Cold Spring Harbor Symposia on Quantititive Biology
Vol 83, 1993
From the Chromosomal Loops
and the Scaffold to the Classic
Bands of Metaphase
Chromosomes
Y. Saitoh AND U.K. Laemmli
Apresentação: D. Safe AND J.L. Carvalho
Loops Cromossômicos
. Dificuldades de estudo
. Estrutura dos cromossomos nativos:
Loops Cromossômicos
Conceito sólido
Primeiras bruxarias
. Microscopia eletrônica de cromossomos metafásicos
que tiveram suas histonas removidas através de tratamento
com tampões
. Secções dos cromossomos
. Técnicas de espalhamento
. Imunofluorescência (anticorpos anti Topo II)
Loops Cromossômicos
Cromossomos desdobrados
Halo (loops)
Scaffold
Loops Cromossômicos
• Scaffold = bases dos loops em cromossomos
desdobrados (região heterocromática)
• Características do scaffold
Topoisomerase II e SARs
• Proteína SC1 (localização, ligação às SARs e função)
• SARs = Scaffold-associated regions (função e
características)
- A tracts
- Alterações na estrutura do cromossomo
Bandas Cromossômicas
Bandas Q
Bandas Cromossômicas
• Modelo clássico: discos empilhados, densidade gênica,
tempo de replicação, seqüências repetitivas,
conformação da cromatina.
• Tipos: C, Q/G e R
Bandas Cromossômicas
• Hipóteses para o bandeamento
- Acessibilidade do corante
- Riqueza
- Superestrutura (?)
Bandas Cromossômicas
• Bandas Q/G
- Mais heterocromática
- “Rica” em AT
- 20% dos genes
Bandas Cromossômicas
• Bandas R
- Replica primeiro
- “Rica” em GC
- Digerida por tripsina
- Genes housekeeping
Modelo Loop/Scaffold de cromossomos
nativos
• Dois tipos de loops: Q/G e R
• Fila AT
• Estrutura do cromossomo
compacto
Modelo Loop/Scaffold de cromossomos
nativos
Empacotamento dos loops
cromossômicos: possibilidades e
ferramentas.
• Polaridades bioquímica e morfológica
Detecção da Base e Corpo dos Loops
• Soro específico
• Fluorocromos AT-específicos
Daunomicina e a detecção das bases dos
loops
• DNA muito rico em AT (>65%)
• Fluorometria:
- Excesso de poli (dA.dT), (dA).(dT) ou (dI).(dC): sinal
residual de 45-55%
- Excesso de poli (dC.dG), (dC).(dG): sinal residual de 1-2%
- Excesso de SAR (74% AT): sinal residual de 10-15%
YOYO e a detecção do corpo dos loops
• Cora tanto a base quanto o
corpo
• MG interage com fragmentos
de DNA ricos em AT
Bandas Q e R são complementares e
formadas por enovelamento diferencial da
fila AT
Bandas Q e R são complementares e
formadas por enovelamento diferencial da
fila AT
• Densidade de DNA e acessibilidade do corante.
• Complementaridade entre as bandas Q e R
• Aparência “puff-like” das bandas R
• Uso de corantes consecutivamente no mesmo
cromossomo
Bandas Q e R são complementares e
formadas por enovelamento diferencial da
fila AT
Complementaridade de Sub-bandas
• Bandas Q com estrutura preservada não são coradas
igualmente por daunomicina
Complementaridade de Sub-bandas
Complementaridade de Sub-bandas
Evidências Relacionam a Fila AT ao
Scaffold
• Fila AT como sinal óptico gerado pelo complexo
scaffold/SARs
• Daunomicina e SARs
• Topoisomerase II, HMG-I(Y) e a fila AT
Evidências Relacionam a Fila AT ao
Scaffold
Dauno
Topo II
Sub-bandas Giemsa e o Scaffold
• Cromossomos alongados
pré-matafásicos
• Relaçao 1x1 entre subbandas giemsa e AT-
coils