vez extraído ADN de una muestra, se obtienen dos secuencias de ADN (forward y reverse). Deben guardarse cada una en un documento con formato FASTA. Se debe realizar un BLAST a la secuencia forward, que consiste en hacer una búsqueda en una base de datos de secuencias de ADN, para encontrar datos similares y verificar si el amplificador es correcto (Altschul, Madden, Schäffer1, Zhang, Zhang2, Miller2 & Lipman, 1997). Bioedit Bioedit es un editor de alineamiento de secuencias, sumamente amigable con el usuario (Hall, 1999). Con este programa, se realizaron tres pasos importantes: reverso complementario, algoritmo Smith-Waterman y algoritmo Needleman-Wunsch. (Madrigal-Valverde, 2017) En la ventana principal de BioEdit, el alineamiento de nuestras secuencias, por defecto cada aminoácido es resaltado en un color diferente, este esquema de colores puede ser cambiado en cualquier momento mediante la utilización de las diferentes opciones en la barra de herramientas. (Calvo G., García M., & Rojas M., s.f.) NCBI El Centro Nacional para la Información Biotecnológica (NCBI) es parte de la Biblioteca Nacional de Medicina de Estados Unidos, una rama de los Institutos Nacionales de Salud. Está localizado en Bethesda (Maryland) y fue fundado el 4 de noviembre de 1988 con la misión de ser una importante fuente de información de biología molecular. Almacena y constantemente actualiza la información referente a secuencias genómicas en GenBank, un índice de artículos pág. 3 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental científicos referentes a biomedicina, biotecnología, bioquímica, genética y genómica en PubMed, una recopilación de enfermedades genéticas humanas en OMIM, además de otros datos biotecnológicos de relevancia en diversas bases de datos. El NCBI ofrece además algunas herramientas bioinformáticas para el análisis de secuencias de ADN, ARN y proteínas, siendo BLAST una de las más usadas. NCBI alberga genoma secuenciado en GenBank, y un índice de los artículos biomédicos de investigación en PubMed Central y PubMed, así como otra información relevante a la biotecnología . Todas estas bases de datos son accesibles en línea con el motor de búsqueda de Entrez. El NCBI dirigido por David Lipman, uno de los autores originales del programa de alineación de secuencias BLAST y una figura extensamente respetada en bioinformática. Desde 1992 , NCBI ha crecido para proporcionar otras bases de datos además de GenBank. NCBI proporciona Herencia Mendeliana en el Hombre en línea,4 la Molecular Modeling Database (estructuras 3D de proteínas), dbSNP (una base de datos de polimorfismos de nucleótidos simples, la Unique Human Gene Sequence Collection, un mapa de genes del genoma humano, un buscador taxonómico, y se coordina con el Instituto Nacional del Cáncer para proporcionar el Cancer Genome Anatomy Project. El NCBI asigna un identificador único (número de identificación de la taxonomía) a cada especie de organismo. Herramienta básica de búsqueda de alineación local (BLAST) BLAST es un algoritmo utilizado para calcular la similitud de secuencia entre secuencias biológicas como secuencias de nucleótidos de ADN y secuencias de aminoácidos de proteínas. BLAST es una herramienta poderosa para encontrar secuencias similares a la secuencia de consulta dentro del mismo organismo o en diferentes organismos( alineamiento de secuencias). Busca la secuencia de consulta en las bases de datos y servidores de NCBI y envía los resultados al navegador de la persona en el formato elegido. Las secuencias de entrada al BLAST están principalmente en formato FASTA o Genbank, mientras que la salida se puede entregar en una variedad de formatos como HTML, formato XML y texto sin formato. HTML es el formato de salida predeterminado para la página web de NCBI. Los resultados de NCBI-BLAST se presentan en formato gráfico con todos los aciertos encontrados, una tabla con identificadores de secuencia para los aciertos que tienen datos relacionados con la puntuación, junto con las alineaciones para pág. 4 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental la secuencia de interés y los aciertos recibidos con puntuaciones BLAST análogas para estos. (Centro Nacional para la Información Biotecnológica, s.f.) II.OBJETIVOS 2.1. OBJETIVO GENERAL Analizar la secuenciación del Gen 16S mediante la aplicación de software libre Bioedit. 2.2. OBJETIVO ESPECIFICO Revisar los fundamentos de las técnicas de secuenciación de ácidos nucleicos. Efectuar el análisis y la selección de electroferogramas automatizados de secuenciación mediante la aplicación de software libre BIOEDIT en específico el estudio del gen ribosomal 16S. pág. 5 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental III.MATERIALES Y METODOS 3.1. MATERIALES LAPTOP Un computador portátil o laptop es un equipo personal que puede ser transportado fácilmente. Muchos de ellos están diseñados para soportar software y archivos igual de robustos a los que procesa un computador de escritorio. Dado que los portátiles se han diseñado para ser transportados fácilmente de un Figura: 1 Laptop Fuente: https://www.hp.com/us-en/shop/pdp/hp-laptop- sitio a otro. (Computadores portátiles o laptops, s.f.) pc-15-dw3000-(1a3y1av) NCBI Figura: 2 Centro Nacional para la información Biotecnológica Fuente: https://update.lib.berkeley.edu/2016/01/22/ncbibioinformatics-tools-an-introduction-2/ BLAST NCBI.- Almacena y constantemente actualiza la información referente a secuencias genómicas en GenBank, un índice de artículos científicos referentes a biomedicina, biotecnología, bioquímica, gené tica y genómica en PubMed, una recopilación de enfermedades genéticas humanas en OMIM, además de otros datos biotecnológicos de relevancia en diversas bases de datos. (Centro Nacional para la Información Biotecnológica, s.f.) BLAST. - El programa es capaz de comparar una secuencia problema. Por lo general, cuando una nueva secuencia es obtenida, se usa el BLAST para compararla con otras secuencias que han sido previamente caracterizadas, para así poder inferir su función. (BLAST, s.f.) Figura: 3 BLAST (Basic Local Alignment Search Tool) Fuente: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi EXCEL Excel es un programa computacional incluido en el paquete Microsoft Office, y sirve para la creación, manejo y modificación de hojas de cálculo. Se puede utilizar en varios dispositivos y sistemas operativos. (Microsoft Office Excel, s.f.) Figura: 4 Excel Fuente:https://es.wikipedia.org/wiki/Microsoft_Excel pág. 6 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental WORD Figura: 5 Word Fuente: https://es.wikipedia.org/wiki/Microsoft_Word BIOEDIT Microsoft Word Es un software informático procesador de texto, uno de los más utilizados a la hora de trabajar con documentos digitales, que nació de la mano de IBM en 1981. El Word automatizó y mejoró la tarea de escribir manuscritos ya que permitió revisar las veces necesarias lo escrito, para editarlo y reformularlo antes de la etapa de impresión. (Word, s.f.) Bioedit es un programa gratuito para edición de alineamientos y análisis de secuencias que funciona únicamente sobre ambiente MS/Windows. Es, sin lugar a duda, uno de los progrmas más conocidos para edición de secuencias para dicho sistema operativo. (Pinzón V., 2006) Figura: 6 Bioedit Fuente: https://filehonor.com/bioedit/ ARCHIVO DE SECUENCIACION DEL GEN 16S Son tres archivos que contienen una secuencia del Gen 16S para hacer analizada en programa gratuito del Bioedith y el NCBI y también se utilizara el BLAST el programa es capaz de comparar una secuencia problema. Figura: 7 Archivo de secuenciación del Gen 16S Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani Joshelin BUSCADOR GOOGLE Google es quizás uno de los aspectos más básicos a la hora de hablar de Internet, aunque existen otros buscadores que tienen un buen nivel de efectividad, Google se ha convertido en la referencia más importante en buscadores. (Qué es Google, s.f.) Figura: 8 Buscador Google Fuente: https://www.xataka.com/basics/25-codigosfunciones-trucos-para-buscar-google-exprimiendo-almaximo-su-motor-busqueda pág. 7 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental BLOC DE NOTAS El Bloc de notas nos permite hacer tareas sencillas de edición de texto como: Escribir, copiar, pegar, cortar texto, buscar y remplazar texto; es decir, lo que normalmente hacemos en el Word de Office o WordPad. Pero el Bloc de notas se diferencia de los otros editores porque permite abrir de manera rápida los archivos de texto, que además ocupan poco espacio. (Qué es el bloc de notas y para que sirve, 2019) Figura: 9 Bloc de Notas Fuente: https://www.formacionprofesional.info/el-bloc-denotas-de-windows-10/ 3.2. METODOS PRIMER PASO. – Se abre el Excel y seguidamente se realiza un cuadro donde se coloca en una columna el código, en la siguiente la calidad, donde se hace tres divisiones si es buena, mala, regular, y en la siguiente columna se coloca el tamaño de secuencia y el siguiente el organismo (N.C.) y por último en la siguiente columna se coloca el % de identidad. Figura: 10 El cuadro realizo en el Excel Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal SEGUNDO PASO. – Se abre el archivo donde se tiene las secuenciaciones y se identifica el nombre el cual se copia y pega en el cuadro de Excel en la columna pág. 8 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental código al hacer click en el primer nombre se abre automáticamente el programa BIOEDIT sirve para la edición de alineamientos y análisis de secuencias que funciona únicamente sobre ambiente MS/Windows. Para ello lo tienes que tener descargado en tu laptop o computadora. Figura: 11 Se observa el programa BIOEDIT con la secuenciación para analizar Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal TERCER PASO. – Una vez de analizar la secuenciación en el BIOEDIT se coloca en el cuadro Excel la calidad se marca con una X si es buena mala o regular seguidamente en el programa BIOEDIT hacemos click donde dice File y colocamos la opción que dice Export as Fasta Saldrá una ventana Mediana donde bueno se creara una carpeta para guardar la secuenciación y se guardara con su nombre (código) ya que este procedimiento se hará con las demás secuencias que ay en el archivo. Figura: 12 Se observa el procedimiento de guardar en Export as Fasta Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal pág. 9 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental Figura: 13 Podemos ver la ventana que se abrió para guardar en la carpeta con el nombre de la secuencia. Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal CUARTO PASO. – Ir al explorador de archivos y buscar nuestra carpeta donde guardamos la secuencia seguidamente hacer en el nombre de la secuencia guardada un doble clik izquierdo y aparecerá como lo queremos abrir el archivo y lo abrimos en block de notas y aparecerá una ventana mediana donde se verá una secuenciación como podemos observar en la figura (14). Figura: 14 Se observa que se abrió la secuencia guardada en block de notas Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal pág. 10 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental Figura: 15 Se observa la secuenciación en el block de notas Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal QUINTO PASO. – Se pondrá en el navegador Google la palabra NCBI y seleccionaremos click donde dice BLAST aparecerá una ventana y le daremos click donde dice Nucleotide BLAST seguidamente aparecerá una ventana que se muestra en la figura 17. Figura: 16 Aquí se observa la opción del BLAST a la que se le dará doble click Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal pág. 11 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental Figura: 17 Esta es la ventana donde le aremos click al Nucleotide Blast Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Figura: 18 Aquí se muestra el BLAST donde se hace la consulta Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal SEXTO PASO. – Seguidamente se abre la ventana del block de notas que contiene la secuencia y se copia todo y abrimos la ventana del Blast y en el recuadro donde dice ingresar secuencia consulta observamos un recuadro abajo ahí pegamos la secuencia seguidamente abajo vamos a observar donde dice seleccionar el programa le damos en la última casilla que dice Somewhat similar sequences (blastn) luego más abajo le damos un click en Show results in a new window y finalmente presionamos BLAST. pág. 12 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental Figura: 19 Aquí podemos que se pegó la secuencia en ese recuadro de color piel Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Figura: 20 se observa a que opción le daremos clcik Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Figura: 21 Esta en la ventana que aparece cuando presionas BLAST Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal SEPTIMO PASO. – Una vez que haya cargado aparecerá la siguiente ventana donde podemos observar la longitud de la consulta a su costa un numero ese número colocaremos en nuestra tabla de Excel en algunas secuencias aparecerá que no se encontró ninguna similitud significativa. Pero en otras secuencias pág. 13 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental aparecerá el organismo (N.C.) y el porcentaje de identidad lo cual se colocará en nuestra de Excel que podemos observas en la figura 22. Figura: 22 Esta aparece cuando el Blast ha realizado su búsqueda se observa todos los datos correspondientes Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Figura: 23 Podemos Identificar el organismo y el % de identidad Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal OCTAVO PASO. - Aquí podemos observar cómo queda nuestro cuadro de Excel los pasos anteriores se repetirán sucesivamente para todas las secuencias. Figura: 24 Podemos observar el cuadro de Excel Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal pág. 14 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental IV.RESULTADOS Tabla 1: Aquí podemos observar el primer Archivo al que se realizó el análisis TAMAÑO DE LA SECUENCIA ORGANISMO (N.C.) % IDENTIDAD 978 Negativo X X 908 Herbaspirillum seropedicae 88,73% X 1007 Pseudomonas putida 83,21% X 925 Bacteria no cultivada 86,14% X 1163 Negativo X X 944 Negativo X 957 Leclercia adecarboxylata 85.62% 939 1020 993 Klebsiella oxytoca Negativo Negativo 84.01% X X X 963 Enterobacter sp. NA10140 92.53% X 965 Enterobacter sp. NA10140 92.51% X 944 979 950 Phytobacter diazotrophicus Negativo Negativo 86.91% X X X 928 uncultured bacterium 90.18% X 963 uncultured bacterium 85.40% X 983 Phytobacter diazotrophicus 89.23% 986 Pseudomonas putida 81,82% 926 Negativo X 932 Paraburkholderia silvatlantica 79,97% CALIDAD CODIGO BUENA MALA REGULAR DIVERSOS_A07_1H_01.ab1 DIVERSOS_A08_9H_02.ab1 DIVERSOS_A09_1_01.ab1 DIVERSOS_A10_9_02.ab1 DIVERSOS-_A11_17_01 DIVERSOS_B07_2H_03 DIVERSOS_B08_10H_04 DIVERSOS-_B09_2_03 DIVERSOS-_B10_10_04 DIVERSOS-_B11_18_03 DIVERSOS_C07_3H_05 DIVERSOS_C08_11H_06 DIVERSOS-_C09_3_05 DIVERSOS-_C10_11_06 DIVERSOS-_C11_19_05 DIVERSOS_D07_4H_07 DIVERSOS_D08_12H_08 DIVERSOS-_D09_4_07 DIVERSOS_D10_12_08.ab1 DIVERSOS_E07_5H_09.ab1 DIVERSOS_E08_13H_10.ab1 X X X X X X X X X X pág. 15 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental DIVERSOS_E09_5_09.ab1 DIVERSOS_E10_13_10.ab1 DIVERSOS_F07_6H_11.ab1 DIVERSOS_F09_6_11.ab1 DIVERSOS_F10_14_12.ab1 DIVERSOS_G07_7H_13.ab1 DIVERSOS_G09_7_13.ab1 DIVERSOS_G10_15_14.ab1 DIVERSOS_H07_8H_15.ab1 DIVERSOS_H09_8_15.ab1 DIVERSOS_H10_16_16.ab1 X 981 Enterobacter ludwigii 88,43% X 1057 bacteria no cultivada 67,47% X 915 Enterobacter ludwigii 95,89% X 956 Klebsiella sp. 81,75% 1204 Negativo X X 931 Enterobacter sp. ICBR 189 91,07% X 935 Enterobacter sp. 73,78% X 950 Enterobacter asburiae 93.40% X 1101 Negativo X X 1262 Negativo X 948 Enterobacter sp. IICDBZ9 84,42% X X Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Como podemos observar en esta secunsiación del archivo Hernan3 la amyoria de las secuencias fueron buenas con un tamaño de secuenciacion de 925 para adelante y el organismo son bacterias y un porcentaje de identidad entre los 80 y 90 % y uno que tiene una identidad de 67, 47% se realizo el analisis de estas secuencias usando el programa BIOEDIT y el NCBI utilizando el BLAST para hacer la consulta de cada secuencia y se obtuvo los resultados de secuencias similares por que el BLAST encontro en su GenBank dentro del mismo organismo o en diferentes organismos( alineamiento de secuencias). Tabla 2 Aquí observamos la tabla del segundo archivo CALIDAD CODIGO BUENA 15-456NZ_G02_14.ab1 14-483H_F02_12.ab1 X X TAMAÑO DE LA SECUENCIA ORGANISMO % IDENTIDAD 877 947 Klebsiella variicola Enterobacter 86,71% 86,09% MALA REGULAR pág. 16 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental 13-483NZ_E02_10.ab1 12-526YZ_D02_08.ab1 11-375NZ_C02_06.ab1 10-88H_B02_04.ab1 09-419YZ_A02_02.ab1 08-375H_H01_15.ab1 07-419Y1_G01_13.ab1 06-526Y1_F01_11.ab1 X X X X 891 880 976 971 896 1002 980 989 05-88AZ_E01_09.ab1 X 839 04-88NZ_D01_07.ab1 X 872 03-419AZ_C01_05.ab1 02-526NZ_B01_03.ab1 01-419NZ_A01_01.ab1 X X 895 877 950 X X X X X Enterobacter sp Klebsiella Negativo Negativo Bacteria no cultivada Negativo Enterobacter Klebsiella pneumoniae Klebsiella pneumoniae cepa Klebsiella pneuonia cepa Klebsiella grimontii Klebsiella variicola Negativo 89,55% 95,25% 96,45% 95,91% 98,61% 93,07% 94,39% 97,35% 86,71% - Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Esto es el segundo archivo (SeqsHerbert.zip) el cual se realizó el análisis aquí podemos observar que la mayoría de las secuencias fueron buenas hubo como 4 que estuvieron malas y el tamaño de la secuenciación mas baja fue 839 y la mas alta fue 1002 y aquí también se realizo la consulta para cada secuencia en el programa de NCBI utilizando el Nucleotide BLAST el cual podemos observar que los organismos son bacterias y en el porcentaje de identidad esta en un promedio de 80 y 90 % no llegan al 100% se pudo obtener esos resultados realizando el análisis a este archivo. Tabla 3 Aquí observamos la tabla del tercer archivo CALIDAD DE LA SECUENCIA CODIGO TAMAÑO DE LA SECUENCIA ORGANISMO %IDENTIDAD BUENA MALA REGULAR user_12set2007_01_A03_01.ab1 user_12set2007_02_B03_03.ab1 user_12set2007_03_C03_05.ab1 user_12set2007_04_D03_07.ab1 user_12set2007_05_E03_09.ab1 user_12set2007_06_F03_11.ab1 X 942 X X X X X 1024 997 983 921 1347 Kosakonia radicinci Negativo Klebsiella variicola Kosakonia oryzae Enterobacter sp. Negativo 81.90% 75.12% 81.30% 89.23% - pág. 17 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental user_12set2007_07_G03_13.ab1 user_12set2007_08_H03_15.ab1 user_12set2007_09_A04_02.ab1 X X X user_12set2007_10_B04_04.ab1 user_12set2007_11_C04_06.ab1 user_12set2007_12_D04_08.ab1 user_12set2007_13_E04_10.ab1 user_12set2007_14_F04_12.ab1 user_12set2007_15_G04_14.ab1 user_12set2007_16_H04_16.ab1 1185 991 1163 X X X X X usuarios_12set2007_1Y2_F04_12.ab1 X usuarios_12set2007_2Y2_G04_14.ab1 X X X X X X X 866 Negativo 964 959 860 928 977 944 959 X X usuarios_12set2007_3Y2_H04_16.ab1 usuarios_12set2007_17_A04_02.ab1 usuarios_12set2007_18_B04_04.ab1 usuarios_12set2007_19_C04_06.ab1 usuarios_12set2007_20_D04_08.ab1 usuarios_12set2007_21_E04_10.ab1 1005 1006 1056 951 1116 949 Negativo Negativo Negativo uncultured Treponema clone RsDiSp8 Negativo Negativo Negativo Pantoea deleyi Klebsiella variicola Negativo proteobacterias no cultivadas Herbaspirillum seropedicae Negativo Negativo Enterobacter sp. Negativo Negativo 984 77.06% 94.92% 89.38% 81.62% 81.20% 79.83% - Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal Aquí podemos observar el tercer archivo (SeqsHerbert_9.zip) el cual se realizó el análisis las secuencias la gran mayoría fueron malas y algunas buenas y otras regulares con un gran número de tamaño de secuencia que el mas bajo fue el de 866 y el mas alto es el que tiene 1185 y los organismos como la gran mayoría fue mala no se encontró las que fueron buenas y regulares el programa que se utilizo nos dio como resultado organismos similares y ellos son bacterias las cuales alcanzaron un porcentaje de identidad 81.20% el mas bajo y el mas alto fue de 94.92% nos se llego a un 100% de identidad. pág. 18 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental V.CONCLUCIONES Es importante conocer esta aplicación software libre BIOEDIT ya que con este programa podemos realizar alineamientos y análisis de secuencias saber de este programa es de mucha importancia nos ayudara mucho. Saber del programa BLAST el cual podemos consultar la secuencia y nos mostrara los resultados encontrados en su GenBank y podemos realizar muchas consultas de secuencia nos va ayudar en futuros trabajos conocer el manejo y utilizaciones de este programa. Al realizar este informe se dio a conocer los materiales que fueron utilizados para realizar el análisis de la secuenciación del Gen 16S como también se dio conocer el método sé que realizo para el análisis de esta secuenciación del Gen 16S y como se utilizó los programas del BIOEDIT y el Nucleotide BLAST. En el análisis que se realizó había secuencias que fueron buenas otras que fueron malas y otras regulares. pág. 19 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental VI.BIBLIOGRAFÍA (10 de Enero de 2019). Recuperado el 17 de Setiembre de 2021, de https://www.webespacio.com/bloc-notas-notepad/ Calvo G., J., García M., J., & Rojas M., N. (s.f.). SCRIBD. Recuperado el 14 de Setiembre de 2021, de SCRIBD: https://es.scribd.com/doc/147681010/Alineamiento-de-Secuenciasde-Dna-Bioedit concepto. (s.f.). Recuperado el 15 de Setiembre de 2021, de concepto: https://concepto.de/word/ EUROINNOVA. (s.f.). Recuperado el 2021 de Setiembre de 15, de EUROINNOVA: https://www.euroinnova.mx/que-es-excel-para-que-sirve-y-como-funciona expertoseo. (s.f.). Recuperado el 15 de Setiembre de 2021, de expertoseo: https://www.expertoseo.com/que-es/google/ GCFGlobal. (s.f.). Recuperado el 2021 de setiembre de 2021, de GCFGlobal: https://edu.gcfglobal.org/es/informatica-basica/computadores-portatiles-o-laptops/1/ Madrigal-Valverde, K. (2017). scielo. Recuperado el Setiembre de Setiembre de 2021, de scielo: https://www.scielo.sa.cr/pdf/tem/v30s1/0379-3982-tem-30-s1-30.pdf Pinzón V., A. (Julio de 2006). bioinf. Recuperado el 15 de Setiembre de 2021, de bioinf: http://bioinf.ibun.unal.edu.co/documentos/multAlignmentCBIB.pdf WIKIPEDIA. (s.f.). Recuperado el 14 de Setiembre de 2021, de WIKIPEDIA: https://es.wikipedia.org/wiki/Centro_Nacional_para_la_Informaci%C3%B3n_Biotecnol %C3%B3gica WIKIPEDIA. (s.f.). Recuperado el 15 de Setiembre de 2021, de WIKIPEDIA: https://es.wikipedia.org/wiki/BLAST pág. 20 UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUGUA Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental VII.ANEXOS Figura: 25 Se observa la página BLAST Fuente: https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi Figura: 26 Se observa el programa BIOEDIT Fuente: Elaboración propia Alarcon Mamani, Joshelin Shantal pág. 21