ISO 21528-2:2004
Microbiology of food and animal feeding stuffs_
Horizontal method for the detection and enumeration of
Enterobacteriaceae – Part 2: Colony count method
“This part of ISO 21528 specifies a method without pre-enrichment, for the enumeration of
Enterobacteriaceae. It is applicable to: products intended for human consumption and the feeding of
animals; and environmental samples in the area of food production and food handling. Enumeration is
carried out by counting in a solid medium after incubation at 37ºC. This technique is recommended when
the number of colonies sought is expected to be more than 100 per milliliter or per gram of test sample.“
Proceder à preparação da amostra de acordo com a ISO 6887-1.
Preparação da suspensão inicial da amostra numa proporção de 1:10;
Pesar 10/25g da amostra e juntar 90/225mL de Maximum Recovery
Broth (610077; 412400) ou Água Peptonada tamponada (611014;
414030; 414020) e se necessário proceder a diluições sucessivas.
Inocular pelo método de incorporação 1 mL, da suspensão mãe e
respetivas diluições (em casos de amostras muito contaminadas,
selecionar para inoculação as 2 últimas diluições) e juntar meio de Violet
Red Bile Glucose Agar - VRBG (610059; 402540). Fazer em duplicado.
Incubar a 37ºC/24±2h
Identificar e contar até 150 colónias características, colónias rosa a
vermelhas ou purpura (com ou sem halo de precipitado). Selecionar
5 colónias típicas e re-isolar em Nutrient Agar (610036; 10044)
incubar a 37ºC/24±2h e proceder à confirmação de colónias pelos
seguintes testes:
Teste fermentativo: teste de fermentação
da Glucose usando o meio Purple Glucose
Agar (610194; 24151) e incubar a
37ºC/24±2h.
Resultado positivo: Glucose +
Teste Oxidase (88029):
teste para a presença da
citocromo oxidase.
Resultado positivo:
Oxidase negativa