Seminário de Inicia ção Científica da UNIFAL-MG – Edi ção 2012 Estudos das Bactérias Redutoras de Sulfato (BRS) provenientes de sedimentos anóxicos amazônico envolvidas na metilação do mercúrio Paula Mari Sato; Gunther Brucha. *[email protected] Laboratório de Biotecnologia Anaeróbia, Instituto de Ciência e Tecnologia, Campus Poços de Caldas Palavras-chave: BRS, metilação do mercúrio, sedimento anóxico amazônico. 3 Introdução Estudos sobre a ocorrência de metilação biótica do mercúrio constataram que o grupo das bactérias redutoras de sulfato (BRS) são as principais metiladoras do metal em laboratório 1. As BRS são microrganismos anaeróbios estritos, encontradas no ambiente aquático e terrestre, sendo recorrente em sedimentos, onde as condições redutoras são mais favoráveis2, havendo a redução dissimilativa de compostos como sulfato e sulfito, e a produção de sulfeto de hidrogênio. Tendo em vista que há décadas estuda-se a otimização de processos capazes de reverter, ou ao menos amenizar, situações de contaminação de água e solo, bioacumulação, biomagnificação e doenças advindas do mercúrio, na forma de metilmercúrio (CH3Hg), a pesquisa vem auxiliar no entendimento sobre a ciclagem do metal na região amazônica, bem como elucidar os grupos de BRS do bioma brasileiro envolvidos no processo de metilação, sobre os quais ainda pouco se sabe. Propôs-se, nessa primeira fase do trabalho enriquecer o grupo das BRS proveniente do sedimento amazônico para ensaios posteriores de metilação do mercúrio. Metodologia (material e métodos) Amostras de sedimento amazônico coletados de três pontos no lago Puruzinho, AM, retirados de dez a doze metros profundidade, foram transferidos para frascos de borosilicato de 1000 mL, mantidos em refrigeração.Durante a coleta, parâmetros físico-químicos (pH, condutividade, oxigênio dissolvido, temperatura) foram determinados com auxílio da sonda Analisador Multiparâmetro de Qualidade de Água, Eutech Instrumentos - PCD 650. No laboratório, amostras foram submetidas a determinação de sólidos totais e sólidos totais voláteis3. O enriquecimento do grupo das Bactérias Redutoras de Sulfato (BRS) foi realizado mediante 30 mL de inóculo em 270 mL de meio de cultura Postgate C, específico para crescimento de BRS 2, e solução redutora de sulfeto de sódio a 0,5%, em frascos de borosilicato de 500 mL, sob fluxo de N 2 e atmosfera final em N2/CO2 (70:30). Os frascos foram incubados em shaker à 30ºC e mantidos a agitação constante de 150 rpm. O crescimento das BRS foi acompanhado através da produção de sulfeto de hidrogênio3. Resultados e discussão Os resultados fisico-químicos do local de coleta estão apresentados na Tabela 1. As concentrações de sulfeto (S-2) obtidas inicialmente do enriquecimento do inóculo permitem afirmar o crescimento das BRS, conforme Figura 1. Tabela 1. Resultados das análises físico-químicas do local de coleta P1 P2 P3 pH 5,10 5,43 5,52 Cond(µS) 11,40 16,01 9,0 T(°C) 27 25,4 27,6 OD(mg/L) 0,14 0,27 0,52 Figura1: Concentração de sulfeto nas amostras dos pontos 1,2 e 3, e do controle. Conclusões Como a parte experimental ainda não foi concluída, dar-se-á continuidade ao enriquecimento, ao ensaio de metilação de mercúrio e identificação filogenética por procedimento de extração de DNA, amplificação de fragmentos do DNAr 16S, purificação, clonagem e sequenciamento genético. Agradecimentos Os autores agradecem ao CNPq pelo financiamento do Projeto (Processo n° 485089/2011-4), ao INCT-INPETAm pelo apoio financeiro e a FAPEMIG pela bolsa de Iniciação Científica concedida. Referências bibliográficas COMPEAU, G.C.; BARTHA, R. Sulfate-Reducing Bacteria: Principal Methylators mercury in anoxic Estuarine Sediment. Applied and Environmental Microbiology, Aug. 1985, p. 498-502. 2 SAKAMOTO, I.K; VARESCHE, M.B.A. Quantificação das bactérias redutoras de sulfato por NMP. São Carlos, SP: CNPQ/FINEP/ PROSAB/USP, 2009. 1 Seminário de Inicia ção Científica da UNIFAL-MG – Edi ção 2012 FORESTI E.; et al. Métodos de Análises Físico-químicas de rotina de águas residuárias tratadas biologicamente. São Paulo, SP: USP, 2005. 3