Reatividade de soros de pacientes com diferentes formas clínicas
de paracoccidioidomicose frente aos antígenos fracionados de
Paracoccidioides brasiliensis
Bernardo SGARBI (IC/CNPq), Alfredo M. GOES (Orientador), Susana N. DINIZ (C), Patrícia S.
CISALPINO (PQ).
Departamento de Bioquímica e Imunologia, ICB/UFMG
Departamento de Microbiologia, ICB/UFMG

Introdução

Resultados
Paracoccidioides brasiliensis é um fungo patogênico, termo-dimórfico, agente
etiológico da paracoccidioidomicose (PCM). A doença é uma micose sistêmica, de
natureza granulomatosa, endêmica e prevalente na América Latina. Há numerosos
casos relatados na Colômbia, Venezuela, e no Brasil, recordista nestes relatos, a PCM
FPLC
ocorre em diversas regiões, especialmente no sudeste - São Paulo e Minas Gerais.
Admite-se que os esporos ou conídias produzidos pelo fungo em sua fase micelial
representam a unidade infectiva de P. brasiliensis, cuja inalação (com subseqüente
conversão a levedura, na temperatura tecidual do hospedeiro) pode gerar um foco
infeccioso pulmonar, primário, capaz de eliminar ou manter fungos quiescentes. A
doença pode surgir por progressão direta do complexo primário, por reativação dos
focos quiescentes ou por reinfecção exógena, apresentando múltiplas manifestações e
duas formas clínicas progressivas são reconhecidas: a forma aguda (tipo juvenil) e a
forma crônica. O diagnóstico da PCM é realizado através da identificação de células
leveduriformes em biopsias ou em outros materiais patológicos.
A deteccão de anticorpos contra componentes de P. brasiliensis tem sido utilizada
desde 1916. Durante as décadas de 60-80 foram caracterizados constituintes
antigênicos de preparacões diversas para testes sorológicos, determinando uma fracão
específica para PCM, caracterizada posteriormente como uma glicoproteína de 43000
Grafico 1. Cromatografia líquida por troca ionica. Os picos de
eluição foram coletados separadamente e classificados como :
0-Fração 0; 6-Fração I; 12-Fração II; 20-Fração III; 30-Fração IV;
45-Fração V; 70-Fração VI.
Da (gp 43), 100 % reconhecida por soros de pacientes com PCM. Entretanto, um
reconhecimento diferencial de antígenos de Paracoccidioides brasiliensis por
anticorpos presentes nos soros de pacientes com diferentes formas clínicas de PCM
ainda não foi descrito.
Normal
EB V IV III II
Agudo
I
0 PM
- 200
- 97.4
EB V IV III II
I 0 PM
- 200
- 97.4
- 43
- 43
- 29
- 29

Agudo Tratado
Objetivo
EB V IV III II
Verificar uma resposta diferenciada de soros de pacientes de paracoccidiomicose em
I
Crônico
0 PM
- 200
diferentes formas clínicas, frente aos antígenos fracionados de Paracoccidioides
EB V IV III II
I
- 97.4
0 PM
- 200
- 97.4
brasiliensis.
- 43
- 29

Materiais e Métodos
Figura 1. Ensaios de “Western Blot” utilizando pool de soros de pacientes com diferentes formas clínicas de PCM (1:200) e
indivíduos normais, frente aos antígenos fracionados de P. brasiliensis (25 µg). A reacão foi evidenciada com anti-Ig humana
de cabra conjugada com fosfatase alcalina (1:15 000) e revelada com NBT e BCIP.
CEPA Pb 18
7 dias a 35 ºC
com agitação
repiques mensais
25 ºC

LEVEDURAS


rompimento mecânico com
pérolas de vidro (30-40 ciclos)
Conclusão
SOBRENADANTE

ultracentrifugação 37.000 rpm
4 ºC 1:30 h

Cromatografia
liquída de troca iônica, em coluna de Q-Sepharose, acoplada em sistema de
FPLC, se mostrou eficiente na separação de antígeno bruto de P. brasiliensis em frações solúveis
Extrato solúvel
Dosagem proteica
Bradford
contendo diferentes bandas proteicas.
Demonstramos,
em todas as frações, a presença de componentes antigênicos, variando de 18-
120 kDa, reconhecidos pelos soros de pacientes com paracoccidiodomicose.
FPLC
(sete frações)
Amostras de antígenos
Tanque de transferência
peptídios transferidos para
uma folha de nitrocelulose (blot)


_ _ _ _ _ _ _
peptídios separados
+ + + + + + + +
+
Evidenciamos
um reconhecimento diferenciado de duas bandas proteicas (18,4-29 kDa),
presentes nas frações III e IV, por anticorpos presentes nos soros de pacientes com a forma
Anticorpo
+
conjugado
crônica em relação aos pacientes com a forma aguda e aguda tratada,
- 43
- 29