LM, Lima©
D
E
S
C
O
B
E
R
T
A
D
E
F
Á
R
M
A
C
O
S
Etapa de
Pesquisa
Seleção do Alvo Molecular; Desenvolvimento
dos ensaios farmacológicos in vitro e in vivo;
Desenho de ligantes; Síntese; Descoberta e
Otimização do Protótipo.
Etapa de
Desenvolvimento
Etapa
Regulatória
Etapa de
Comercialização
Inicial: Realização dos ensaios pré-clínicos.
Tardia: Realização dos ensaios clínicos
(Fase I, Fase II e Fase III).
ANVISA; EMEA, FDA, etc
Marketing e vendas
3 ANOS
D
U
R
A
Ç
Ã
O
1.5 ANOS
+
5.5 ANOS
M
É
D
I
A
1 ANO
1 ANO
Cadeia de Inovação em Fármacos & Medicamentos
LM, Lima©
Química Medicinal
Química
Farmacologia
Bioinformática
Abordagem Fisiológica
Planejamento Dependente
do Biorreceptor
Planejamento Independente
do Biorreceptor
Câncer, Diabetes, Asma e Artrite
Chagas & Leishmaniose
Alvos: TKs, b-tubulinas, PDE-4, MAPK p38
LASSBio-998
LM, Lima©
São serina/treonina proteínas quinases ativadas por mitógenos responsáveis por
sinais intra- e extracelulares que regulam vários eventos dentre eles a divisão e
diferenciação celular, apoptose, produção de enzimas e mediadores envolvidos com a
resposta inflamatória;
Existem em 4 isoformas: MAPK-p38 a, b, g e d, apresentam homologia >60% na
sequência total de aa; e identidade >90% dentro do domínio quinase;
p38γ
Músculo esquelético e fisiopatologias do coração
p38δ
Pulmões, rins, testículos, pâncreas, intestino, coração, CD4+
p38β
São produzida em vários tecidos
p38α
ae b  75%
a e g  62%
a e d  61%
Amplamente produzida em várias células sistema imune e ativada em
respostas a estímulos pró-inflamatórios. É a mais bem caracterizada e
talvez a mais relevante quinase envolvida nas respostas inflamatórias.
s.
Coulthard, L.R. (2009) Trends in Molecular Medicine 1, 369.
LM, Lima©
Isoforma de
MAPK p38
Distribuição
Inibição por
SB 203580
p38α
Todas as células
+
p38β
Células T
+
p38γ
Músculo esquelético
-
p38δ
Células T, macrófagos /
monócitos e neutrófilos
-
Artrite reumatoide / Doença de Crohn / Psoríase
Alzheimer / Parkinson / Esclerose lateral amiotrófica
Câncer
Cascata de ativação da MAPK p38. MK2 (MAPK
ativada por proteína quinase 2)
(Adaptada de www.sabioscience.com)
1
Ashwell, J. D. Nature Reviews / Immunology 2006, 6, 532-540.
Zhang, J. et al. TRENDS in Pharmacological Sciences 2006, 28, 286-295.
3 Kim, E. K. et. al. Biochimica et Biophysica Acta 2010, 1802, 396-405.
2
LM, Lima©
INIBIDORES DE MAPKMAPK-p38
1ª GERAÇÃO
N
2ª GERAÇÃO
O
H
N
O
S
N
O
S
NH
N
N
NH
NH
O
SB302590
N
N
O
O
NH
NH
NH
F
não entrou em fase clínica
Bayer
Cl
GK00687Boehringer Ingelheim
hepatotóxico e carcinogênico
Inibição CYP450
O
não entraram em fase clínica
CI50= 290 nM (GK);
↓ baixa Potência (BI)
N
O
BIRB796
Boehringer
Ingelheim
Completou Fase II
(AR, DC, PS)
Descontinuado→
hepatoxicidade
LM, Lima©
INIBIDORES DE MAPKMAPK-p38
3ª GERAÇÃO
1ª GERAÇÃO
F
N
H
N
O
S
N
SB302590
Descontinuado Fase II (AR)
↓
Falta de eficácia clínica
OH
N
HO
F
F
F
N
N
NH
O
NH
O
F
N
NH2
O
NH2
O
N
F
2ª GERAÇÃO
F
NH
N
N
pamapimode (Roche)
N
O
O
O
F
VX702 (Vertex)
O
N
N
N
Cl
Scio-469
O
N
O
BIRB796
Descontinuados Fase II (AR) Falta de eficácia clínica
LM, Lima©
J. Simon C. Arthur & Steven C. Ley Nature Reviews Immunology 2013, 13, 679–692
LM, Lima©
Desenho Estrutural e Planejamento Molecular
O
S
O
N
O
CH3
bioisosterismo
de anéis
N
O
N
H
bioisosterismo
não clássico
N
fenílogo
N
N
H
H
Cl
Cl
N
N
H
H
O
O
O
O
O
N
N
H
O
N
H
O
N
LASSBio-998
N
H
N
N
H
B
bioisosterismo
de anéis
O
N
H
N
H
O
O
O
O
Cl
O
W
COMPOSTOS-ALVO
CH3
O
Cl
bioisosterismo
de anéis
CH3
O
INPI (2005)
PCT (2006)
N
A
GK00687 (1)
Piper hispidinervum
N
2
H
O
O
N
H
N
NH2
N
Ar
H
Ribeiro, I.G (1998) dados não publicados
LM, Lima©
O
S
O
N
O
CH3
N
H
N
OH
H
N
GK00687 (1)
Cl
O
SB 202190
N
N
H
O
Cl
N
CO2Et
O
O
N
H
H
N
F
N
H
F
R
Cl
15b
O
O
CH3
Tabela 2:Valores das atividades calculadas a partir do Modelo 2 de QSARDerivado
Atividade
Atividade
3D/CoMFA.
Experimental (pIC50)
Calculada (pIC50)
Sobreposição e alinhamento propostos para os derivados da uréia
analisados pelo método CoMFA. Em verde é observado o
derivado quinazolinônico 15b e em laranja é observado o derivado
da uréia LASSBio 998 (14). Código de cor: azul (N), vermelho (O)
e verde (halogênio).
da Silva, G. M. S et al. (2005) Tese de Doutorado, ICB-UFRJ
a
SB-202190 (4)
7.50
7.98
GK 00687 (9)
4.80
5.20
LASSBio 947 (11)
-
7.08
LASSBio 948 (12)
-
7.07
LASSBio 949 (13)
-
7.08
LASSBio 998 (14)
-
7.71
LASSBio 999 (15)
-
5.03
pIC50=-Log IC50, onde o IC50 é a concentração necessária para inibir 50% da atividade enzimática.
LM, Lima©
regiões em amarelo desfavorescidas por efeito estérico;
regiões em verde favorescidas por efeito estérico.
vermelho regiões de alta densidade eletrônica (cargas
negativas que favorescem a atividade); em azul regiões de
baixa densidade eletrônica (cargas parcialmente positivas que
favorescem a atividade)
LM, Lima©
Dra Nelilma C Romeiro
(Prof. Adjunto, IQ-UFRJ)
Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).
[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]
LM, Lima©
Obtenção dos compostoscompostosO
alvo O
O
O
H
HNO3 conc
t.a. / 30 min
62%
O
H
O
NO 2
isomerização
cisão-oxidativa
N
O
O
O
O
CH3
KF-Al2O3 /
EtOH
t.a. / 1h
77%
O
O
CN
NO 2
Zn, TiCl4, THF,
/ 3h30min., 84%
O
O
O
N C O
O
O
Safrol
O
O
N
Piper hispidinervum
O
O
CH3
NH
O
CH3
N
H
Tolueno / p-TsOH
Dean Stark
110° C / 48h
61%
O
N
CH3
NH2
LASSBio-998
Patente:
WO/2006/128268 (2006)
Barreiro, E.J. et al. J. Chem. Research (M) 1985, 2301-2332.
Zhou, L. et al., J. Chem. Research (S), 1998, 398
Zhou,, L. et al., Synthesis, 1998, 851
Dumas, J. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2054
LM, Lima©
Ensaio sobre o alvo: MAPK
p38
IC = 14 ± 9 μM.
A
50
A - LASSBio-998 preveniu a fosforilação de
MAPK p38 em macrófagos peritoneais
estimulados por LPS em uma concentração
dependente – in vitro, com IC50 = 14 ± 9 μM.
LASSBio-998 (M)
LPS
B
Salina
Veículo
LASSBio-998
MAPK p38 fosforilada
B - LASSBio-998 preveniu a
fosforilação de MAPK p38 em tecido
pulmonar de camundongo após a
inalação de LPS por Western blotting - in
vivo.
MAPK p38
LM, Lima©
EFEITOS DOS COMPOSTOS INIBIDORES DE p38
SOBRE A MIGRAÇÃO LEUCOCITÁRIA
Neutrófilos x (103/mL)
300
Dra Vera L G Koatz
(Professora IBQM)
In Memoriam
250
Modelo de Inflamação
Pulmonar aguda induzida por LPS
200
*
150
100
*
ED50 =150 mg/kg (via oral)
50
0
Salina
* p<0,05 versus veículo
Veículo
948
998
(200mg/kg)
LPS
Os animais foram pré-tratados com LASSBio998 i, via oral, 4h antes da inalação de LPS
(0,5 mg/mL) e o número de neutrófilos foi
avaliado 3h depois .
LM, Lima©
Ensaio in vivo: Inibição TNF e ILIL-1b
de Oliveira Lopes, Raquel, Romeiro, Nelilma Correia, de Lima, Cleverton Kleiton F., Louback da Silva, Leandro, Palhares de Miranda, Ana Luisa,
Nascimento, Paulo Gustavo B.D., Cunha, Fernando Q., Barreiro, Eliezer J., LIMA, Lídia Moreira Docking, synthesis and pharmacological activity of novel
urea-derivatives designed as p38 MAPK inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. , v.54, p.264 - 271, 2012
LM, Lima©
Ensaio in vivo: Inflamação crônica
C57 Black/6
(artrite)
72 horas
Tratamento i.p. 10 mg/kg/dia por 4
dias
150 mg zimosan na
pata esquerda
Linfonodo
Veic.
Sal
Veic.
Zimosan
Ibrahim, T. et al, Intern. Immunol., 2002, 2, 875-883
LM, Lima©
2,5
8
6
4
*
2
0
Veículo
Salina
Veículo
L-998 (100 mg/kg)
Linfócitos x 106 / mg linfonodo
Linfonodo poplíteo (mg)
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
Veículo
ZIMOSA N (150 µg)
Salina
Veículo
L-998 (100 mg/kg)
ZIMOSAN (150 µg)
Efeito do tratamento v.o. diário (8 dias)com o LASSBio-998 sobre o peso dos linfonodos Poplíteos (A) e do número
de linfócitos (B)de camundongos Balb/C que receberam uma injeção i.p. de zimosan.
LM, Lima©
Estudos de Estabilidade Química e
Solubilidade
Solução HCl 10%: 97,2%
12/20731650
mAU
254nm4nm (1.00)
1050
1000
950
900
850
800
750
700
650
600
550
500
LASSBio-998
450
400
350
300
Solubilidade aquosa =
0,093µM
250
200
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
10.0
11.0
12.0
13.0
14/3104
13/5717
11/10709
9/4041
7/19936
8/50164
0
2/10711
3/5422
4/33387
5/17255
1/3627
50
-50
0.0
6/123121
100
10/302882
150
14.0
15.0
16.0
17.0
18.0
19.0
20.0
min
Tampão fosfato: 97,9%
Aparelho: Shimadzu – LC20AD
Coluna: Kromasil 100-5C18 250-4,6 mm
Fase móvel: 80% ACN, 20% água.
Fluxo: 1mL/min
Detector: SPD-M20A (Diode Array)
Comprimento de onda: 254 nm
9/19752883
mAU
254nm,4nm (1.00)
1000
950
900
850
800
750
700
650
600
550
500
450
400
350
300
250
200
150
11/31215
10/5701
8/10864
7/225401
6/51936
4/23726
0
5/10193
1/8435
50
2/24327
3/37127
100
-50
-100
-150
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
9.0
10.0
11.0
12.0
13.0
14.0
15.0
16.0
17.0
18.0
19.0
20.0
min
LM, Lima©
t1/2= 76,8 minutos
20
10
25
LASSBio-998 (mM)
LASSBio-998 (mM)
30
LASSBio-998 (mM)
Estudos de metabolismo plasmática e
microssomal
20
15
10
5
0
0
0
30
60
90
120
150
Tempo (min)
180
0
210
30
25
t1/2= 60,6 minutos
20
Sem Cofatores
Com Cofatotes Sem
Co
15
10
5
0
60
0
90
Tempo (min)
30
120
60
90
120
Tempo (min)
Gráficos de estabilidade plasmática (A) e estabilidade metabólica em microssoma hepático de
ratos (B) concentração de LASSBio-998 vs. tempo de incubação. Análise por CLAE
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
LM, Lima©
Ancoramento molecular do LASSBio-998 na MAPK p38 (Gbinding= -29,05 kJ/mol).
[Programa Flex X; PDB Pargellis, C. et.al . Nat. Struct. Biol. 2002, 9, 268-272]
LM, Lima©
Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)
and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D
and (B) 2D ligand interactions diagram
representations. In the 3D representation the
ligands are represented by light blue sticks and
the amino acid residues are represented by grey
sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow
dashes, labeled with their respective lengths. The
protein conformations used were selected from
a previous clusterization study and covered both
DFG-in and DFG-out states, comprising a set
of five representative structures of MAPKp38α
(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and
1WBS)Program: Glide
D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
Isabella Guedes
(PhD student)
LM, Lima©
Binding modes predicted for LASSBio-998 (top)
and LASSBio-1494 (bottom) with the (A) 3D
and (B) 2D ligand interactions diagram
representations. In the 3D representation the
ligands are represented by light blue sticks and
the amino acid residues are represented by grey
sticks. The hydrogen bonds are shown as yellow
dashes, labeled with their respective lengths. The
protein conformations used were selected from
a previous clusterization study and covered both
DFG-in and DFG-out states, comprising a set
of five representative structures of MAPKp38α
(PDB IDs: 1A9U, 1MQ7, 3DT1, 1YQJ and
1WBS)Program: Glide
D= Asp; E= Glu; K= Arg; M = Met; G = Gly; T= Ser
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
Isabella Guedes
(PhD student)
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Patente: WO/2006/128268 (2006)
Dumas, J. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 2047-2050
LM, Lima©
Systemic
Circulation
Hepatic
Vein
Oral
Medication
Hepatic
Artery
Metabolismo
hidrolítico
Liver
efeito de 1ª passagem
hepático
Portal
Vein
enzimas do
metabolismo
Intestinal
Tract
efeito de 1ª passagem
intestinal
Metabolismo → Aumento da Depuração (Clearance) → Compromete Efeito Terapêutico
LM, Lima©
PRODUTO
Estudo do Metabolismo Plasmático e
Microsomal
t Plasmática
1/2
(minutos)
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
76,8
2133,0
1401,7
522,6
45,5
PRODUTO
t1/2 SEM COFATOR
(minutos)
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
66,0
407,6
1155,0
630,0
59,7
compostos mais lábeis ao metabolismo
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
75,3
533,1
138,6
74,5
32,7
metabolismo dependente de CYP450/FMO
metabolismo independente de CYP450/FMO
metabolismo dependente de CYP450/FMO/CE
LM, Lima©
metabolismo dependente
de CYP e/ou FMO
LM, Lima©
Estudo do Metabolismo Plasmático e
Microsomal
PRODUTO
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
t1/2 SEM
COFATOR
(minutos)
66
407,6
1155,0
630,0
59,7
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
75,3
533,1
138,6
74,5
32,7
Gráfico 1 – Percentual de inibição da metabolização dos compostos
LASSBio-998 (1) e LASSBio-1497 (2) x log concentração do inibidor de
CES, o composto bis-p-nitrofenilfosfato (5), utilizando a fração
microssomal hepática de ratos na ausência de cofatores.
Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ
LM, Lima©
+.
+.
+.
Rapidamente metabolizado no plasma e em
microssomas hepáticos → metabólito ativo??
LM, Lima©
+.
+.
LM, Lima©
PRODUTO
t1/2 Plasmática
(minutos)
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
76,8
2133,0
1401,7
522,6
45,5
Solubilidade aquosa
Solubilidade aquosa
0,093µM
3,349µM
compostos mais lábeis ao metabolismo hidrolítico
PRODUTO
t1/2 SEM COFATOR
(minutos)
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
66,0
407,6
1155,0
630,0
59,7
Solubilidade aquosa
0,193µM
t1/2 COM
COFATOR
(minutos)
75,3
533,1
138,6
74,5
32,7
Solubilidade aquosa
0,215 µM
Solubilidade aquosa
0,11 µM
metabolismo dependente de CYP e/ou FMO
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
Efeito de LASSBio-998 (21), LASSBio-1007 (24) e os novos análogos
(25-28) na inibição da fosforilação de MAPK p38 em células THP-1
diferenciadas com PMA .
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
IL-1beta (pg/ml)
250
200
150
100
*
50
*
*
*
*
V
LA eí
SS cul
o
LA Bi
o
SS
-9
9
B
LA io 8
SS -10
0
B
LA io 7
SS -14
94
B
LA io
SS -14
9
B
LA io 5
SS -14
9
B
io 6
-1
SB 497
20
35
80
0
LASSBio-998
LASSBio-1494
LASSBio-1495
LASSBio-1496
LASSBio-1497
LASSBio-1007
SB203580
IL-1b
(IC50 mM)
TNF
(IC50 mM)
5,1
96,6
41,7
2,0
38,6
21,8
2,0
32,6
2,5
80,2
0,0002
2,9
4,3
0,5
Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
600
400
300
200
100
*
*
*
*
*
*
0
V
LA eí
SS cul
o
LA Bi
SS o-9
9
B
LA io 8
SS 10
0
B
LA io 7
1
SS
49
B
4
LA io
SS -14
9
B
LA io 5
SS 14
9
B
io 6
-1
SB 497
20
35
80
TNF (pg/ml)
500
Fig. 1 – Análise da capacidade dos análogos do LASSBio-998 inibirem a
secreção de IL-1beta e TNF induzida pelo LPS. Células THP-1 (1x106 )
foram estimuladas com os diferentes análogos do LASSBio-998 a 10
mM. Após 30 minutos foi adicionado LPS (10 ng/ml) e as culturas
mantidas por um total de 24 horas. Os níveis de IL-1beta (A) e TNF (B)
foram avaliados por ELISA conforme instrução do fabricante (R&D
Systems). Veículo = DMSO. p ≤ 0.05 em relação ao veículo.
LM, Lima©
ETAPAS DE OTIMIZAÇÃO & SAR
LPS
LASSBio-1007
LASSBio-1495
LASSBio-998 LASSBio-1494
LASSBio-1496 LASSBio-1497
LPS+5 LPS+6a LPS+6b LPS+6c LPS+6d LPS+7 LPS+SB
pp38
p38
1.00
Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
pp38/p38
0.75
0.50
0.25
+6
L a
P
S
+6
L b
P
S
+6
L c
P
S
+6
d
L
P
S
+7
L
P
S
+S
B
P
S
+5
L
P
S
L
L
P
S
0.00
pp38 expression in THP-1 cultures after stimulation with LPS. All molecules tested
were able to decrease pp38 expression. Phosphorylation of p38 was detected by
immunoblotting using the specific antibody
LM, Lima©
LA
SS
B
14
95
io
-
30
0
10
0
g
ol
/k
*
mm
g
ol
/k
mm
g
ol
/k
mm
***
14
95
30
***
io
-
14
95
20
35
80
Carageenan 100 mg/paw
LA
SS
B
io
-
SB
***
**
LA
SS
B
2
**
ro
l
4
on
t
8
C
LA
C
on
SS
tr
ol
B
io
SB
LA
-9
2
98
03
SS
58
10
B
0
io
0
LA
-9
mm
SS
98
ol
B
30
/k
io
g
0
-1
LA
m
49
m
SS
4
ol
B
10
/k
io
g
0
-1
LA
m
4
m
SS
95
ol
B
10
/k
io
g
0
-1
LA
m
49
m
SS
6
ol
B
10
/k
io
g
0
-1
mm
49
7
ol
10
/k
g
0
mm
ol
/k
g
Intensity of Hypernociception
 mechanical threshold (g)
Hipernocicepção Mecânica Induzida por Carragenina
em camundongos
Carageenan 100 mg/paw
DI50= 90 (70115) mm ol/Kg
Imax: 6014%
6
***
***
***
0
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
LM, Lima©
LA
SS
B
io
-1
49
5
ol
/k
g
g
g
***
mm
ol
/k
mm
ol
/k
mm
*
30
0
10
0
30
***
B
io
-1
49
5
B
LA
SS
***
58
0
***
20
3
***
B
io
-1
49
5
***
SB
120
Capsaicin 1.6 mg/paw
LA
SS
A
C
on
tr
ol
C
on
tr
B
ol
io
SB
LA
-9
20
98
SS
35
1
B
80
00
i
o
LA
-9
m
m
SS
98
ol
B
3
/k
00
io
g
-1
LA
mm
49
SS
4
ol
B
10
/k
io
g
0
-1
LA
m
4
m
SS
95
ol
B
1
/k
00
io
g
-1
LA
m
4
m
SS
96
ol
B
10
/k
io
g
0
-1
m
49
m
7
ol
10
/k
g
0
mm
ol
/k
g
LA
SS
Licking (s)
Hiperalgesia Térmica Induzida por Capsaicina em
camundongos
Capsaicin 1.6 mg/paw
DI50= 234 (161339) mm ol/Kg
Imax: 534%
80
***
40
***
0
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
LM, Lima©
mBSA + CFA
mBSA + CFA
Antigen-induced arthritis (AIA)
day 21
Challenge i.a.
day 0
IM s.c.
1th
day 7
IM s.c.
* pre-treatment
2nd
5h after challenge:
measurement of mechanical hypernociception and cell migration
LM, Lima©
Antigen-induced arthritis (AIA)
LM, Lima©
Partial Ligation of Sciatic Nerve (PLSN)
7h after surgery:
measurement of
mechanical hypernociception
LM, Lima©
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Mestrado
1995-1997
1. LIMA, L. M et al. (1999) Journal
of the Brazilian Chemical Society
(1999) 10, 421-428.
2. LIMA, L. M et al. Pharmacy and
Pharmacology
Communications
(1999) 5, 673-678.
Doutorado
1997-2001
1. LIMA, L. M et al. European Journal of
Pharmaceutical Sciences (1999), 73, 281292.
2. LIMA, L. M et al. European Journal of
Medicinal Chemistry (2000) 35, 187-203.
3. LIMA, L. M et al. Synthetic Communications
(2000) 35, 3291-3306.
4.
LIMA, L. M et al. Química Nova (2001)
24, 683-688.
5. LIMA, L. M et al. Química Nova (2002)
25, 825-834.
6. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal
Chemistry Letters (2002) 12, 1533-1535.
7. LIMA, L. M et al. Bioorganic & Medicinal
Chemistry (2002) 10, 3067-3073.
8. ROCCO, P R M et al. The European
Respiratory Journal (2003) 21, 1-8.
9. BEVILAQUA, J V et al. Biochemical
Engineering Journal (2004) 21, 103-110.
10. LIMA, L. M et al. Current Medicinal
Chemistry. Anti-inflammatory & Anti-allergy
Agents (2004), 3, 09-18.
Patente
1. Uso do composto lassbio 596
e congêneres, e composições
farmacêuticas contendo os
mesmos, no tratamento da
síndrome do desconforto
respiratório agudo. 2002,
Brasil. Patente: Privilégio de
Inovação.
Número
do
registro: PI0208767, data de
depósito: 08/10/2002
2002 Menção Honrosa
(concurso de melhor Tese
de Doutorado),
Instituto de Química da
Universidade Federal do
Rio de Janeiro
LM, Lima©
CONSIDERAÇÕES FINAIS
LM, Lima©
Dra Vera L G Koatz
(Professora IBQM)
Dr. Fernando Cunha
(Profº Titular)
In Memoriam
Dr. Laurent E. Dardenne
(LNCC)
Dra. Roberta Olmo
(Fiocruz)
LM, Lima©
“Quanto menos alguém sabe sobre
o passado e o presente, mais
inseguro será o seu juízo sobre o
futuro”. (Sigmund Freud)
Instituto Nacional de
Ciência & Tecnologia
de Fármacos e Medicamentos
www.inct-nofar.ccs.ufrj.br
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Plasmático
Tabela– Tempo de meia vida plasmática de LASSBio-998
(21) e análogos (25-28) calculados a partir da expressão
t1/2 = 0,693/a, sendo a a inclinação da reta do logaritmo
neperiano da concentração da amostra vs. o tempo de
incubação
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Microssomal
Fígado
Preparação do fígado
•Centrifugação a 900 g, 30 min, 4 °C
•Centrifugação a 10.000 g, 1 h, 4 °C
Fração S9*
Ultracentrifugação 100.000 g, 1 h, 4 °C
Enzimas de
Fase I
CYP 450
FMO
CES
Fração microssomal
Quantificação
de proteínas
Fração citosólica
Quantificação
de proteínas
Enzimas de
Fase I e II
Conservação a -80° C por 6 meses
1
2
Cabrera, M. et. al. Toxicology Letters 2009, 190, 140-149.
Lavaggi, M. L. et.al. Chemical Research in Toxicology 2008, 21, 1900-1906.
* Fração S9: fração submitocondrial
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Microssomal
LM, Lima©
Estudos de Metabolismo Microssomal
Lopes, R. O. (2010) Dissertação de Mestrado, IQ-UFRJ
LM, Lima©