TÍTULO: INFLUÊNCIAS DE REAGENTES CASEIROS NA LISE DA PAREDE CELULAR, DE CÉLULAS
FÚNGICAS.
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: BIOMEDICINA
INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS
AUTOR(ES): JULIANA SANTOS FRANCISCO
ORIENTADOR(ES): CHARLOTTE BORDA DE SAENZ, ERIK CENDEL SAENZ TEJADA
1.RESUMO
Cândida albicans  é um fungo dimórfico observado frequentemente em
processos patogênicos. A composição química da parede celular destas leveduras é
bastante complexa, sendo constituída principalmente por polissacarídeos e por
complexos proteínas-polissacarídios. Portanto, o conhecimento da lise da parede
celular fúngica para uso de técnicas de biologia molecular tem aplicações
importantes na biotecnologia. O objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de
extração de DNA genômico de Cândida albicans visando obter DNA de boa
qualidade, integridade e pureza através da utilização de produtos de limpeza
caseiros para lise da parede celular e assim elaborar um método mais barato e
igualmente eficiente para a extração de DNA genômico. O fungo foi obtido de uma
amostra hospitalar. Para extração do DNA genômico foi utilizado como referência o
método de Salting Out com alterações no protocolo, substituindo o dodecil sulfato de
sódio (SDS), um detergente aniônico que promove a ruptura das ligações covalentes
da membrana e a retirada de lípides, por produtos de limpeza caseiros como CIF
Desengordurante, Veja Multiuso, Detergente Liquido Ypê Coco e Ace Liquido.
A
visualização do DNA foi realizada em eletroforese de gel de agarose ao 1%. A
quantificação e a pureza das amostras foram realizadas em espectrofotômetro a
260nm/280nm. Os resultados denotaram a obtenção de DNA genômico de Cândida
albicans de boa qualidade em todos os tratamentos com produtos de limpeza.
Podendo concluir que os produtos de limpeza caseiros podem ter a mesma
eficiência na obtenção de DNA genômico com boa integridade e grau de pureza,
tendo assim um método mais barato e rápido de extração.
2. INTRODUÇÃO
Os fungos são microrganismos eucariontes heterotróficos que obtêm sua
energia pela ruptura de moléculas orgânicas, podendo ocupar diversos nichos
ecológicos,
atuando
como parasitas,
sapróbios ou
então
estabelecendo
relações simbióticas, por exemplo, com algas, formando os líquens (TORTORA et
al., 2000). A parede celular de leveduras é formada por três principais grupos de
polissacarídeos:
quitina.
A
β-glucana (β-1,3 glucana e
camada
externa
da
parede
β-1,6 glucana), mananaproteínas e
celular
de
leveduras
é
formada
pelas mananaproteínas, enquanto a interna, pela glucana (FLEURI; SATO, 2008). A
parede celular tem muitas funções: proteção física, estabilidade osmótica, suporte
de enzimas, adesão célula/célula e barreira de permeabilidade seletiva. Além disso,
promove rigidez e transporte de nutrientes para o citoplasma, proporcionando a
integridade, o metabolismo e o crescimento celular (FLEURI; SATO, 2005). A
parede celular de leveduras é formada por uma camada de mananaproteínas que
sobrepõe a camada de glucana, o que explicaria a resistência das células vivas de
levedura (FLEURI; SATO, 2005). Cândida albicans é um fungo dimórfico, que se
apresenta sob formas leveduriformes (blastoconídios) no estado saprofítico, estando
associado à colonização assintomática; ou como formas filamentosas (pseudohifas e hifas verdadeiras), observadas em processos patogênicos (ÁLVARES et
al.,2007). Estes fungos crescem rapidamente em quase todos os meios de cultura,
mas o ágar Sabouraud em temperatura ambiente e o meio BHI (brain heart infusion)
a 36 graus são os mais recomendados quando o organismo é clinicamente suspeito
(SERRACARBASSA; DOTTO, 2003). A lise da parede celular de leveduras têm
aplicações biotecnológicas na preparação de protoplastos; na extração de proteínas,
enzimas e pigmentos; ferramenta para a determinação da composição da parede
celular de leveduras e no estudo do mecanismo da síntese da parede celular para
controle de leveduras patogênicas (FLEURI; SATO, 2005).
3. OBJETIVOS
O objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de extração de DNA genômico
de Cândida albicans visando obter DNA de boa qualidade, integridade e pureza
através da utilização de produtos de limpeza caseiros para lise da parede celular e
assim elaborar um método mais barato e igualmente eficiente para a extração de
DNA genômico.
4. METODOLOGIA
Neste trabalho será utilizado o fungo Cândida albicans, para a lise da parede
celular, obtida através de amostras de secreção vaginal. O reagente utilizado como
controle para a lise será o detergente SDS (Dodecil Sulfato de Sódio) a 10%. E
realizar testes com reagentes de limpeza caseiros, como: Cif Desengordurante, Veja
Multiuso, Detergente Liquido Ypê Coco, Ace Liquido em concentrações de 20% e
40%. Para extração do DNA genômico utilizaremos como referência o método
de Salting Out. A visualização do DNA será observada em eletroforese de gel
de agarose a 1%. A quantificação e a pureza da amostra serão realizadas em um
espectrofotômetro a comprimento de onda de 260 e 280 nm.
5. DESENVOLVIMENTO
Para os testes preliminares foram usadas as amostras de Cândida albicans,
que foram submetidos à extração de DNA, segundo o método de Salting Out
utilizando como reagente de lise o SDS como controle e os reagentes de limpeza
caseiros CIF Desengordurante, Veja Multiuso, Detergente Liquido Ypê Coco, Ace
liquido. Os produtos da extração de DNA foram submetidos à eletroforese em gel de
agarose a 1% para a visualização do DNA utilizando brometo de etídio.
6. RESULTADOS PRELIMINARES
Os resultados denotaram a obtenção de DNA genômico de Cândida albicans
de boa qualidade em todos os tratamentos com produtos de limpeza. Podemos
observar que em todos os tratamentos obteve altas concentrações de DNA com alto
grau de pureza. Observando assim a presença de DNA em todos os reagentes de
limpeza caseiro, mas com melhor visualização no DNA extraído com reagente CIF
Desengordurante.
7. FONTES CONSULTADAS
FERRAZZA, M. et al.,. Caracterização de leveduras isoladas da vagina e sua
associação
com
candidíase vulvovaginal em
duas
cidades do
sul
do
Brasil. Rev Bras Ginecol Obstet. 2005; 27(2): 58-63.
FLEURI, L. et al.,. Produção, purificação, clonagem e aplicação de enzimas
líticas. Quím. Nova v.28 nº.5 São Paulo Sept./Oct. 2005.
FLEURI, L. et al.,. Estudo da Influência de diferentes parâmetros na produção
de enzimas líticas. Ciênc. Tecnol. Aliment., v.28 nº2, Campinas Apr./June 2008.
FLEURI, L. et al.,. β 1,3 Glucanases e quitinases: aplicações na lise de
leveduras e inibição de fungos. Ciênc. Agrotec., v. 32 nº4, Lavras July/Aug. 2008.
ROSA, M. et. al.,. Fatores Associados à Candidíase Vulvovaginal: Estudo
Exploratório. RBGO - v. 26, nº 1, 2004.
SERRACARBASSA, P. et al.,. Endoftalmite por Candida albicans. Arq. Bras.
Oftalmol. vol.66 no.5 São Paulo Sept./Oct. 2003.
TORTORA, J. et al.,.  Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2000.