Ciências Veterinárias, 3º Congresso da SPCV 2005, Livro de Resumos
Comunicação livre oral
Efeito de ácidos gordos polinsaturados da série n-3 (ácido eicosapentaénoico) ou n-6 (ácido
araquidónico) no desenvolvimento embrionário bovino in vitro.
Pereira. RM, Baptista, MC, Vasques, MI, Horta, AEM, Marques, CC.
Estação Zootécnica Nacional, 2005-048 Vate de Santarém, Portugal. E-mail: [email protected]
Os lípidos são imprescindíveis para a estrutura, metabolismo e actividade celular dos embriões antes da
implantação. No entanto, a inclusão de ácidos gordos nos meios de cultura de embriões, para além da sua presença
acidental como constituintes não identificados do soro ou albumina, tem sido negligenciada. O objectivo deste
trabalho foi determinar o efeito de dois ácidos gordos polinsaturados, o ácido araquidónico (C20:4n-6) e o
eicosapentaenoico (C20:5n-3), no desenvolvimento de embriões bovinos produzidos in vitro. Oócitos recolhidos de
ovários provenientes do matadouro foram maturados e fertilizados in vitro (FIV=D0) e os presumíveis zigotos
transferidos para monocamadas de células da granulosa. Os embriões foram refrescados durante 12 dias com
TCM199+10% soro suplementado com diferentes doses (0, 1, 10, 100 µM) de C20:4n-6 na experiência 1 e de
C20:5n-3 na experiência 2 (8 sessões cada experiência). Foi também incorporado um anti-oxidante, o glutatião
peroxidase (GSH, 100 µM), no meio de cultura de forma a reduzir a formação de peróxidos. Os dados referentes às
taxas de produção (clivagem, embriões D7-8 e eclodidos) e qualidade dos embriões foram analisados pelos testes do
qui-quadrado e de Mann-Whitney. A suplementação dos meios de cultura de embriões com C20:4n-6 aumentou
significativamente a taxa de clivagem e a qualidade dos embriões, apenas na dose mais elevada (testemunha v.s. 100
µM, P=0,04 e P=0,01, respectivamente), não interferindo nas taxas de embriões D7-8 ou eclodidos. Na experiência
2, a suplementação com C20:5n-3 não aumentou a taxa de clivagem quando comparada com a testemunha. No
entanto, esta taxa foi superior na dose de 10 µM do que na de 1 µM (P=0,04). Pelo contrário, a presença de 1 µM de
C20:5n-3 induziu uma taxa de embriões D7-8 maior do que a de 10 µM (P=0,001) ou 100 µM (P=0,004). A taxa de
eclosão e a qualidade dos embriões, aumentaram apenas na dose de 1 µM de C20:5n-3 (testemunha v.s. 1 µM,
P=0,005 e P=0,001, respectivamente; qualidade 1 µM v.s. 100 µM, P=0,02).
Resultados em trabalhos anteriores identificaram um efeito negativo do C20:4n-6 no crescimento e eclosão dos
embriões. Este efeito não se verificou na presença do anti-oxidante. Os presentes resultados demonstram que a
suplementação dos meios de cultura com C20:4n-6, na dose de 100 µM, ou de C20:5n-3, na dose de 1 µM.
melhoram a qualidade dos embriões produzidos. Recomenda-se a finura incorporação destes ácidos gordos
polinsaturados, nas doses referidas, com 100 µM de GSH nos meios de cultura de embriões.
[Effect of n-3 (eicosapentaenoic acid) or n-6 (arachidonic acid) polyunsaturated fatty acids on in
vitro bovine embryo development]
Fatty acid and lipids are crucial contributors to the structural, functional and metabolic integrity of preimplantation
mammalian embryos. Despite this, fatty acids have been largely ignored and neglected as constituents of culture
media, with any contributions they do make, beneficial or otherwise, seldom identified and usually due to their
accidental presence as undefined constituents of albumin or serum. The objective of present study was to determine
the effect of two different polyunsaturated fatty acids, arachidonic (C20:4n-6) and eicosapentaenoic (C20:5n-3)
acids, on in vitro bovine embryo development. Following standard in vitro maturation and fertilization (IVF=D0) of
abattoir oocytes, presumptive zygotes were transferred to a co—culture granulosa cell system. Different doses (0, 1,
10, 100 µM) of C20:4n-6 or C20:5n-3 were added to conventional embryo culture media (TCM 199 + 10% serum)
and tested in two experiments (8 sessions each), respectively. An antioxidant (100 µM GSH) was also incorporated
to reduce the formation of lipid peroxides. Embryo co-culture proceeded for 12 days. Data from embryo production
rates (c1eava D7-8 and hatched embryos) and quality (Grade 1= very good … - Grade 4 bad) were analysed using
Chi-Square and Mann-Whitney U tests. In experiment 1, the presence of 100 1 dose of C20:4n-6 significantly
increased cleavage rate (P=0.04 and D8 embryo quality (P0.01) when compared with control. No effect was
detected on cleavage, D7-8 and hatched embryo rates or embryo quality with other doses of C20:4n-6. In
experiment 2, C20:5n-3 supplementation did not increase cleavage rate compared to control. Nevertheless when a
10 µM dose was added to culture media results were better than with 1 µM of C20:5n-3 (P=0.04). On the contrary, 1
µM of C20:5n-3 induced better D7-8 embryo rates than 10 µM (P=0.001) or 100 µM (P=0.004). Hatched embryo
rate and D7-8 embryo quality were significantly improved only when 1 µM of C20: were incorporated in embryo
culture media (control v.s. 1 µM, P=0.005 and P<0.003, respectively; quality 1 µM V.S. 100 µM, P=0.02).
The previously identified negative effect of C20:4n-6 on embryo growth and hatching was overcome probably by
the antioxidant action. Present results show that bovine embryo culture in the presence of C20:4n-6 in a 100 µM
dose or of C20:5n-3 in a 1 µM dose, improves quality. Future incorporation of these polyunsaturated fatty acids in
the referred conditions with 100 µM GSH in embryo culture media is recommended.
119