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COMPARAÇÃO DA CINÉTICA DE ESPERMATOZOIDES DA CAUDA
DO EPIDÍDIMO COM OS OBTIDOS DO EJACULADO DE
GARANHÕES
AUTORES: Gabriel Augusto Monteiro1, Yamê Fabres Robaina Sancler
da Silva2, Carlos Ramires Neto2, Frederico Ozanam Papa3, Elisa Cristina
Dobrowolski4.
1. Docente de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do
Centro-Oeste - UNICENTRO
2. Pós-graduando (a) na área de reprodução na Universidade
Estadual de São Paulo - UNESP
3. Docente de Medicina Veterinária na Universidade Estadual de São
Paulo - UNESP
4. Discente de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do
Centro-Oste - UNICENTRO
RESUMO: A recuperação de espermatozoides da cauda do epidídimo e
sua criopreservação é um grande avanço biotecnológico, pois essa pode
ser a última chance para recuperação do material genético quando
ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético.
Sendo assim, o objetivo do estudo foi comparar a viabilidade e
fertilidade
dos
espermatozoides
colhidos
com
vagina
artificial,
recuperados da cauda do epidídimo. Com base nos resultados, concluise que o que os espermatozoides da cauda do epidídimo tem cinética
espermática e integridade de membrana plasmática semelhante ao do
ejaculado.
PALAVRAS-CHAVE:
criopreservação
espermatozoides.
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espermática,
epidídimo,
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COMPARISON OF THE KINETICS OF SPERM FROM THE TAIL OF
EPIDIDYMIDIS WITH THOSE OBTAINED FROM THE EJACULATE OF
STALLIONS
ABSTRACT: The recovery of spermatozoa from the tail of epididymidis
and their cryopreservation is a great advance biotechnology, because
this may be the last chance for recovery of genetic material occurs when
sudden death or serious injury in stallions of high genetic value. Thus,
the objective of the study was to compare the viability and fertility of
spermatozoa collected using an artificial vagina, recovered the tail of
epididymidis. Based on the results, it is concluded that the that the sperm
tail epididymidis has sperm kinetic and integrity of plasma membrane
similar to the ejaculate.
KEY-WORDS: sperm cryopreservation, epididymidis spermatozoa.
INTRODUÇÃO
A morte inesperada ou processos obstrutivos podem terminar
prematuramente com a vida reprodutiva de garanhões de alto valor
genético. Nesses casos, muitos proprietários têm buscado outras formas
de colheita de sêmen na tentativa de preservar a genética valiosa destes
garanhões.
A recuperação de espermatozoides do epidídimo pode ser
utilizada para preservação de germoplasma de animais com processos
que impossibilitam a colheita de sêmen da forma convencional. Além
disso,
um
estudo
recente
mostra
que
os
espermatozoides
criopreservados colhidos da cauda do epidídimo apresentaram taxa de
concepções similares aos espermatozoides do ejaculado. O presente
estudo teve como objetivo comparar os parâmetros espermáticos
colhidos com vagina artificial e recuperados da cauda do epidídimo
imediatamente após orquiectomia.
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MATERIAL E MÉTODO
Foram colhidos três ejaculados de 12 garanhões com vagina
artificial. Após a coleta o ejaculado foi diluído na proporção 1:1 com o
diluente Botu-Sêmen®, centrifugadas a 600xg por 10 minutos.
Posteriormente, o “pellet” ressuspendido com o diluente Botu-Crio® na
concentração de 200 milhões de espermatozoides por mL.
Após o envase em palhetas de 0,5 mL, as mesmas
permaneceram a temperatura de 5°C por 20 minutos. Posteriormente,
foram dispostas horizontalmente a 6,0 cm do nível do nitrogênio líquido
por 20 minutos e após este período, foram imersas no mesmo (PAPA et
al., 2008).
Uma semana após a última colheita de sêmen, os garanhões
foram submetidos à orquiectomia bilateral. Imediatamente após
orquiectomia foi realizada a colheita dos espermatozoides da cauda do
epidídimo pela técnica de fluxo retrógrado descrita GARDE et al. (1994).
Após a recuperação dos espermatozoides do epidídimo, a amostra
recuperada da cauda do epidídimo foi congelada utilizando o mesmo
protocolo descrito nos espermatozoides do ejaculado.
Os espermatozoides colhidos com vagina artificial e da cauda do
epidídimo foram avaliados pelo método computadorizado – CASA
imediatamente após a colheita e após descongelação a 46°C por 20
segundos (DELL’AQUA Jr. et al., 2001). Uma alíquota foi destinada à
análise de integridade de membrana plasmática por microscopia de epifluorescência.
RESULTADO
Tabela 1. Valores médios e desvio padrão de motilidade total (MT),
motilidade progressiva (MP), velocidade angular progressiva (VAP),
velocidade linear progressiva (VSL), velocidade curvilínea (VCL) e
espermatozoides rápidos (RAP) dos espermatozoides do ejaculado (EJ)
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e dos espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo (EP) de
garanhões férteis após centrifugação e ressuspensão com diluente de
congelação (M1).
Grupos
MT (%)
MP (%)
VAP (µm/s)
VSL (µm/s)
VCL (%)
EJ
70,5±11,20
35,2±8,84
97,6±7,50
77,2±5,20
175,6±11,21 58,1±13,24
EP
71,5±6,68
35,4±8,60
98,2±6,34
72,5±6,76
176,9±13,70 58,0±10,73
P
0,8314
0,9775
0,8598
0,9351
0,8447
RAP (%)
0,9837
Os valores com letras diferentes na mesma coluna diferem entre si
(p<0,05).
Tabela 2. Valores médios e desvio padrão de motilidade total (MT),
motilidade progressiva (MP), velocidade angular progressiva (VAP),
velocidade linear progressiva (VSL), velocidade curvilínea (VCL) e
espermatozoides rápidos (RAP) dos espermatozoides do ejaculado (EJ)
e dos espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo (EP) de
garanhões férteis após descongelação (M2).
Grupos
MT (%)
MP (%)
VAP (µm/s) VSL (µm/s)
RAP (%)
IMP (%)
EJ
54,6±14,21 27,8±10,32
91,7±6,56
74,7±5,66
165,2±6,78a 41,3±14,61
EP
59,0±6,86
26,5±5,97
93,5±4,27
74,4±5,14
175,8±14,08b 44,7±7,86
P
0,3603
0,7271
0,7502
0,8763
0,0353
0,4977
Os valores com letras diferentes na mesma coluna diferem entre si
(p<0,05).
DISCUSSÃO
As tabelas 1 e 2 mostram que não houve diferença estatística
entre as características seminais analisadas (MT, MP, VAP, VSL e IMP),
entretanto, na tabela 3 foi observada característica de superioridade no
parâmetro RAP nos espermatozoides da cauda do epidídimo quando
comparado com espermatozoides do ejaculado. Esses resultados
corroboram com MONTEIRO et al. (2011) que afirmou que após a
centrifugação e congelação do sêmen, a motilidade espermática dos
espermatozoides da cauda do epidídimo foram semelhantes as
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amostras do ejaculado, sendo que no presente estudo, o RAP obteve
um valor mais alto.
CONCLUSÃO
Pode-se concluir que os espermatozoides recuperados da cauda
do epidídimo apresentam parâmetros de cinética espermática e
integridade de membrana plasmática semelhante aos espermatozoides
do ejaculado.
REFERÊNCIAS
DELL’AQUA JR., J.A.; PAPA, F.O.; ALVARENGA, M.A.; et al. Effect of
packing systems and thawing temperature on spermatic parameters and
fertility rate of frozen equine semen. Revista Brasileira de Reprodução
Animal, v.25 n.1, p.458-460, 2001.
GARDE, J.; AGUADO, M.; PEREZ, S.; et al. Physiological characteristics
of epididymal spermatozoa from postmortem rams. Theriogenology,
v.41, n.1, p. 2003, 1994.
JONES, R. Plasma membrane structure and remodeling during sperm
maturation in the epididymis. J. Reprod. Fertil., v. 53, p. 73–84, 1998.
MONTEIRO, G. A.; PAPA, F. O.; ZAHN, F. S.; et al. Cryopreservation
and fertility of ejaculated and epididymal stallion sperm. Animal
Reproduction Science, v.127, p. 197– 201 2011.
PAPA, F.O.; MELO, C.M.; FIORATTI E.G.; et al. Freezing of stallion
epididymal sperm. Animal Reproduction Science, v.107, p.293-301,
2008.
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