51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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Palavras-chave: cana-de-açúcar, promotor, tecido-especificidade
Hoshino, AA1; Maia, IG1; Gimenes, MA1, 2
1
Departamento de Genética, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP. 2Centro de Pesquisa e
Desenvolvimento de Recursos Genéticos Vegetais, Instituto Agronômico de Campinas, Campinas, SP.
Isolamento e caracterização
parcial da região promotora
de um gene com expressão tecidoespecífica em raiz de cana-de-açúcar
A cana-de-açúcar é uma espécie de grande importância econômica pela produção de açúcar e álcool
e, o Brasil é o seu maior produtor mundial. A produção de plantas geneticamente modificadas tem
permitido o melhoramento de genótipos pela introdução de genes de interesse e pelas alterações nos
padrões de expressão dos mesmos. O promotor é uma região de grande importância na produção de
transgênicos por ser o processador central da regulação de um gene contendo os sítios de ligação para
as RNA polimerases e fatores de transcrição, ele determina a freqüência em que um gene é transcrito.
Visando identificar genes com expressão tecido-específica em cana de açúcar para a posterior clonagem
de suas sequências promotoras, uma análise “in silico” no banco de sequências expressas (EST) do
projeto SUCEST foi realizada. Nesta análise foram selecionados 15 candidatos para a validação da
tecido-especificidade por RT-PCR e dentre esses, dois tiveram confirmada a expressão específica em
raiz. Oligonucleotídeos foram desenhados com base na seqüência de um dos ESTs validados e os
mesmos foram utilizados no isolamento da região promotora pela técnica de TAIL-PCR. Esta consiste
na amplificação de regiões adjacentes à seqüência conhecida por meio de iniciadores arbitrários. Um
fragmento de aproximadamente 400 pb foi amplificado empregando DNA genômico de cana-deaçúcar e a sua seqüência de nucleotídeos determinada. O alinhamento da referida seqüência com a
seqüência do EST disponível no SUCEST demonstra que a mesma está situada a montante (5’) do
transcrito usado para o desenho dos oligonucleotídeos. Tal seqüência não apresenta similaridade com
seqüências depositadas nos bancos do SUCEST ou GenBank, tratando-se portanto de uma porção inédita
do genoma da cana-de-açúcar ainda não caracterizada. Análises em bancos de dados de seqüências
regulatórias indicam a presença de vários sítios regulatórios putativos. Novos oligonucleotídeos estão
sendo desenhados para emprego na técnica de TAIL-PCR visando estender esta seqüência promotora
putativa antes do início da análise funcional.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq.
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