Expressão de miRNAs em pênfigo foliáceo.
Simone Lenis Fachin
Pibic/Fundação Araucária
Maria Luiza Petzl-Erler
INTRODUÇÃO E OBJETIVOS
MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não
codificadores que regulam a expressão gênica em
nível pós-transcricional. Muitas evidências sugerem
que certos miRNAs são cruciais para as funções das
células do sistema imune. Desta forma, é possível
que alterações no perfil de expressão destes miRNAs
estejam
envolvidas
no
desenvolvimento
e
manifestação da doença autoimune pênfigo foliáceo
(PF). O objetivo deste estudo é investigar o perfil de
expressão de um conjunto de miRNAs circulantes em
pacientes de PF em diferentes estágios da doença e
em controles, a fim de verificar se há uma associação
entre certos miRNAs e o PF.
MATERIAIS E MÉTODOS
A extração dos miRNAs do soro está sendo
feita com o kit miRNeasy Serum/Plasma (QIAGEN).
Em seguida, será feita a transcrição reversa
utilizando o kit miScript II RT (QIAGEN). Por fim, os
cDNAs obtidos a partir dos miRNAs serão
quantificados por PCR quantitativa em tempo real
(RT-qPCR), utilizado o arranjo T-cell & B-cell
Activation miRNA PCR Array (QIAGEN).
LENG, R. X.; PAN, H. F.; QIN, W. Z.; et al. Role of microRNA155 in autoimmunity. Cytokine & Growth Factor Reviews,
v. 22(3), p. 141-147, 2011.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Esta primeira etapa do projeto consistiu principalmente
na definição da metodologia. Dentro disto, foi feita a escolha
do arranjo de miRNAs que será utilizado neste estudo. Visto
que o PF é uma doença autoimune, acreditamos que miRNAs
com funções relacionadas a imunidade possam estar
envolvidos com a manifestação da doença. Desta forma, foi
escolhido o arranjo contendo o maior número de miRNAs
relacionados a regulação de genes envolvidos na resposta
imune ou ao desenvolvimento de células do sistema imune.
Para a comparação entre o perfil de miRNAs circulantes
expressos em pacientes de PF e em controles é fundamental
fazer o pareamento entre as amostras. Desta forma, foram
pareados pacientes e controles do mesmo gênero, com idades
próximas e expostos a condições ambientais semelhantes,
visto que estes fatores podem influenciar na expressão gênica
do indivíduo. A data da coleta das amostras também foi levada
em consideração para fazer o pareamento, para isolar a
influência do tempo de armazenamento nos resultados.
CONCLUSÃO
A definição da metodologia que será empregada no trabalho é
muito importante para o bom funcionamento das técnicas e
obtenção de resultados confiáveis, e por isso, muita atenção
foi voltada para esta etapa do projeto. Investigar os perfis de
miRNAs circulantes em pacientes de PF e controles pode nos
ajudar a compreender melhor os mecanismos que levam a
manifestação e ao desenvolvimento da doença.