Sexagem e genotipagem de microssatélites usando DNA extraído de penas coletadas
no solo de colônias reprodutivas de Platalea ajaja (Aves: Ciconiformes)
Miño, Carolina I. e Del Lama, Silvia N. Laboratório de Genética Bioquímica,
Departamento de Genética e Evolução, Universidade Federal de São Carlos. São Paulo,
Brasil.
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A amostragem não-invasiva vem sendo muito utilizada na genética de populações,
especialmente no estudo de espécies ameaçadas ou quando a coleta de material biológico é
trabalhosa. A coleta de penas da muda pré-ciclo reprodutivo, no solo das colônias de
Platalea ajaja,, pode ser uma boa alternativa para amostrar populações da espécie pois o
acesso aos ninhos dessa espécie apresenta dificuldades. O objetivo deste trabalho foi
padronizar um método de extração, sexagem e genotipagem do DNA obtido a partir das
penas coletadas no solo de indivíduos adultos de P.ajaja. O DNA foi extraído pelo método
convencional fenol-clorofórmio, a partir de uma porção da parede folicular da pena que
inclui o umbílico superior e onde se encontra um pequeno coágulo de sangue. O protocolo
básico foi modificado procedendo-se à incubação de 150 mg de tecido por sete dias, com
agitação e adições diárias de 0,3 mg de Proteinase K. Esse procedimento possibilitou a
completa dissolução do tecidos da parede folicular da pena. Foram obtidas amostras de
DNA com concentração total de 1200-2400 ng/amostra. A qualidade do DNA foi avaliada
em gel de agarose 1% , pela amplificação de locos de microssatélites isolados na espécie
Mycteria americana (WS03 e WS09) e pela sexagem molecular baseada no loco do CHD.
As amplificações nos locos testados apresentaram bom rendimento. Para se evitar que as
penas provenientes do mesmo indivíduo sejam analisadas mais de uma vez nos estudos
populacionais propõe-se a exclusão de indivíduos com genótipos idênticos em todos os
locos. O método padronizado neste trabalho demonstra que as penas coletadas no solo
fornecem DNA de boa qualidade e em quantidade suficiente para a identificação dos
genótipos em diversos locos de marcadores moleculares. Esta nova estratégia de
amostragem dos indivíduos adultos nas colônias reprodutivas poderá ser utilizada nas
análises de genética de populações nessa espécie e em outras que apresentem características
semelhantes.