Análise molecular do polimorfismo
5-HTTLPR em suicidas de Belo Horizonte
Gustavo Silveira e Silva
Orientador: Humberto Corrêa da Silva Filho
Laboratório de Farmacologia Bioquímica e Molecular
Instituto de Ciências Biológicas
Universidade Federal de Minas Gerais
PAD Morfologia 2004
Belo Horizonte, 20 de Dezembro de 2004
Dados Epidemiológicos
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Maiores taxas: países da Europa Oriental e países asiáticos.
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Taxas intermediárias: Europa Central e Nórdica, América do Norte, Sudeste
Asiático.
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Menores taxas: América Latina, países árabes e alguns países asiáticos.
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Ausência de dados referentes a países africanos e outros
Dados Epidemiológicos
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1 milhão de mortes no ano 2000 → 1 morte a cada 40s;
1,5 milhão de mortes em 2020
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Entre as 10 principais causas de morte, e uma das três maiores causas na faixa
de 15 a 35 anos
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Índia e China: concentram aproximadamente 30% dos casos
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As taxas de suicídio são cerca de 3x maiores entre os homens (exceto China)
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Em 1998, foi responsável por 1,8% do custo total de doenças em todo o mundo
→ Um grande problema de saúde pública
Fatores
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Transtorno multidimensional: interação entre fatores ambientais, sociais,
genéticos e biológicos.
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Relacionam-se a componentes culturais, políticos e sócio-econômicos
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Prevalência de transtornos mentais em quase 100% dos casos (transtorno
bipolar, alcoolismo, esquizofrenia, etc.)
Porém, a transmissão do comportamento suicida faz-se de forma
independente da transmissão da doença psiquiátrica
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Influência de doenças físicas (doenças neurológicas, neoplasias, AIDS, etc.)
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Fatores sócio-demográficos (sexo, idade, situação financeira, ocupação social,
estado matrimonial, etc.)
• Fatores Genéticos
Fatores Genéticos
Diversos estudos apontam uma possível contribuição genética:
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Estudo familiar
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Estudo em uma população de suicidas
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Estudo com gêmeos
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Estudo de adoção
Fatores Genéticos (?)
Disfunção Serotoninérgica
Comportamento Suicida
(Correa e col., 2001; Correa e col., 2002)
Polimorfismos nos genes responsáveis pelo sistema serotoninérgico
Princípios da Transmissão
Serotoninérgica
BIOSSÍNTESE
(hidroxilação/descarboxilação)
ARMAZENAMENTO
LIBERAÇÃO
RECAPTURAÇÃO
DEGRADAÇÃO
RECEPTORES
O Transportador de Serotonina
(5-HTT)
- Localização: membrana pré-sináptica
- 12 domínios transmembrana
- Recaptura a serotonina da fenda
O Gene do Transportador
(5-HTT)
– Localização: cromossomo 17
– 1 sítio promotor
– 14 éxons; 31kb
• Polimorfismo na região promotora reguladora da transcrição:
5-HTTLPR (5-HTT gene-linked polymorphic region)
- 2 alelos : inserção (L, long) ou deleção (S, short) de 44 pares de base
(Heils et al 1996)
- Alelo curto (S): Transcrição reduzida do gene → menor expressão
→ menor recapturação de serotonina (Lesch et al, 1996)
O Gene do Transportador
(5-HTT)
Resultados conflitantes:
- Sem evidência estatística significante (Chong et al 2000; Courtet et al 2003; Fitch et al 2001; Geijer et al
2000; Ho et al 2000; Hranilovic et al 2003; Mann et al 2000; Ohara et al 1998; Pooley et al 2003; Preuss et al 2001; Roy et al 2001; Rujescu et al
2001; Russ et al 2000; Zalsman et al 2001)
- Maior freqüência do alelo L em suicidas depressivos (Du et al 1999, 2001; Faludi et al 2000)
- Associações entre o alelo S e tentativas violentas (Bayle et al 2003; Bellivier et al 2000; Bondy
et al 2000; Courtet et al 2001; Gorwood et al 2000)
- Associação do genótipo SS com histórico familiar de suicídio (Joiner et al 2002)
Materiais e Métodos
Objetivo
→ Estudar polimorfismos funcionais de genes potencialmente associados ao
comportamento suicida em pessoas falecidas por suicídio em Belo Horizonte.
→ Inicialmente investiga-se o polimorfismo 5-HTTLPR.
Extração do DNA
→ Amostras obtidas de tecidos humanos diversos, fornecidos pelo IML.
Materiais e Métodos
Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o 5-HTTLPR
→ Quantidades de reagentes para 1 tubo de reação:
→ Primers utilizados:
Materiais e Métodos
→ Programa utilizado para amplificação do 5-HTTLPR:
Materiais e Métodos
Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (PAGE)
→ Gel de poliacrilamida (6,5%); padrão 100pb; 5 µL amostra; 70 mV
→ Coloração pela prata
Bandas visualizadas:
500 pb
Alelo Longo (L) → 528 pb
Alelo Curto (S) → 484 pb
PAGE das amostras SU5, SU6, SU7, SU8, SU39
Resultados
Genótipos encontrados:
Genótipo LL → 10 amostras
Genótipo SS → 3 amostras
Genótipo LS → 7 amostras
Resultados
Considerações Finais
→ Pequeno número de amostras
→ Estabelecimento de grupo controle
→ Possivelmente, vários genes interagem na determinação do fenótipo;
A função serotoninérgica envolve enzimas (triptofano hidroxilase, L-aminoacido
decarboxilase, monoamino oxidases A e B),
transportadores e receptores. Assim,
variações funcionais em cada uma destas etapas, secundárias a variações
genéticas, podem estar na origem de variações na expressão do fenótipo
Obrigado pela atenção!