Resumos do II Workshop de Genética
Universidade Católica de Goiás – Goiânia – Goiás – Brasil
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OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES DE AMPLIFICAÇÃO DE LOCOS
MICROSSATÉLITES PARA ANÁLISE DE VÍNCULO GENÉTICO
EM CÃES
Dayane B. Melo1,2,5, Felipe O. Gouveia1,2,5, Marivan S. Borges1,2,4, Mariana P.
de C. Telles1, Samara B. Portela1, Lucileide V. Resende1, Breno de F. e
Vasconcellos1, Heitor P. de C. Telles3, Hugo R. Ramos3,4.
II Workshop de Genética
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Laboratório de Genética & Biodiversidade, Universidade Católica de Goiás.
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A determinação precisa do vínculo genético em espécies domésticas é de
fundamental importância para os programas de melhoramento genético dessas
espécies, pois está diretamente relacionada à determinação acurada do valor aditivo
dos reprodutores em relação aos caracteres quantitativos e permite ainda a detecção
de indivíduos portadores inaparentes de genes indesejáveis que se manifestam na
progênie. Em cães, o vínculo genético é tradicionalmente estabelecido através da
informação do pedigree fornecida pelo produtor. Entretanto essa informação pode
estar equivocada uma vez que, em cães, há a possibilidade de paternidade múltipla.
Neste sentido, os marcadores moleculares funcionam como uma ferramenta de
grande importância para a estimativa desses vínculos. O presente trabalho teve
como objetivo otimizar as condições de amplificação de seis locos microssatélites
(PEZ05, PEZ07, PEZ12, L13, L15 e PEZ16) indicados para a análise de vínculo
genético. Para tanto, foram coletadas amostras de sangue de 37 indivíduos
distribuídos nas raças Bull Terrier (8), Labrador (15), American Staffordshire Terrier
(5), Pit Bull (6) e Pastor Belga de Malinoys (3). O sangue foi submetido à extração do
DNA através do kit de purificação de DNA (GFX) do fabricante Amersham Pharmacia
Biotech™. Depois de extraído, o DNA foi quantificado com o auxílio do marcador de
peso molecular Low DNA Mass, para então ser submetido às reações de
amplificação dos locos. Os produtos de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase)
foram separados em gel de poliacrilamida 6% e corados com nitrato de prata. Depois
de otimizadas as condições de amplificação, os dados obtidos foram utilizados em
uma análise descritiva dos locos e para a obtenção dos parâmetros básicos para a
análise de vínculo genético. Considerando os seis locos, não houve necessidade de
mudanças nas concentrações e/ou quantidade de reagentes usados na PCR,
somente as temperaturas de anelamento dos primers necessitaram de ajustes,
ficando otimizados da seguinte forma: PEZ05/52ºC, PEZ-07/48ºC, PEZ-12/54ºC, L13/50ºC, L-15/50ºC e PEZ-16/48ºC. O número médios de alelos por loco foi igual a
3,5, variando entre 4 e 8. As heterozigosidades médias esperadas e observadas,
para os seis locos, foram iguais a 0,71 e 0,55, respectivamente. A freqüência de
alelos nulos para cada um dos locos analisados foram respectivamente 0,05; 0,018;
0,039; 0,082; 0,062 e 0,346. Para os seis alelos em conjunto, a probabilidade de
identidade (PI) foi igual a 0,00000474 e a de exclusão (PE), igual a 0,929. As
condições de amplificação obtidas para estes locos e os valores estimados
demonstram que estes locos são eficientes e poderão ser utilizados apara a análise
de vínculo genético em cães.
Apoio: Canil Caraíbas/PROPE-UCG