Anais da XI Jornada de Iniciação Científica da UFRRJ
Caracterização da microbiota em lavados traqueobronquiais de macacos prego
(Cebus apella, Linnaeus, 1798) hígidos
Marcelo Silva Marinho1, João Telhado2, Maria Conceição Estellita Vianni2,
Charles André Duque Santiago*1 & Carla Andresa Diele4
1. Acadêmico de Medicina Veterinária. UFRRJ; 2. Professor Adjunto - UFRRJ – DMCV; 3. Médico Veterinário Autônomo
– Rua D, 137, Seropédica, Rio de Janeiro, Brasil; 4. Médica Veterinária Autônoma.
Palavras-chave: capuchin monkey, tracheobronchial washing, bacteriolocal culture.
informações tais como o tipo de inflamação, a
presença de bactérias, protozoários, fungos e outros
parasitas, além da possibilidade de realização de
culturas com material obtido para caracterização de
microrganismos (HAWKINS, 1997). O presente
trabalho teve como objetivo, definir a microbiota em
lavados traqueobronquiais em macacos-prego
(Cebus apella) hígidos, visando a diferenciação dos
microrganismos presentes fisiologicamente no trato
respiratório desta espécie.
Abstract
Twenty three healthy adult capuchin monkey (seven
males and sixteen females) were submitted to
tracheobronchial washing (by endotracheal tub
method) and the collected material was submitted to
bacteriological exam. Three samples were
discharged despite of oropharyngeal contamination
and the following microorganism were identified:
Streptococcus cricetus (3/20); Streptococcus ferus
(2/20); Staphylococcus aureus (6/20); Escherichia coli
(14/20); Klebsiella pneumonia (3/20) and Citrobacter
freundii (1/20).
Material e Métodos
Foram utilizados vinte e três macacos-prego (sete
machos e desesseis fêmeas), adultos e clinicamente
sadios. Após terem sido pesados, os animais foram
sedados inicialmente com diazepam (2mg/kg) via
intramuscular e, passados dez minutos, anestesiados
com cloridrato de ketamina na dosagem de 10 mg/
kg PV, administrado também por via intramuscular.
Os lavados traqueobronquiais foram realizados com
o animal em decúbito lateral, introduzindo-se um tubo
endotraqueal nº 3 estéril na traquéia, próximo aos
brônquios, tendo-se o cuidado de evitar o contato
com a faringe e cartilagens aritenóides. Um cateter
14-ga com estilete de metal foi passado por dentro
do tubo traqueal, sendo o estilete removido assim
que o cateter ultrapassasse 2 a 4 cm (medidas
previamente a inserção) da borda final do tubo
endotraqueal. Uma seringa contendo 10 ml de
solução salina estéril foi conectada ao cateter, sendo
a salina infundida na traquéia, e de imediato realizouse a aspiração do lavado. Quando o animal
apresentava tosse, o aspirado era interrompido para
evitar contaminação por células e bactérias
orofaríngeas. O material coletado pela seringa foi
semeado em meios de cultura de transporte – Brain
Heart Infusion (caldo BHI).
Introdução
Os primatas são acometidos de quadros mórbidos
pulmonares, que vão desde simples resfriados,
pneumonias, tuberculose, destacando-se as
pneumonias verminótica e bacteriana primária. Os
sinais clínicos são traduzidos por dificuldade
respiratória, inapetência, inatividade, descargas
nasais, sendo a auscultação e o hemograma
(leucocitose) os meios mais seguros para o
diagnóstico (FOWLER, 1986). Radiografias torácicas
constituem-se métodos auxiliares para o diagnóstico
devido a dificuldade em realizar a auscultação
(DINIZ, 1997). A anamnese, os exames físicos e
complementares rotineiros, muitas vezes ainda não
permitem o estabelecimento de um diagnóstico
definitivo, sendo necessário recorrer a análises
microbiológicas, com colheita de material dos
pulmões, brônquios e traquéia para melhor avaliação
do quadro pulmonar. A broncoscopia e a biópsia
pulmonar também podem ser utilizadas, entretanto,
o lavado traqueal, a aspiração pulmonar e lavagem
broncoalveolar são técnicas menos agressivas e de
menor custo, logo, mais acessíveis (HAWKINS,
1997). Através do lavado traqueal, obtem-se
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procedendo-se a prova da catalase para distinção entre os gêneros Streptococcos e Staphylococcus
(CARTER, 1986). As amostras tidas como
pertencentes ao gênero Staphylococcus , foram
submetidas à prova da coagulase livre e ligada para
caracterização das espécies coagulase positivas e
coagulase negativas. Nas colônias pertencentes ao
gênero Streptococcus, foram realizados os seguintes
testes bioquímicos para identificação das espécies:
redução de nitrato a nitrito, atividade citocromo-oxidase, fermentação de carboidrato e composto
correlatos tais como sacarose, lactose, manose,
maltose, trealose, manitol e sorbitol, hidrólise do
hipurato, utilização do citrato, reação do Vermelho
de Metila (VM), produção de acetil-metil-carbinol
(VP), descarboxilação de lisina, ornitina e arginina,
crescimento em ágar BHI a 2% e 6,5% de NaCl.
Todas as provas foram incubadas à temperatura de
37ºC, sendo a leitura efetuada no período de vinte e
quatro a noventa e seis horas.
Exame microbiológico:
A caracterização da microbiota dominante das
amostras obtidas foi realizada através da semeadura
em ágar sangue de carneiro a 10%, com posterior
incubação a 37ºC por 24/48 horas. As unidades
formadoras de colônia (UFC) foram apreciadas
quanto as suas características macroscópicas e
propriedades morfotintoriais através de coloração de
Gram, permitindo desta forma uma diferenciação
preliminar da microbiota bacteriana dominante em
Gram negativas e Gram positivas. Do crescimento
obtido em ágar sangue, procedeu-se a identificação
das espécies bacterianas do acordo com suas
características morfotintoriais.
a) Bactérias Gram negativas:
Cerca de 5 a 10 UFC de cada amostra foram
transferidas para o meio de triagem do Triple Sugar
Iron Agar – TSI e incubadas a 37ºC por 18-24 horas.
Esta identificação presuntiva permitiu uma análise
bioquímica através da ação destas bactérias sobre
a glicose (fermentação/oxidação), lactose e/ou
sacarose, produção de gás e sulfeto de hidrogênio.
Em função das características apresentadas no TSI,
procedeu-se a identificação dos gêneros e/ou
espécies da família Enterobacteriaceae
fundamentando-se na apreciação de um complexo
conjunto de caracteres bioquímicos (COSTA e
HOFER, 1972; EWING, 1986). Nesta fase, foram
realizadas as provas de redução de nitrato a nitrito,
atividade de citocromo-oxidase, fermentação de
carboidratos e compostos correlatos tais como
glicose, lactose, sacarose e manitol. Também se
levou em consideração a descarboxilação de lisina
e ornitina; utilização do citrato; reação do Vermelho
de Metila – VM, produção de acetil-metil-carbinol –
VP; pesquisa de produção de indol e de gás sulfídrico;
motilidade; determinação da urease e fenilalanina
desaminase. Todas as provas foram realizadas
mediante incubação à temperatura de 37ºC e a leitura
efetuada no período de vinte e quatro a noventa e
seis horas.
Resultados e Discussão
A sedação seguida de anestesia geral garantiu total
contenção dos animais, permitindo que a técnica do
tubo endotraqueal fosse utilizada de maneira correta
para obtenção do lavado brônquico, mostrando ser
uma metodologia prática e eficiente, não causando
aos animais complicações posteriores. As análises
bacteriológicas permitiram identificar três diferentes
espécies de bactérias Gram-negativas e três de
bactérias Gram-positivas (tabela1). Das vinte e três
amostras coletadas, três foram descartadas por
apresentar o desenvolvimento de Bacillus subtillis
nos meios de cultura, o que indicou contaminação
no momento da coleta. Dentre as Gram-negativas,
quatorze amostras foram caracterizadas como
Escherichia coli , três amostras como Klebsiella
pneumoniae e uma como Citrobacter freundii. Com
relação as Gram-positivas, seis amostras foram
identificadas como Staphylococcus aureus, três
como Streptococcus cricetus e duas como S. ferus.
Ressalta-se que os animais utilizados foram
observados por seis meses consecutivos após a
colheita do lavado traqueobronquial, sem que se
evidenciasse qualquer complicação ou doença
respiratória conseqüente ao experimento. Apesar da
preferência pela técnica percutânea para a colheita
de material da traquéia e brônquios por não
necessitar o uso da anestesia geral (COWELL &
b) Bactérias Gram positivas:
De cada amostra foi obtida uma cultura pura, as quais
foram transferidas para o caldo infusão de cérebro e
coração – caldo BHI e incubadas a 37ºC por 24 horas,
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TYLER, 1989), observou-se que a utilização da técnica
do tubo endotraqueal com anestesia geral permitiu a
contenção sem danos aos seus manipuladores e aos
animais. Nenhum dos sinais clínicos descritos na
literatura (DINIZ, 1997; FOWLER, 1986) foi observado
nos animais antes ou após a realização dos lavados
traqueobronqueais, sendo estes considerados livres
de quadros mórbidos respiratórios, além do que, não
ocorreu complicação ou seqüela proveniente da coleta
do lavado traqueobrônquico, como relatado na
literatura (COWELL & TYLER, 1989). Apesar da
Klebsiella pneumoniae ser apontada como agente
causal de pneumonia lobar e peritonite aguda (FOX et
al., 1984), nos animais positivos para este agente,
isolado dos lavados, não foram observados sinais
clínicos de quadros mórbidos pulmonares
conseqüentes a esta bactéria que foi isolada de três
animais, o mesmo sendo observado quanto aos
gêneros Staphylococcus e Streptococcus, apesar dos
mesmos terem sido isolados de vias aéreas inferiores
(traquéia e de brônquios). Escherichia coli foi a mais
comum, à semelhança do que ocorre em gatos
(SHERDING, 1994) ou em potros (CRANE et al.,
1989). O lavado traqueobronquial permitiu identificar
a microbiota pulmonar destes animais diferenciadas
em bactérias Gram negativas representadas pela
Escherichia coli (quatorze amostras), Klebsiella
pneumoniae (três amostras) e Citrobacter freundii
(uma amostra); da mesma forma, dentre as bactérias
Gram positivas foram isoladas seis amostras de
Staphylococcus aureus , três amostras de
Streptococcus cricetus e duas amostras de S. ferus.
Tabela 1- Resultados do exame bacteriológico de
lavados traqueobronquiais de macacos-prego (Cebus
apella).
Amostras
1
2
3
Gram negativas
Escherichia coli
E. coli
E. coli
Klebsiella
pneumoniae
E. coli
K. pneumoniae
Gram positivas
__________
__________
5
---------------
Staphylococcus
aureus
6
8
9
E. coli
Citrobacter freundii ---------------E. coli
--------------E. coli
-------------------------S. aureus
10
E. coli
11
____________
12
E. coli
13
14
E. coli
---------------
15
16
17
--------------E. coli
E. coli
18
19
-------------E. coli
K. pneumoniae
E. coli
4
7
Conclusões
Concluiu-se que a técnica do tubo endotraqueal como
método de coleta de secreções da traquéia e
brônquios mostrou-se prática e eficiente, permitindo
caracterizar a microbiota dominante, além de garantir
maior segurança para os animais e aos
manipuladores; a utilização do diazepam 2mg/kg IM
e do cloridrato de ketamina 10mg/kg (PV) IM
mostraram-se satisfatórias para a realização da
técnica, não sendo observadas complicações póscolheita das amostras.
20
137
__________
__________
Streptococcus
cricetus
Streptococcus
ferus
------------S.cricetus
Streptococcus
ferus
S. aureus
S. cricetus
----------------
S. aureus
S. aureus
S. aureus
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