Efeito da otimização da filtração inicial de fezes no desempenho do método de
eclosão de miracídios para o diagnóstico da esquitossomose.
Dieli Souza Borges, Carlos Graeff-Teixeira
Laboratórios de Parasitologia Molecular e de Biologia Parasitária, Instituto de Pesquisas Biomédicas e
Faculdade de Biociências da PUCRS.
Introdução
A esquistossomose é uma infecção que afeta 200 milhões de pessoas em 74
países. O sul do Brasil tem como foco a região metropolitana de Porto Alegre, na cidade
de Esteio, com uma baixa endemicidade, com prevalência menor do que 1%. O método
de eclosão de miracídios (MEM) é considerado um dos métodos parasitológicos mais
sensíveis para diagnóstico da esquistossomose, embora apenas com um trabalho
publicado na literatura nas condições de cargas parasitárias extremamente baixas.
Objetivo: testar a utilização de telas de conformação estável na filtração inicial de fezes,
dentro dos esforços de otimização de procedimentos do MEM.
Materiais e Métodos
Ovos viáveis de Schistosoma mansoni foram obtidos do ciclo mantido em laboratório.
As seguintes variáveis de experimentos de semeadura foram previamente definidas: 0,5
g de fezes; 500 mL para dissolução em água declorada, lavagens com água declorada a
4 °C pH 6,2; eclosão induzida por exposição a fonte luminosa distante 50 cm e água
declorada a 25 °C e pH 7,2; leituras em estereomicroscópio após 2 e 24 horas. Foram
realizadas dez repetições do experimento com semeadura de um ovo em 0,5g de fezes
normais, empregando tela de nylon com 500 µm de abertura ou gaze cirúrgica dobrada
quatro vezes. A escolha da carga de um ovo foi feita por constituir a situação crítica de
desempenho do método, onde há discordância dos resultados obtidos no laboratório
com os dados publicados por Zicker e colaboradores (1977).
Resultados
A taxa de recuperação de ovos foi de 0% com uso da gaze e 34% com uso da
tela de nylon. O número das lavagens necessário para deixar o sobrenadante limpo foi
de 3 vezes com uso da gaze e 1 vez com uso da tela de nylon.
Tabela - Dez replicações do experimento onde um ovo de Schistosoma mansoni foi
semeado em 0,5 g de fezse humanas, não infectadas, antes do processo de concentração:
filtração com gaze ou tela de nylon 500µm de abertura, acompanhada de lavagens.
Replicates
1
Gauze
Number of 0
eggs
recovered
Positive
control (4
eggs)
Number of
washing
steps
500 µm
nylon
Number of
eggs
recovered
3
4
5
6
7
8
9
10
Recovery
(%)
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
2
2
6/12 (50)
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
1
1
0
0
1
0
0
0
0
0
Positive
control (1
egg)
Number of
washing
steps
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
3/10 (34)
3/3 (100)
1
1
Discussão
Ficou demonstrada a ocorrência de perda de ovos no processo de filtração, maior
com o uso de gaze. O uso da gaze introduz uma enorme variação pela grande
deformidade da tela induzida pelo próprio processo de filtração, bem como sua eficácia
menor de remoção de detritos como fica evidente pelo maior número de lavagens
necessário para limpar o sobrenadante. Existe uma comparação do MEM com o método
de Kato-Katz publicada por Yu e colaboradores (2007), porém que não avalia o
desempenho com baixa carga de ovos nas fezes. Com estes resultados ficam melhor
definidos os procedimentos que otimizam o desempenho do MEM.
Mesmo com as
melhores condições possíveis, não foi reproduzido o desempenho relatado por Zicker e
colaboradores (1977), com estimativa de sensibilidade (S) de 100% até 12 ovos por
grama de fezes (opg), mantendo S = 80% para 5 e 1 opg. Esta discrepância pode ser
atribuída a identificação falso-positiva de miracídios por aqueles autores, que faziam a
detecção das larvas apenas com observação auxiliada por uma lente manual, sem
descrição do poder de aumento. Com os dados do experimento ora relatado conclui-se a
revisão mais completa dos procedimentos do MEM a ser publicada e que vai permitir
estimativa confiável de sensibilidade para diferentes cargas parasitárias a partir de
modelagem matemática.
Referencias
Zicker, F., Katz, N., Wolf, J., Avaliação do teste de eclosão de miracídios
esquistossomose mansonica. Revista do Instituto de Medicina Tropical de São
Paulo. Vol. 19, N° 3 (1977), pp.202-207.
Yu, J. M., Vlas, S. J., Jiang, Q. W., Gryseels, B. 2007. Comparison of the Kato-Katz
technique, hatching test and indirect hemagglutination assay (IHA) for the diagnosis of
Schistosoma japonicum infection in China. Parasitology International. Vol. 56 (2007),
pp. 45-49.
Graeff-Teixeira, C., Valar, C., Moraes, C. K., Salvany, A. M., Brum, C. A., Maurer, R.
L., Ben, R., Mardini, B. L. F. L., Jobim, M. B., Amaral, R. S., The initial epidemiology
studies in the low endemicity schistosomiasis area in Esteio, Rio Grande do Sul the
southernmost Brazilian state, 1997 to 2000. Mem Inst Oswaldo Cruz. Vol. 99 (2004),
pp. 1-6.
Chitsulo, L., Engels, D., Montresor, A., Svioli, L., The global status of schistosomiasis
and its control. Acta Tropica. Vol. 77 (2000), pp. 41-51.
Chitusulo
Zicker
Graeff esteio
Chinês, 2007