O USO DE BANCO DE PERFIS GENÉTICOS DE VESTÍGIOS DE CRIMES
SEXUAIS EM INVESTIGAÇÕES CRIMINAIS: UMA EXPERIÊNCIA BEM
SUCEDIDA NO BRASIL
Samuel T. G. Ferreira
Instituto de Pesquisa de DNA Forense, IPDNA, Polícia Civil do Distrito
Federal, Brasília, Brasil
Secretaria Nacional de Segurança Pública do Ministério da Justiça,
Senasp/MJ, Brasília, Brasil
O uso de bancos de perfis genéticos em investigações criminais tem se
tornado cada vez mais importante. Em crimes sexuais, bancos de perfis
genéticos de vestígios biológicos coletados de vítimas e de suas roupas
podem desempenhar um papel fundamental nas investigações criminais e
identificações de agressores. Particularmente, em países onde não existe
legislação relativa a bancos de perfis genéticos de suspeitos ou de
condenados, bancos de perfis genéticos de vestígios de crimes sexuais
podem ser decisivos nas investigações. No Brasil, até 2012 e 2013 não
havia legislação relativa a bancos de perfis genéticos de suspeitos ou de
condenados. Como não havia legislação em relação a este tema e devido à
necessidade de solucionar crimes sexuais, principalmente nos casos em
que não havia suspeitos dos crimes, o Instituto de Pesquisa de DNA
Forense, IPDNA, da Polícia Civil do Distrito Federal em Brasília criou em
1998 o primeiro banco de perfis genéticos de vestígios de crimes sexuais
no Brasil com o objetivo de auxiliar este tipo de investigação criminal. A
utilização deste banco de perfis genéticos tornou-se uma experiência
muito bem sucedida nas investigações de crimes sexuais, solucionando
diversos casos e identificando os agressores. Peritos forenses do Instituto
de Pesquisa de DNA Forense, IPDNA, utilizando um banco de perfis
genéticos de vestígios de crimes sexuais, trabalhando em conjunto com
autoridades e investigadores da Polícia Civil do Distrito Federal,
descobriram 70 estupradores em série que agrediram 196 mulheres até o
mês de agosto de 2014, em Brasília, Brasil. O uso deste banco de perfis
genéticos demonstrou ser extremamente útil na identificação de
agressores, tornando-se um instrumento fundamental nas investigações
de crimes sexuais.
EJERCICIOS INTERLABORATORIALES DE CONTROL DE CALIDAD COMO
HERRAMIENTA PARA LA EVALUACION DE LA CONFORMIDAD DE LOS
LABORATORIOS
Juan José Builes Gómez
Laboratorio Genes Ltda
Laboratorio Nacional de Referencia
e-mail: [email protected]; [email protected]
Cada día es más frecuente la utilización de ensayos o pruebas con
marcadores de ADN para la resolución de diferentes situaciones que
afectan la vida de los individuos, desde casos simples de investigación de
la paternidad hasta casos complejos de desastres masivos o identificación
de restos óseos en fosas comunes. Para la resolución de estos diferentes
retos, los laboratorios deben disponer de las condiciones ideales
dependiendo de su énfasis o especialización, dichas condiciones
comprenden la normalización de los diferentes procedimientos
empleados, los marcadores genéticos apropiados, personal capacitado y
entrenado, una apropiada gestión metrológica y el aseguramiento de la
calidad de los resultados de los ensayos o pruebas realizadas.
La Norma ISO 17025 recomienda que los laboratorios deben tener
procedimientos de control de la calidad para realizar el seguimiento a la
validez de los ensayos llevados a cabo, registrando los datos resultantes
para detectar las tendencias y así poder tomar acciones planificadas
cuando estos datos no satisfacen los criterios predefinidos. Existen
diversos métodos para llevar a cabo el aseguramiento de la calidad de los
ensayos, tales como el uso de materiales de referencia certificados y/o un
control de calidad interno con materiales de referencia secundarios, la
repetición de ensayos utilizando el mismo método o métodos diferentes,
la repetición del ensayo de muestras retenidas, correlación de los
resultados para deferentes características de la muestra, la participación
en comparaciones interlaboratorios o en programas de ensayos de
aptitud, entre otros.
Las Comparaciones Interlaboratorios o los Programas de Ensayos de
Aptitud son cada día más utilizadas por los diferentes laboratorios en el
mundo, ya sea por decisión voluntaria o como un requisito incluido en las
políticas de acreditación de diferentes organismos de acreditación, tales
como la Cooperación Internacional de Acreditación de Laboratorios (ILAC),
la Cooperación Inter Americana de Acreditación (IAAC), el Organismo
Nacional de Acreditación de Colombia (ONAC), entre otros.
En Colombia, el Grupo Colombiano de Identificación Humana y Genética
Forense desde el año 2001 hasta la fecha ha realizado de forma
ininterrumpida Ejercicios de Control de Calidad Interlaboratoriales; a
partir del año 2006, con la adopción de las disposiciones contempladas en
la Ley 721 de 2001, se ha designado la actividad del diseño y ejecución del
Ejercicio Colombiano Control de Calidad Interlaboratorios a un Laboratorio
Nacional de Referencia seleccionado entre los laboratorios del país que
cumplan los requisitos establecidos. En la actualidad, este ejercicio se
realiza anualmente con la participación de un promedio de 25 laboratorios
pertenecientes a 8 laboratorios latinoamericanos, permitiendo de esta
manera brindar una excelente herramienta para evaluar la calidad de los
ensayos de estos laboratorios a la vez que permite a todos los
participantes acceder a diferentes programas de capacitación académica
en temas de interés en los diferente encuentros realizados para la
discusión de los resultados.
Tribunal de Justiça, Ministério Público e Universidade do Estado do Rio
de Janeiro, Brasil: Uma Visão Geral sobre os 18 anos do Programa
Estadual para Investigação de Paternidade, Criminal e Identificação por
DNA
Patrícia M. Domingues, João Marreiro, Cristiane S. Domingues, Sílvia
Loiola, Celso C. Tavares, Dayse A. da Silva e Elizeu F. de Carvalho
Unidade de Desenvolvimento Tecnológico - Laboratório de Diagnósticos
por DNA, Instituto de Biologia, Universidade do Estado do Rio de Janeiro,
Brasil.
O Programa DNA da Universidade do Estado do Rio de Janeiro foi criado,
em 1996, em parceria com o Tribunal de Justiça e o Ministério Público do
Estado do Rio de Janeiro, com a finalidade de possibilitar à população do
Rio de Janeiro a realização de perícias por DNA com elevadas qualidade e
eficiência a um custo inferior ao praticado no mercado brasileiro, uma vez
que somente parcela diminuta dos envolvidos em investigações de
paternidade, ou de outros vínculos genéticos, podia pagar pelas perícias, o
que, face à falta dessa prova técnica de alta relevância, tornava os
processos judiciais ainda mais lentos. Tampouco havia no sistema de
Segurança Pública do Rio de Janeiro um laboratório que realizasse perícias
de DNA, como ocorre nos dias atuais. O Programa DNA não se destina
somente à camada da população que faz jus à justiça gratuita e também
atende a iniciativa privada. Os esforços conjuntos levaram a realização de
cerca de 70 mil perícias de vínculo genético, paternidade em sua maioria,
e número superior a 1000 perícias associadas a diversos tipos de crimes,
ou à identificação post-mortem, através da aplicação de técnicas de
análise do DNA genômico ou do DNA mitocondrial. No simpósio serão
apresentados detalhes das rotinas de coleta de amostras biológicas e
laboratoriais, bem como casos de investigação criminal e de vínculos
genéticos que merecem especial atenção da comunidade científica face às
suas peculiaridades.
Estudios de Validación de mezclas de ADN con el Sistema PowerPlex®
Fusion 6-dye que incluye 23 STR y 3 Y-STR
Pablo Martín(1), Lourdes Fernández de Simón
José Farfán (1), and Antonio Alonso (1)
(1)
, Gracia Luque
(1)
, María
(1) Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses. Servicio de
Biología. José Echegaray 4. 28232 Las Rozas. Madrid .Spain
La idea de este proyecto (IDNADEX: Improving DNA Data EXchange,
presentado en octubre de 2011 en el programa ISEC) fue concebida como
una forma efectiva de implementar el nuevo estándar Europeo (ESS) de
12 marcadores STR adoptado por el Consejo de la Unión Europea en 2009,
manteniendo una compatibilidad e intercambio de información eficaz con
los perfiles históricos de ADN registrados en la base de datos nacional de
ADN en España (unos 200.000 perfiles de ADN) basados principalmente en
los 13 STRs del sistema CODIS y los marcadores D19S433 y D2S1338. Con
este objetivo propusimos probar y validar un sistema de amplificación
para el análisis simultáneo de 21 marcadores STR que abarcan tanto los
STR del estándar CODIS como los STR del estándar Europeo, así como tres
STRs adicionales (D19S433, D2S1338 y SE33) incluidos en diferentes kits y
muy usados en las bases de datos nacionales de ADN. En 2013,
empezamos las primeras pruebas con el prototipo PowerPlex ® Fusión 6dye, desarrollado por Promega Corporation, que contiene 27 loci en
respuesta a la recomendación del Grupo de Trabajo para la ampliación de
los Loci del estándar CODIS. Este prototipo incluye nuestra propuesta de
21 marcadores STR autosómicos más dos Pentas (Penta D & Penta E) y
tres marcadores del cromosoma Y (DYS391, DYS570 y DYS576). Esta
presentación describe los estudios de validación realizados con el sistema
PowerPlex® Fusion 6-dye usando un analizador genético 3500 para la
detección de fragmentos con especial énfasis en el análisis de mezclas de
ADN. El análisis de mezclas de ADN incluyó dos series mezclas de ADN (1
ng o 3 ng de ADN total) con proporciones relativas de 1:1, 2:1, 5:1, 8:1,
10:1, 15:1, y 20:1 de mujer (componente mayoritario) / varón
(componente minoritario) y 15 mezclas de fluidos biológicos de 2 o 3
contribuyentes
de
ejercicios
de
suficiencia
de
GEDNAP
(http://www.gednap.de ) y GHEP-ISFG (http://www.gep- isfg.org). El
estudio demostró que la combinación de los STRs autosómicos e Y-STRs
del sistema PowerPlex® Fusion 6-dye maximiza la información obtenida a
partir de mezclas de ADN en relación tanto al número total de
contribuyentes, como al número especifico de contribuyentes varones.
Por otro lado, el sistema PowerPlex® Fusion 6-dye proporcionó un
rendimiento general equivalente a otros kits de análisis de STRs, pero con
un mayor poder de discriminación que reduce la posibilidad de
coincidencias fortuitas durante el intercambio de datos de ADN entre las
bases de datos nacionales de ADN.
Identificación humana mediante uso de ADN mitocondrial recuperado
de piel y vello púbico
María Eugenia Ambriz Franco Romero1, Mariana Ruiz Hernández1, Raúl
Flores León1, Yadira Lizethe López Ramírez1, Mauro López Armenta1
1
Laboratorio de Genética, Instituto de Ciencias Forenses del Tribunal
Superior de Justicia del Distrito Federal, México D.F
La identificación humana mediante pruebas de ADN es práctica recurrente
en casos donde otras disciplinas han sido superadas. El uso de marcadores
autosomales de ADN suele hacer diferencia sustancial frente a sistemas
que carecen de robustez estadística, sin embargo, es el daño al ADN, la
cantidad de muestra y los fenómenos de contaminación objeciones claras
para ser empleados por estos sistemas. La investigación que se presenta
tiene por intención señalar los aportes que da el uso del ADN mitocondrial
en casos de muestras complejas, particularizando en muestras con ADN
de mala calidad y/o carentes de núcleo; pero además, señalar la
importancia que tiene la cadena de custodia en el resguardo. La
perfilación mediante ADN mitocondrial que presentamos fue realizada en
muestras de piel y vello púbico recuperadas de ropa interior
pertenecientes a una víctima de la que su cuerpo fue conservado en
formol, superando con ello las vicisitudes de cantidades mínimas críticas
de muestra y contaminación cruzada. El análisis de ADN mitocondrial fue
realizado por electroforesis capilar con POP 4 al tiempo de corrimiento
electroforético de STRs demostrando que no existe contraposición entre
secuenciación y análisis electroforético en un mismo equipo, por lo que el
uso de ADN mitocondrial sigue siendo una alternativa importante en
materia de identificación aun en laboratorios que cuentan con un sólo
analizador genético.
Palabras clave: ADN mitocondrial, marcadores autosomales, piel, vello
púbico, identificación, formol.
Análisis de ADN de tejido conservado por la técnica de salado
procedente de cuerpos con inicio de putrefacción.
Mariana Ruiz Hernández1, María Eugenia Ambriz Franco Romero1, Raúl
Flores León1, Yadira Lizethe López Ramírez1, Mauro López Armenta1
1 Laboratorio de Genética, Instituto de Ciencias Forenses del Tribunal
Superior de Justicia del Distrito Federal, México D.F
La recuperación de cuerpos o restos humanos putrefactos trae consigo
dificultades inminentes para su identificación, en tales circunstancias el
empleo de técnicas tradicionales como dactiloscopia, antropología,
odontología pueden ser superadas y no es sino a través de pruebas de
ADN que la identificación de una persona puede ser conseguida. En el
análisis de ADN de cuerpos y/o restos putrefactos es práctica común el
empleo de muestras óseas y aunque novedosos métodos de extracción se
han implementado para este fin, son los costos en equipo e insumos una
limitante en laboratorios emergentes que se dedican a la identificación
humana. Nuestra investigación se centra en el análisis de ADN procedente
de muestras de tejido no óseo conservadas con sal procedentes de
cuerpos con inicio de putrefacción y putrefacción avanzada mediante
extracción con base en sílica, encontrando que el uso de tejido blando
salado no sólo es una alternativa viable sino que permite su conservación
para estudios futuros, dejando abierto el espectro de nuevos sistemas de
identificación que son necesarios en caso complejos. A fin de evaluar la
viabilidad de las muestras fueron empleados los sistemas de identificación
genética Identifiler, PowerPlex Fusión System y PowerPlex Y23 System lo
que deja en claro el potencial que dicho procedimiento de análisis tiene
con sistemas tradicionales de identificación así como con sistemas de
última generación.
Palabras clave: Análisis de ADN, cuerpos putrefactos, conservación,
almacenamiento, cadena de custodia
IMPORTANCIA DE REALIZAR UNA EXTRACCIÓN DIFERENCIAL
Verónica Villegas
Laboratorio de la policía del Ecuador
En casos de agresiones sexuales en donde se sospecha de dos individuos
descendientes de la misma línea paterna, el estudio del Haplotipo de
Cromosoma Y resulta ineficaz, por lo que se debe realizar un análisis de
perfiles genéticos autosómicos para individualizar a un sospechoso pero
debido a la gran cantidad de células epiteliales presentes en la muestra
correspondientes a la víctima enmascaran a las células espermáticas
necesarias para resolver el caso.
Al Laboratorio de Genética Forense de la Policía Judicial de Ecuador, llega
un caso de violación con muerte en el cual se presume la culpabilidad de
dos sospechosos en el entorno familiar. Las evidencias que se reciben en
el Laboratorio fueron: un hisopado vaginal, un hisopado rectal, una placa
con frotis vaginal y una placa con frotis rectal. Se utilizó el material
genético obtenido de las placas debido a la imposibilidad de contar con las
muestras de hisopados por haberse consumido en su totalidad en análisis
previos. Para desprender las células de la placa se utilizó un hisopo con la
punta del aplicador recubierta con fibras cortas de nylon que están
dispuestas de una manera perpendicular, donde el hisopo utilizado no
tiene un núcleo absorbente interno para atrapar la muestra y de esta
manera permitir la completa elución de todo el material celular. Se extrajo
el ADN de los hisopados de las placas mediante la técnica de extracción
diferencial que consiste en separar la fracción masculina de la fracción
femenina y lograr la amplificación de dos perfiles genéticos autosómicos
completos.
Se realizó la extracción diferencial con el kit Diferex ™ de Promega y se
amplificaron los extraídos en solución con el kit NGM de la Casa Comercial
Applied Biosystems, y con el kit Power Plex Y23 de la Casa Comercial
Promega. De las fracciones se obtuvo un perfil femenino completo y un
perfil masculino completo, así como un Cromosoma Y pudiendo de esta
manera realizar una discriminación de los posibles sospechosos que
compartían el mismo cromosoma Y heredado por línea paterna.
Efeitos de 17 anos de sepultamento na recuperação de informação
genética a partir de amostras ósseas
Freitas, JM e Chemale, G.
Laboratório de Genética Forense do Instituto Nacional de Criminalística,
Diretoria Técnico-Científica, Polícia Federal, Brasil.
A análise de DNA a partir de amostras ósseas é uma importante
alternativa para a identificação de pessoas desaparecidas, uma vez que
estas amostras são frequentemente o único material biológico disponível.
Condições ambientais, incluindo características do solo, temperatura e
umidade são fundamentais para a qualidade do resultado, mas o período
de tempo de exposição a tais condições confere maior impacto na
recuperação do DNA utilizável para genotipagem. Neste trabalho,
apresentamos um estudo de caso comparando os resultados obtidos a
partir de dois esqueletos, doravante denominados AXP e IXP. Os restos
mortais foram exumados pela primeira vez em 1996 e amostras retiradas
dos fêmures direitos foram enviadas para um laboratório privado para
identificação por DNA. Na ocasião, não foi possível a obtenção de
informação genética a partir de amostras AXP e foram obtidas apenas
sequências parciais do genoma mitocondrial de amostras de IXP, que
indicaram que a amostra era proveniente de um indivíduo pertencente à
mesma linhagem materna da amostra de referência encaminhada
(suposta mãe de dois irmãos ausentes). Apesar dos resultados não
conclusivos no exame de DNA, IXP foi considerado identificado e, por
associação, AXP, uma vez que ambos os esqueletos foram sepultados lado
a lado e investigações realizadas indicaram que os irmãos haviam sido
enterrados juntos.
O caso foi considerado encerrado e os esqueletos foram enterrados
novamente, com exceção de fragmentos dos dois fêmures direitos, que
foram mantidos em ambiente controlado para eventuais exames
adicionais.
Em 2013, a família solicitou a identificação genética de AXP e uma
confirmação da identificação do IXP. Os restos mortais foram novamente
exumados e novas tentativas de identificação de DNA foram feitas em
nosso laboratório. Tivemos acesso a amostras ósseas dos dois fêmures
esquerdo tiradas durante a segunda exumação em 2013 e também às
amostras de fêmures direitos já mencionadas antes.
As amostras de osso foram pulverizadas e extração de DNA realizada
através de desmineralização total, utilizando um protocolo desenvolvido
internamente no laboratório. Amostras de DNA foram quantificadas por
qPCR (kits Quantifiler Human e Plexor®HY), submetidos a seqüenciamento
de mtDNA (regiões HVI e HVII) e tipagem de microssatélites autossômica
(PowerPlex®ESX17).
Foram observadas diferenças dramáticas na quantidade e qualidade do
material genético entre as amostras recuperadas em 1996 e aquelas
recuperadas em 2013. Nenhuma informação genética interpretável foi
obtida a partir de amostras de AXP recuperadas em 2013, porém foram
obtidos perfis de STRs completos e seqüências de mtDNA parciais a partir
de amostras do mesmo indivíduo, recuperadas em 1996. Perfis parciais de
STRs e seqüências parciais de mtDNA foram obtidas nas amostras IXP
recuperadas em 1996 e 2013, mas o número de locos e a qualidade das
seqüências de mtDNA foram maiores para as amostras recuperadas em
1996 e mantidas em condições controladas. IXP e AXP foram finalmente
geneticamente identificados como os dois irmãos ausentes que
desapareceram em 1972.
Financiado por: Fundação de Amparo à Pesquisa do Distrito Federal
(FAPDF) e Departamento de Polícia Federal (DPF).
ANALISIS GENETICO EN CASOS DE VICTIMAS DESMENBRADAS EN EL
PUERTO DE BUENAVENTURA- COLOMBIA
Martha L. Camargo1,* M.S.
National Institute of Legal Medicine and Forensic Science, Forensic
Genetics Laboratory. Cali-Colombia
El puerto de Buenaventura en el pacífico Colombiano está situado tan
estratégicamente que ha permitido que confluyan actividades ilícitas
relacionadas con narcotráfico, contrabando, disputas entre grupos al
margen de la ley como guerrilla, paramilitares y bandas criminales
(Bacrim), que en la actualidad sitúan a Buenaventura como una de las
ciudades más violentas del País. El grado de violencia e intimidación se ha
visto marcado actualmente con la práctica de tortura con
desmembramiento de víctimas vivas, lo cual ha creado escenas del crimen
denominadas “bajamar y casas de pique”, y aumento en las cifras de
personas desparecidas, homicidios, recuperación de cuerpos
desmembrados y familias desplazadas.
Desde el punto de vista del laboratorio de genética del INMLyCF Regional
suroccidente, se ha presentado un aumento en el número de solicitudes
para análisis de uniprocedencia entre partes corporales recuperadas de
diferentes escenas, para determinar si pertenecen a una o más víctimas
desmembradas.
La mayoría de las muestras recibidas en el Laboratorio de Genética del
INMLyCF correspondieron a restos óseos, fragmentos de tejidos blandos,
filamentos pilosos y piezas dentales, aunque en algunos casos fue posible
trabajar a partir de muestras de sangre en tarjetas FTA tomadas de partes
corporales frescas. Para la extracción y purificación de ADN de muestras
óseas y dentales se utilizó el método ICMP modificado (sílice) a partir del
kit QIAquick PCR Purification de QIAGEN y para extracción de sangre en
FTA el protocolo con chelex 100 al 20%; posteriormente se amplificaron
las muestras con los kit´s de PCR Power plex 16 HS , ESX 17 y CS7 de
PROMEGA y se tipificaron en el ABI PRISM 3130 utilizando genemapper
para asignación alélica de STR´s obteniendo perfiles genéticos
reproducibles. Los cálculos se realizaron a través de LR por cotejo directo.
A mayo de 2014 se analizaron un total de 51 muestras de fragmentos
corporales relacionadas con 14 casos radicados en el laboratorio, de los
cuales se obtuvo un total de 9 perfiles correspondientes a 9 víctimas
desmembradas individualizadas, de las cuales 7 víctimas eran hombres, 2
mujeres con edades entre 16 y 30 años de edad.
Los últimos análisis genéticos han estado orientados a apoyar las
investigaciones criminalísticas por cuanto, las autoridades pretenden
relacionar las escenas del crimen (casas de pique) con el proceso de
tortura y homicidio de las víctimas y con los sindicados a partir de
elementos materiales probatorios recolectados, como prendas, fluidos
biológicos y evidencia traza.
Palabras claves: víctimas desmembradas, uniprocedencia, Buenaventura.