sanidade
Texto: Susana N. de Macedo
Cristina S. Cortinhas
Marcos V. dos Santos
Cultura microbiológica do
leite na fazenda: uma nova
ferramenta para o
diagnóstico de mastite
O tratamento para os casos de mastite clínica varia de acordo com o patógeno, que somente
pode ser identificado após a realização da cultura microbiológica do leite. Nestes casos de
mastite, os sistemas de diagnóstico microbiológico na fazenda possibilitam a tomada de decisão adequada quanto à utilização ou não de terapia antimicrobiana. Se as amostras forem
coletadas e processadas de forma estéril a cultura microbiológica na fazenda apresenta boa
acurácia e é uma ferramenta para a elaboração de uma terapia adequada para cada caso de
mastite.
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Introdução
deve ser tomada com base em informa-
tivos geralmente apresentam alta taxa
A mastite é um dos grandes garga-
ções específicas sobre o agente, a vaca
de cura espontânea, entretanto, algu-
los da pecuária leiteira, motivo de redu-
e o tipo de droga a ser usado. Para es-
mas cepas podem apresentar fatores de
ção na qualidade e quantidade de leite
tabelecer um esquema de tratamento
virulência que aumentam a persistên-
produzido. Caracterizada como proces-
adequado é fundamental conhecer o
cia na glândula mamária. Nestes casos,
so inflamatório da glândula mamária
patógeno causador a fim de escolher
pode ser necessário o uso de protocolos
causado por microrganismos, a mastite
um antimicrobiano com um espectro
de tratamento com maior duração.
é a doença responsável pela utilização
de atividade apropriado.
Sendo assim, a terapia antimicrobia-
de grande parte dos antibióticos em
Os objetivos do tratamento da mas-
na deve ser utilizada somente em casos
rebanhos leiteiros. No mundo inteiro,
tite são a prevenção da doença sistê-
de mastite causada por patógenos que
é crescente a pressão para a redução
mica, o rápido retorno da vaca para a
respondem ao tratamento com antibió-
do uso de antibióticos em animais de
ordenha e a produção de leite comer-
ticos. Dessa forma, descarta-se menos
produção, pois existe risco de que o uso
cializável. Para o estabelecimento de
leite com resíduo e o custo por caso de
irrestrito destes antibióticos pode ser
um protocolo de tratamento efetivo,
mastite pode reduzir. Para atingir esse
responsável por aumento da resistên-
é necessária a avaliação de fatores de
objetivo, pode ser utilizado um sistema
cia aos antimicrobianos em medicina
risco, tais como a idade e o histórico de
de análise de cultura microbiológica do
humana. Desta forma, faz-se necessá-
mastite da vaca, além do conhecimento
leite na fazenda. O princípio básico des-
rio o conhecimento de informações
do provável patógeno. Em geral, quan-
se método é limitar o uso de antimicro-
que orientem os técnicos em relação à
do a mastite é causada por patógenos
bianos e, consequentemente, reduzir a
tomada de decisões quanto aos proto-
Gram-positivos, é necessário tratamen-
quantidade de leite descartado, além
colos de tratamento da mastite a serem
to intramamário com antibióticos. Já
de estabelecer uma terapia de duração
utilizados.
para a mastite causada por patógenos
adequada para cada caso.
A cultura microbiológica do leite na
Gram-negativos, o tratamento com
fazenda é uma técnica já utilizada em
antibióticos pode não ser necessário.
Terapia da vaca seca seletiva
outros países que, de forma geral, iden-
Também há casos que o próprio siste-
Desde o desenvolvimento do plano
tifica a presença do microrganismo no
ma imune da vaca pode combater o pa-
de controle da mastite nos anos 1960,
quarto mamário e fornece determinada
tógeno, em particular nos casos em que
tem sido recomendada a prática de tra-
classificação, importantes na tomada
a cultura microbiológica é negativa. Em
tar todas as vacas na secagem com um
de decisões quanto à utilização de tra-
um estudo realizado no Canadá, 43,9%
antibiótico intramamário. O objetivo da
tamentos. Especificamente, a cultura
de mais de 3 mil amostras de leite de
terapia da vaca seca é eliminar infec-
microbiológica de leite na fazenda au-
vacas com mastite clínica apresentaram
ções existentes e prevenir novas infec-
xilia nas decisões de tratamento para
resultado negativo na cultura microbio-
ções durante o período seco. As infec-
casos de mastite clínica e na utilização
lógica. No Brasil, o índice de amostras
ções intramamárias que ocorrem neste
da terapia seletiva da vaca seca, além
negativas é de aproximadamente 25%.
período contribuem significativamente
de identificar determinadas espécies de
Em um estudo com sete antimicro-
para o aumento no número de quartos
bianos para tratamento de mastite, ape-
infectados na lactação seguinte e para
nas os patógenos Gram-positivos apre-
a consequente redução da produção de
Decisões de tratamento de
sentaram taxa de cura que justificasse
leite. A terapia da vaca seca consiste na
mastite clínica
o tratamento com antibióticos. Já para
infusão intramamária de antibiótico de
A mastite clínica pode ser causada
os casos de mastite clínica, em cerca de
longa ação específico para esse fim, em
por grande diversidade de bactérias e
50 a 80% dos casos não foi necessário
cada quarto mamário, após a última or-
a utilização de uma terapia apropriada
o uso de antimicrobianos. As infecções
denha antes da secagem.
para esses casos é uma decisão que
causadas por patógenos Gram-nega-
microrganismos.
Com o uso da terapia da vaca seca
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sanidade
Cultura microbiológica do leite na fazenda:
uma nova ferramenta para o diagnóstico de mastite
Nos casos de infecções crônicas, nem sempre a
terapia da vaca é efetiva, mas é preciso realizar
os procedimentos de forma adequada, pois, caso
contrário, podem ocorrer novas infecções.
crobiológica na fazenda e nenhum antibiótico é aplicado até que se saiba o
resultado (geralmente 24 horas). Se o
caso de mastite for classificado como
grau 3, o animal é tratado com protocolo específico para casos de mastite agu-
há aumento da taxa de cura em relação
seguir o protocolo de tratamento de
aos tratamentos realizados durante a
forma correta e respeitar a duração de
lactação e diminuição do custo, pois
pelo menos 60 dias do período seco.
não há descarte de leite com resídu-
da e a cultura do leite não é realizada.
Os procedimentos para a realização
de uma cultura microbiológica bem
sucedida se iniciam com a coleta de
os de antibióticos. Se for respeitado o
Metodologias de cultura na
leite, do quarto mamário com mastite,
período seco de pelo menos 60 dias é
fazenda
antes da ordenha e de forma asséptica.
mínimo o risco de ocorrer resíduos no
Para o sucesso da utilização da cul-
Para tanto, são necessários frascos es-
leite após o parto. Porém, é crescente a
tura de leite na fazenda faz-se necessá-
téreis, algodão ou papel e álcool 70%,
preocupação com o uso indiscriminado
rio conhecer a classificação da mastite
para desinfecção dos tetos. A cultura
de antibióticos em animais de produ-
clínica segundo o seu o grau de gravi-
microbiológica do leite proveniente de
ção e o uso da terapia da vaca seca em
dade, descrita na tabela 1.
um quarto mamário pode apresentar
todos os animais tem sido questionado
De forma prática, se o caso de mas-
crescimento de um ou no máximo dois
em alguns países nos quais o controle
tite for classificado com gravidade de
agentes causadores de mastite, mas se
de mastite contagiosa já atingiu pa-
grau 1 ou 2 uma amostra de leite é
houver o crescimento de três tipos de
drões de excelência. Nestes países, uma
coletada para realização da cultura mi-
microrganismos, a amostra deve ser
alternativa é o uso da terapia da vaca
seca seletiva. Este método consiste na
Tabela 1. Escala de classificação da mastite quanto ao grau de gravidade da
mastite clínica.
aplicação do tratamento da vaca seca
Grau de severidade
Sintomas clínicos
em apenas algumas vacas ou quartos,
1 (leve)
Leite anormal
baseando-se na cultura microbiológica
2 (moderado)
Leite anormal + alterações no úbere
3 (grave)
Leite anormal + alterações no úbere + vaca doente
ou na CCS. Com a realização da cultura microbiológica do leite na fazenda,
é possível selecionar quais animais devem receber o tratamento na secagem
e quais podem ser tratadas somente
com o selante de tetos.
Os resultados da adoção dessa prática são evidenciados num curto prazo
em rebanhos com alta incidência de
mastite contagiosa. Nos casos de infecções crônicas, nem sempre a terapia da
vaca seca é efetiva, mas é preciso realizar os procedimentos de forma adequada, pois, caso contrário, podem ocorrer
novas infecções. Portanto, é necessário
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Figura 1. Petrifilme para contagem de aeróbios
sanidade
Cultura microbiológica do leite na fazenda:
uma nova ferramenta para o diagnóstico de mastite
Figura 2. Petrifilme para contagem
de coliformes
considerada contaminada.
Figura 3. Estufa para incubação
um diagnóstico presuntivo do agente
Atualmente, as metodologias mais
causador. Nesta metodologia são utili-
utilizadas para a cultura microbiológica
zadas placas descartáveis bipartidas ou
na fazenda são a por Petrifilme (Canadá)
tripartidas com os seguintes meios de
(Figura 4) e a em meios de cultura (Min-
cultura:
nesota – EUA) (Figura 7). A metodologia
• Placas bipartidas divididas em
canadense consiste na inoculação de
meio de cultura Factor e MacConkey
um microlitro de leite diluído (1:10), em
seletivos para crescimento de bactérias
placas petrifilme (3M) para contagem
Gram-positivas e Gram-negativas, res-
de aeróbios (Figura 1) e para a conta-
pectivamente (Figura 5).
gem coliformes (Figura 2), incubação
• Placas tripartidas divididas em
em estufa (Figura 3) à 35ºC por 24hs e
meio de cultura Factor, TKT modificado
leitura manual. Nesta metodologia os
e MacConkey seletivos para crescimen-
agentes causadores de mastite são clas-
to de bactérias Gram-positivas, bacté-
sificados como Gram-positivos, Gram-
rias do gênero estreptococos e bacté-
-negativos ou sem crescimento, com
rias Gram-negativas, respectivamente
sensibilidade (identificação dos positi-
(Figura 6).
vos) de 93,8% e valor preditivo negativo
(identificação de negativos) de 89,7%.
Após a coleta, as amostras de leite
são inoculadas em toda superfície das
A metodologia americana (Minne-
placas bi ou tripartidas com o auxílio de
sota Easy Culture System II) é realizada
um swab estéril, são incubadas à 37ºC
em meios de culturas que permitem a
em estufa (Figura 3) e a leitura é realiza-
identificação de bactérias Gram-positi-
da após 24hs. Para o sistema Minnesota
vas, Gram-negativas e, dependendo do
Easy Culture System II a sensibilidade
meio de cultura utilizado, é possível ter
e valor preditivo negativo são 97,9% e
96,4%, respectivamente.
Figura 4. Metodologia utilizada para a cultura microbiológica na fazenda por
petrifilme (Canadá).
1o passo
Leitura Petrifilm para coliformes
De forma geral, a grande diferença
entre os sistemas de cultura canadense
e americano é a durabilidade dos meios
de cultura. Os petrifilmes têm uma du-
< 20 colônias
> 20 colônias
rabilidade (meia vida) de um ano, en-
Gram-negativo
quanto a durabilidade das placas bipar-
Não tratar
tidas ou tripartidas é de seis semanas.
Desta forma, em fazendas de pequeno
2o passo
Leitura Petrifilm para aeróbios
> 5 colônias
Gram-positivo
Tratamento com antibiótico de acordo com o
protocolo da fazenda
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< 5 colônias
Não tratar;
Baixa contagem de
bactérias
porte, a utilização de placas petrifilme
torna-se mais indicada.
Uma das dificuldades para a implementação de um sistema de cultura microbiológica do leite na fazenda é a necessidade de um local apropriado para
o laboratório. É imprescindível que o
Figura 5. Placa bipartida para
identificação de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas
Figura 6. Placa tripartida para identificação de Gram-negativas, Gram-positivas e estreptococos.
Pesquisadores americanos avaliaram o uso da cultura microbiológica
do leite em uma fazenda com rebanho
leiteiro de 600 vacas que apresentava
Bactérias Gram-positivas
(Factor)
Bactérias Gram-negativas
(MacConkey)
Bactérias
Gram-negativas
(MacConkey)
Bactérias
Gram-positivas
(Factor)
Bactérias do gênero
estreptococcos
(MTKT)
mesmo esteja localizado em área limpa,
coletadas e processadas de forma esté-
bem iluminada, com temperatura es-
ril para que não haja contaminação du-
tável e longe de áreas de preparação e
rante os procedimentos e os resultados
estocagem de alimentos. Outra dificul-
sejam confiáveis, por isso, a presença de
dade é a necessidade de equipamen-
uma pessoa treinada para ler as placas
tos: um freezer, um refrigerador, uma
e avaliar os resultados é um fator deter-
estufa, em uma área de trabalho de fácil
minante para o sucesso da implantação
acesso. As amostras de leite devem ser
desta metodologia.
problemas com mastite clínica e excessivo uso de antibióticos. Para cada caso
clínico foram coletadas duas amostras,
sendo uma para análise na fazenda pelo
método canadense (Petrifilm) e outra
enviada para um laboratório especia-
As amostras de leite
devem ser coletadas e
processadas de forma
estéril para que não
haja contaminação
durante os procedimentos e os resultados
sejam confiáveis.
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Cultura microbiológica do leite na fazenda:
uma nova ferramenta para o diagnóstico de mastite
Figura 7. Metodologia utilizada para a cultura microbiológica na fazenda em meios de cultura (Minnesota – EUA).
Vaca com mastite clínica
Lote de tratamento
Febre
1)Banamine
2) Fluidos orais
3) Monitoramento
Exame físico
Lote de vacas com mastite
1) Aguardar resultado da
cultura microbiológica
2) Monitoramento
Sem febre
Cultura microbiológica
Gram-positiva
Gram-negativa
Sem crescimento
Streptococcus agalactiae
Staphylococcus aureus
Staphylococcus sp.
Streptococcus ambientais
Coliformes
Tratamento com
antibiótico intramamário
em todos os quartos;
Monitoramento
microbiológico;
Tratamento com
antibiótico intramamário;
Monitoramento
microbiológico; Descarte
Tratamento com
antibiótico intramamário;
Monitoramento
microbiológico; Descarte
Tratamento com
antibiótico intramamário
Não tratar com
antibióticos; Banamine
(se tiver febre);
Monitoramento
Quarto perdido
Resposta
Não tratar com
antibióticos; Banamine
(se tiver febre);
Monitoramento
Descarte
Retorno para o rebanho
lizado. O treinamento adequado do
ou não de terapia antimicrobiana. Se
mastite da vaca, para que seja possível
funcionário para a correta interpretação
as amostras forem coletadas e proces-
recomendar a melhor alternativa para
dos resultados do Petrifilm foi essencial
sadas de forma estéril, independente-
cada caso: tratar ou não com antimicro-
para o correto diagnóstico. O uso da
mente do método utilizado (Minnesota
bianos, segregar, secar ou descartar.
cultura microbiológica na fazenda foi
ou por Petrifilm), a cultura microbiológi-
uma ferramenta efetiva para a adoção
ca na fazenda apresenta boa acurácia e
de um protocolo de tratamento racio-
é uma ferramenta para a elaboração de
nal e, consequentemente, redução do
uma terapia adequada para cada caso
custo com antimicrobianos e descarte
de mastite. Entretanto, qualquer que
do leite de US$ 264 para US$ 90 por
seja o sistema utilizado, é importante
caso de mastite.
submeter rotineiramente amostras de
leite para diagnóstico microbiológico
Conclusão
em laboratórios especializados, para o
O tratamento para os casos de mas-
controle de qualidade da técnica utili-
tite clínica (de leve a moderada ou graus
zada na propriedade
1 e 2) varia de acordo com o patógeno,
A adoção de uma terapia diferen-
que somente pode ser identificado
ciada para cada caso de mastite dimi-
após a realização da cultura microbioló-
nui os custos com antibióticos e com
gica do leite. Nestes casos de mastite, os
o descarte do leite e eleva a eficácia do
sistemas de diagnóstico microbiológico
tratamento. A interpretação da cultura
na fazenda possibilitam a tomada de
de leite deve estar associada aos fato-
decisão adequada quanto à utilização
res de risco, como idade e histórico de
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Susana Nóri de Macedo
Mestranda em Nutrição e Produção Animal
FMVZ - USP
Cristina Simões Cortinhas
Mestranda em Nutrição e Produção Animal
FMVZ - USP
Marcos Veiga dos Santos
Professor Associado da Faculdade de
Medicina Veterinária e Zootecnia,
Universidade de São Paulo (FMVZ/USP)