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IV Mostra de Pesquisa
da Pós-Graduação
PUCRS
Análise Molecular e Comportamental dos Efeitos do
Antagonismo dos Receptores GRP durante o
Desenvolvimento em Ratos
Juliana Presti Torres, Prof.a Dr.a Nadja Schroder (orientadora)
Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular, Faculdade de Biociências, PUCRS,
Resumo
Recentemente, evidências demonstraram que o GRP juntamente com o seu receptor
(GRPR), além de estarem presentes no sistema gastrointestinal como já sabido anteriormente,
estão também, amplamente distribuídos pelo sistema nervoso central e periférico de
mamíferos, apresentando diversas funções. Nosso estudo tem como finalidade analisar se as
alterações comportamentais sociais e cognitivas ocorridas na fase adulta de ratos, geradas pelo
tratamento neonatal com o antagonista de GRPR (RC-3095), podem ser revertidas através do
tratamento com antipsicótico “atípico”, a clozapina. Tal fármaco, antagonista de receptores
dopaminérgicos, é utilizado com a finalidade de atenuar alterações comportamentais
características de certas psicoses, como aquelas de isolamento social, bem caracterizadas nos
animais em nosso experimento anterior. Ainda, o presente trabalho busca avaliar possíveis
alterações na expressão gênica do GRPR, receptor NMDA, FGF-2 e BDNF em estruturas
cerebrais de ratos adultos que tenham sido submetidos ao antagonismo do GRPR com RC3095 durante o período neonatal.
Introdução
Recentemente, evidências demonstraram que o GRP juntamente com o seu receptor
(GRPR), além de estarem presentes no sistema gastrointestinal como já sabido anteriormente,
estão também, amplamente distribuídos pelo sistema nervoso central e periférico de
mamíferos, apresentando diversas funções (Roesler et al.,2003).
Em investigações anteriores, nosso grupo de pesquisa demonstrou que o bloqueio
desse receptor (GRPR) durante o período pós-natal (PN 1-10), em ratos, foi capaz de provocar
alterações em diferentes parâmetros comportamentais (Presti-Torres et al., 2007). Ratos
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Wistar receberam diferentes doses de um antagonista do receptor do peptídeo liberador de
gastrina, o RC-3095, entre o primeiro e décimo dias de vida. Ao serem submetidos à tarefa de
comportamento social e a testes de memória de reconhecimento do objeto novo e esquiva
inibitória, durante a fase adulta, apresentaram um pronunciado isolamento social, além de
importantes déficits cognitivos relacionados à memória de longa duração, respectivamente.
Tais evidências da correlação entre o bloqueio deste receptor e as alterações provocadas
podem corroborar com as hipóteses que o GRP e o GRPR estão relacionados ao
desenvolvimento neurológico.
Observações a respeito de como e em quais áreas cerebrais esse receptor é expresso,
tornam-se cada vez mais importantes. Dentro desse contexto discutem-se ainda as relações
entre algumas desordens neuropsiquiátricas, como por exemplo, autismo e esquizofrenia, e
outros receptores e proteínas importantes nessa linha, assim como o receptor NMDA (N-metil
D-aspartato), o FGF-2 (fator de crescimento de fibroblastos) e outra neurotrofina muito
investigada recentemente; o BDNF.
Metodologia
Foram utilizados para tal experimento ratos wistar machos, cujo 24 horas após o
nascimento, foram submetidos ao tratamento através de injeções intraperitoneais, duas vezes
ao dia, de 0,0 (grupo controle), 1,0mg/kg de peso corporal de RC-3095 (D-Tipi6, Leu 13
psi[CH2NH]-Leu 14) do 0 ao 10° dia de vida pós-natal. Para tanto, nessa primeira etapa
foram formados dois grupos experimentais: 1. Salina via intraperitoneal no período neonatal
(n = 30-36); 2.RC-3095 via intraperitoneal (i.p) na dose 1,0 mg/kg (n = 30-36).
Na fase adulta (60 dias), 1h anterior à exposição da tarefa comportamental de
interação social, os animais recebem (em andamento) uma dose de injeção i.p de 1,0 mg/kg e
5 mg/Kg de peso corporal de Clozapina (Sigma).
Tarefas Comportamentais e Análises Moleculares
As tarefas comportamentais de Interação social, Reconhecimento do Objeto Novo e
esquiva inibitória, estão sendo realizadas conforme descrito previamente em Presti-Torres et
al, 2007.
Para as análises moleculares, estão sendo utilizadas as estruturas cerebrais
previamente congeladas e armazenadas provenientes de nosso estudo anterior (Presti-Torres
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et al., 2007). As análises compreendem a seguinte ordem: a extração de RNA, síntese de
cDNA, RT-PCR, análises semiquantitativas de RNAms
Análises Estatísticas
Os resultados comportamentais das tarefas de memória (esquiva inibitória e
reconhecimento do objeto novo) serão analisados através de análise de variância de KruskalWallis e submetidos ao teste U de Mann-Whitney, quando necessário. Comparações entre as
sessões de cada grupo serão feitas utilizando-se o teste de Wilcoxon. Também os dados
obtidos referentes ao campo aberto e interação social serão analisados através da análise de
variância (ANOVA). Em todas as comparações, p<0,05 será considerado significativo
estatisticamente. Cada experimento será repetido quatro vezes usando o RNA obtido de
extrações independentes. As análises de expressão em cada tecido serão realizadas em
triplicata e os dados representativos serão utilizados. Os níveis de expressão normalizados dos
genes analisados nas diferentes regiões cerebrais serão expressos através da média +/- erro
padrão e estatisticamente comparados através da análise de variância de uma via (ANOVA),
seguida pelo teste de Tukey. Os valores de P < 0,05 serão considerados significativos
estatisticamente.
Resultados e Discussão
As análises moleculares estão em fase de conclusão, enquanto as tarefas
comportamentais dos animais adultos estão em andamento.
Referências
ROESLER, R.; Meller, C.A.; Kopschina, M.I.; Souza, D.O.; Henriques, J.A.;
Schwartsmann, G. Intrahippocampal infusion of the bombesin/gastrin-releasing
peptide antagonist RC-3095 impairs inhibitory avoidance retention. Peptides, 2003,
24, 1069.
PRESTI-TORRES J, de Lima MN, Scalco FS, Caldana F, Garcia VA, Guimaraes MR,
Schwartsmann G, Roesler R, Schroder N. Impairments of social behavior and memory
after neonatal gastrin-releasing peptide receptor blockade in rats: Implications for
an animal model of neurodevelopmental disorders. Neuropharmacology. 2007
Mar;52(3):724-32. Epub 2006 Nov 13
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